松针降解细菌的筛选及其酶学特性的研究
发布时间：2023-03-13 21:43
我国松树种类繁多，且松针资源非常丰富，松针叶是一种可持续利用的天然再生资源。合理利用废弃松针资源，将松针资源用作土壤改良剂，合理科学地改善土壤退化，同时提高土壤生物多样性，因此松针资源的开发与利用对土壤的生态环境改善起着尤为重要的作用。 以大兴安岭松林区的腐殖土样为菌源，以松针粉末为唯一碳源的特异性培养基从自然样品中筛选特异性的菌株，以其CMCase酶活为选育指标，分离和纯化获得5株产纤维素酶活力较高的细菌。为进一步研究松针液体固体发酵提供理论依据及技术支持做坚实地基础。 通过刚果红鉴别培养基染色法，选取水解圈较大生长速度快的菌种共5株分别为2号，4号，8号，15号和18号。其中18号菌水解圈最大生长速度最快。单独测定18号的CMC酶活和FPA酶活是单菌株中最高的。 分子鉴定结果表明：应用试剂盒提取DNA，进行PCR扩增，测序后，经BLAST基因库比对，确定2号菌株是枯草芽孢杆菌亚种，4号菌株是芽孢杆菌，8号菌株是蜡样芽胞杆菌，18号菌株是芽胞短杆菌，而15号菌株是枯草芽孢杆菌。 发酵条件优化：外加碳源为蔗糖与松针粉末质量比为2:1，外加氮源为尿素，初始pH值为7.55，添加表面活性剂...
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 纤维素历程的研究
1.1.1 纤维素的结构及其来源
1.1.2 纤维素的生物降解
1.2 降解纤维素的细菌类菌株
1.2.1 纤维素的好氧性的降解菌
1.2.2 厌氧类纤维素发酵菌
1.2.3 好氧的滑行细菌
1.2.4 细菌降解纤维素的机理
1.3 纤维素降解酶的类型
1.3.1 内切型的纤维素酶
1.3.2 外切型纤维素酶
1.3.3 纤维二糖酶
1.3.4 纤维素酶的水解机理
1.3.5 影响纤维素降解的因素
1.4 复合型菌剂微生物的动态研究
1.5 表面活性剂对酶活力的影响
1.6 实验的目的和意义研究
1.6.1 实验的研究目的
1.6.2 研究意义
1.7 研究内容、方法和技术路线
1.7.1 研究内容和方法
1.7.2 技术路线
1.8 课题来源
2 材料与方法
2.1 松针纤维素降解细菌的筛选与鉴定
2.1.1 筛选菌株的来源
2.1.2 培养基的配方
2.1.3 菌株的分离与纯化
2.1.4 菌株的形态学鉴定及生理生化鉴定的研究
2.2 松针纤维素降解细菌液体发酵条件优化的研究
2.2.1 优化菌株的材料
2.2.2 配置培养基成分
2.2.3 试剂的配制
2.2.4 主要仪器
2.2.5 数据统计
2.3 实验中涉及的方法
2.3.1 纤维素酶活力的方法测定步骤
2.3.2 各种纤维素酶活性的测定方法
2.3.3 纤维素分解菌液态发酵条件优化
2.4 松针纤维素降解混合细菌2’4’8组合的酶学特性的研究
2.4.1 最适酶反应的pH值
2.4.2 pH值对松针降解细菌的稳定性
2.4.3 酶最适反应温度
2.4.4 酶的热稳定性
2.4.5 金属离子对酶活性的影响
3 实验的结果和实验分析
3.1 富集和纯化及菌株鉴定
3.1.1 形态鉴定菌株
3.1.2 菌株的生理生化鉴定
3.1.3 菌株的分子鉴定
3.1.4 16SrDNA 序列的系统发育树的构建
3.2 松针降解菌液体发酵培养研究
3.2.1 松针降解菌液体发酵培养
3.2.2 松针降解菌混合培养
3.3 混合菌株2’4’8组合产酶条件优化
3.3.1 发酵培养基的优化
3.4 混合菌株2’4’8组合纤维素酶酶学性质的研究
3.4.1 混合菌株2’4’8组合的CMC酶活力的最适pH值
3.4.2 CMC酶活力的pH值稳定性
3.4.3 羧甲基纤维素酶最适温度
3.4.4 CMC酶活力的热稳定性
3.4.5 金属离子对CMC酶活力的影响
3.5 混合菌株2’4’8组合的半纤维素酶酶学性质的研究
3.5.1 松针降解菌半纤维素酶最适pH值
3.5.2 松针降解菌半纤维素酶pH值稳定性
3.5.3 松针降解菌半纤维素酶反应的最适合温度
3.5.4 松针降解菌半纤维素酶热稳定性的测定
3.5.5 金属离子对半纤维素酶活力的影响
