杀松材线虫海洋放线菌HT-8的分离鉴定、培养条件及其活性物质分析

发布时间：2023-09-14 02:14

　　松树萎蔫病是松属植物的一种毁灭性疾病,松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)是松树萎蔫病的重要病原物,该疾病在全球范围内造成了巨大的经济损失和环境破坏。从自然界中寻找对松材线虫具有高致死性的微生物及其代谢产物已成为研发新型杀线虫剂的一个研究热点。本文对从青岛麦岛近海海域采集的样品采用稀释涂布平板法分离共得到21株海洋放线菌,使用浸渍法对放线菌培养滤液进行杀松材线虫活性测定,从中筛选出了1株具有较高杀线活性的放线菌HT-8。该菌株分离自海泥,其培养滤液处理松材线虫72 h,松材线虫的校正死亡率高达88.30%。通过形态学观察,生理生化特性和16S rDNA序列测定及其系统发育分析,将菌株HT-8鉴定为白蚁链霉菌(Streptomyces termitum)。采用单因素法分析菌株HT-8的最佳培养条件,结果表明,产杀线活性物质的最适培养基海水浓度、起始pH、培养温度、培养时间分别为1000 mL/L、pH7.5、25℃、7 d;最适接种体菌龄和接种量分别为48 h和6%。对培养基海水浓度、起始pH、培养温度、培养时间进行正交试验,结果表明,菌株HT-8的培养滤液杀...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
引言
第一章 材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 分离样品来源与供试虫源
        1.1.2 主要实验仪器
        1.1.3 主要实验试剂
    1.2 实验方法
        1.2.1 松材线虫的培养
        1.2.2 培养基的配制
        1.2.3 海洋放线菌的分离
        1.2.4 杀线虫放线菌菌株的筛选
        1.2.5 放线菌HT-8的分类鉴定
        1.2.6 海水浓度，初始pH，培养温度和培养时间对菌株HT-8培养滤液杀线虫活性的影响
        1.2.7 菌株HT-8培养条件的正交优化
        1.2.8 菌株HT-8菌体胞内物质杀线活性测定
        1.2.9 菌株HT-8的培养滤液中活性物质稳定性的测定
        1.2.10 菌株HT-8杀线虫活性物质提取
        1.2.11 菌株HT-8杀线虫活性物质分离和纯化
第二章 结果与分析
    2.1 菌株的分离、筛选和杀线虫活性的测定
    2.2 杀线虫海洋放线菌HT-8的分类鉴定
        2.2.1 形态特征及生理生化特性
        2.2.2 菌株HT-8的16S rDNA序列分析及系统发育树构建
    2.3 不同培养条件对菌株HT-8的培养滤液杀线虫活性影响
        2.3.1 海水浓度、初始pH值、培养温度及培养时间对菌株HT-8培养滤液杀线虫活性的影响
        2.3.2 菌龄和接种量对菌株HT-8培养滤液杀线虫活性的影响
    2.4 菌株HT-8培养条件的正交优化
    2.5 菌株HT-8菌体胞内物质杀线活性测定
    2.6 菌株HT-8的培养滤液中活性物质稳定性的测定
        2.6.1 热稳定性
        2.6.2 酸碱度稳定性
    2.7 菌株HT-8的不同溶剂提取物杀线活性分析
    2.8 菌株H-8的乙酸乙酯提取物活性成分的分离及活性测定
第三章 讨论
第四章 结论
参考文献
综述
    一、松树萎蔫病的研究历史
    二、松树萎蔫病病原体的发现
    三、松墨天牛的生物学特征
    四、松材线虫侵染松树循环路径
    五、相关细菌对松树萎蔫病的影响
    六、相关真菌对松树萎蔫病的影响
    七、松树死亡机制假说
    八、松树萎蔫病控制策略
    九、展望
    综述参考文献
攻读学位期间研究成果
致谢



本文编号：3846356