毛果杨组培再生及遗传转化体系研究

发布时间：2024-02-03 04:50

　　毛果杨(Popolus trichocarpa)具有基因组相对较小、染色体数目少、生长速度快、无性繁殖容易等特点,是第一个全基因组测序的木本植物,其遗传转化对木本植物功能基因组学的研究具有极其重要的意义。本研究分别以毛果杨组培苗的茎段和叶片作为外植体,研究了不同取材部位、接种方式及外源激素组合对不定芽诱导的影响,建立了高效的毛果杨组培再生体系。在此基础上探讨了菌液浓度、侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度及添加方式对遗传转化率的影响,建立了高效的毛果杨遗传转化体系,并对转化植株进行了检测。本文的主要研究结果如下：1.以温室培养的毛果杨嫩枝为基础材料,确定了毛果杨枝条的最适无菌处理条件。用70%酒精消毒30 sec,再用3%NaClO消毒8 min,无菌水清洗3遍,最后用无菌滤纸吸干材料表面的水分,接种到生根培养基上,15d污染率为0。2.建立了毛果杨组培苗茎段和叶片直接诱导不定芽的再生体系。茎段分化的最佳取材部位是形态学上端第二、三节茎段,不定芽分化的最适培养基为WPM+0.03 mg·L-1 6-BA+0.02 mg·L-1 IBA+0.0008 mg·L-1 TDZ,培养25 d分...

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词表
1 绪论
    1.1 引言
    1.2 杨树组培再生研究进展
        1.2.1 国外杨树组培再生研究
        1.2.2 国内杨树组培再生研究
        1.2.3 杨树组培再生途径研究
    1.3 杨树遗传转化研究进展
        1.3.1 遗传转化方法
        1.3.2 杨树遗传转化的影响因素
    1.4 毛果杨研究进展
        1.4.1 毛果杨基因相关研究
        1.4.2 毛果杨再生及遗传转化研究
    1.5 本研究的目的意义
2 毛果杨组培再生体系的建立
    2.1 材料与方法
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 试剂
        2.1.3 仪器及用具
        2.1.4 研究方法
    2.2 结果与分析
        2.2.1 材料无菌处理结果分析
        2.2.2 不同外源激素组合对茎段分化的影响
        2.2.3 茎段的取材部位对分化的影响
        2.2.4 不同外源激素组合对叶片分化的影响
        2.2.5 叶片的取材部位对分化的影响
        2.2.6 叶片的接种方式对分化的影响
        2.2.7 外源激素浓度对不定芽生根的影响
        2.2.8 再生苗的炼苗和移栽
    2.3 讨论
        2.3.1 茎段外植体的组培再生
        2.3.2 叶片外植体的组培再生
    2.4 本章小结
3 毛果杨遗传转化体系的建立
    3.1 材料与方法
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 质粒和菌株
        3.1.3 试剂
        3.1.4 仪器及用具
        3.1.5 培养基种类
        3.1.6 研究方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 卡那霉素对不定芽诱导及生根的影响
        3.2.2 头孢霉素对不定芽诱导的影响
        3.2.3 菌液浓度及侵染时间对转化率的影响
        3.2.4 共培养时间对转化率的影响
        3.2.5 乙酰丁香酮的浓度及添加方式对转化率的影响
        3.2.6 抗性植株的获得
    3.3 讨论
        3.3.1 抗生素临界浓度的选择
        3.3.2 影响遗传转化的主要因素
    3.4 本章小结
4 抗性植株检测
    4.1 材料与方法
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 试剂及配制方法
        4.1.3 仪器及用具
        4.1.4 研究方法
    4.2 结果与分析
        4.2.1 GUS染色结果
        4.2.2 PCR检测结果
        4.2.3 RT-PCR检测结果
    4.3 讨论
    4.4 本章小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3893745