4 讨论
4.1 对产纤维素酶细菌的筛选及分子生物学研究
4.2 细菌产纤维素酶的制约因素
4.3 混合组合的纤维素酶及半纤维素酶酶学特性的研究
4.4 松针的应用研究
4.5 前景分析
5 结论
5.1 菌株筛选及鉴定
5.2 菌株液体发酵培养研究
5.3 混合菌株2’4’8的纤维素酶及半纤维素酶进行酶学性质的研究
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
本文编号：3762442
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 纤维素历程的研究
1.1.1 纤维素的结构及其来源
1.1.2 纤维素的生物降解
1.2 降解纤维素的细菌类菌株
1.2.1 纤维素的好氧性的降解菌
1.2.2 厌氧类纤维素发酵菌
1.2.3 好氧的滑行细菌
1.2.4 细菌降解纤维素的机理
1.3 纤维素降解酶的类型
1.3.1 内切型的纤维素酶
1.3.2 外切型纤维素酶
1.3.3 纤维二糖酶
1.3.4 纤维素酶的水解机理
1.3.5 影响纤维素降解的因素
1.4 复合型菌剂微生物的动态研究
1.5 表面活性剂对酶活力的影响
1.6 实验的目的和意义研究
1.6.1 实验的研究目的
1.6.2 研究意义
1.7 研究内容、方法和技术路线
1.7.1 研究内容和方法
1.7.2 技术路线
1.8 课题来源
2 材料与方法
2.1 松针纤维素降解细菌的筛选与鉴定
2.1.1 筛选菌株的来源
2.1.2 培养基的配方
2.1.3 菌株的分离与纯化
2.1.4 菌株的形态学鉴定及生理生化鉴定的研究
2.2 松针纤维素降解细菌液体发酵条件优化的研究
2.2.1 优化菌株的材料
2.2.2 配置培养基成分
2.2.3 试剂的配制
2.2.4 主要仪器
2.2.5 数据统计
2.3 实验中涉及的方法
2.3.1 纤维素酶活力的方法测定步骤
2.3.2 各种纤维素酶活性的测定方法
2.3.3 纤维素分解菌液态发酵条件优化
2.4 松针纤维素降解混合细菌2’4’8组合的酶学特性的研究
2.4.1 最适酶反应的pH值
2.4.2 pH值对松针降解细菌的稳定性
2.4.3 酶最适反应温度
2.4.4 酶的热稳定性
2.4.5 金属离子对酶活性的影响
3 实验的结果和实验分析
3.1 富集和纯化及菌株鉴定
3.1.1 形态鉴定菌株
3.1.2 菌株的生理生化鉴定
3.1.3 菌株的分子鉴定
3.1.4 16SrDNA 序列的系统发育树的构建
3.2 松针降解菌液体发酵培养研究
3.2.1 松针降解菌液体发酵培养
3.2.2 松针降解菌混合培养
3.3 混合菌株2’4’8组合产酶条件优化
3.3.1 发酵培养基的优化
3.4 混合菌株2’4’8组合纤维素酶酶学性质的研究
3.4.1 混合菌株2’4’8组合的CMC酶活力的最适pH值
3.4.2 CMC酶活力的pH值稳定性
3.4.3 羧甲基纤维素酶最适温度
3.4.4 CMC酶活力的热稳定性
3.4.5 金属离子对CMC酶活力的影响
3.5 混合菌株2’4’8组合的半纤维素酶酶学性质的研究
3.5.1 松针降解菌半纤维素酶最适pH值
3.5.2 松针降解菌半纤维素酶pH值稳定性
3.5.3 松针降解菌半纤维素酶反应的最适合温度
3.5.4 松针降解菌半纤维素酶热稳定性的测定
3.5.5 金属离子对半纤维素酶活力的影响
4 讨论
4.1 对产纤维素酶细菌的筛选及分子生物学研究
4.2 细菌产纤维素酶的制约因素
4.3 混合组合的纤维素酶及半纤维素酶酶学特性的研究
4.4 松针的应用研究
4.5 前景分析
5 结论
5.1 菌株筛选及鉴定
5.2 菌株液体发酵培养研究
5.3 混合菌株2’4’8的纤维素酶及半纤维素酶进行酶学性质的研究
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
本文编号：3762442
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/nygclw/3762442.html
