柽柳组织培养及ThERF4基因抗逆功能分析

发布时间：2025-02-06 17:15

　　ERF蛋白是AP2/EREBP转录因子家族的一大成员,在植物面对逆境胁迫中起重要调控作用。但目前对ERF基因在逆境中的功能研究尚不完全清晰,因此,研究柽柳ERF基因响应高盐和干旱胁迫的机理具有重要意义。首先,优化了瞬时转化体系,侵染液最佳组合为吐温0.05%(v/v)、乙酰丁香酮120 μmol/L和菌液OD600值1.0,该条件下转化基因的表达量最高。然后利用优化的转化体系,将柽柳不同ERF基因在烟草中瞬时过表达,并经盐、旱胁迫处理,通过抗逆生理学分析,筛选出了抗逆能力强的柽柳基因ThERF4作为进一步研究的对象。进一步将ThERF4基因瞬时转化柽柳,获得瞬时过表达及抑制表达的转基因柽柳,分别在盐、旱胁迫下进行生理生化指标的测定。DAB、NBT、伊文斯蓝的染色显示ThERF4基因具有良好的抗逆能力,其过表达能够减少逆境胁迫下ROS的积累及细胞膜的损伤,而ThERF4的抑制表达正好相反。进一步的生理指标实验显示ThERF4能够调控脯氨酸、SOD、POD、可溶性糖的含量,并减少胁迫下相对电导率、H202含量、MDA含量、失水率。说明ThERF4能够通过调控SOD、POD活性减少ROS积累,...

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【部分图文】：

图２－１不同农杆菌浓度对转化效率的影响??

?东北林业大学硕士学位论文???板ｌｓ，共４５个循环。??２．３结果与分析??２．３．１不同农杆菌浓度对瞬时转化效率的影响??农杆菌浓度及侵染时间是影响遗传转化率的重要因子。因此，用不同的农杆菌侵染??浓度，通过ＧＵＳ染色和ｑＲＴ－ＰＣＲ来研究转化的ＧＵＳ基因的表达情况。如图２－....

图２－１不同农杆菌浓度对转化效率的影响??

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图２－３不同的吐温休枳分数对转化效率的影响??Ａ不同吐温体积分数对转基囚拟南芥的ＧＵＳ染色影响??

?２拟南芥瞬时侵染方法的研究???浓度上升，ＧＵＳ染色和ｑＲＴ－ＰＣＲ结果都表明其瞬时转化效率在升高，在１２〇ｎｍｏｌ／Ｌ??时，瞬时转化效率最高，当ＡＳ为１８０?ｎｍｏｌ／Ｌ时，转化效率下降。说明，瞬时转化的最??佳ＡＳ浓度为１２〇ｎｍｏｌ／Ｌ，与烟草的最适ＡＳ浓度接近。??阐....

图２－４不同的较优组合处理对转化效率的影响??Ａ不同的较优组合处理对转基因拟南芥的ＧＵＳ染色影响??

?东北林业大学硕士学位论文???７０?－??ｍ?６０１??辉?■??４０?ｉ?■■??１?３〇?］?■??Ｉ：；?１??Ｑ??．．．．．．ｉｗｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉａｉｉｗｉｉｉ．－????——?；??；一－?????１?不同ｌｉｔ温浓度处ｋ?４??图２－３?Ｂ不同的吐温体积分....

本文编号：4030631