温度诱导SVCV侵染EPC细胞蛋白组学分析及Hsp70对其复制作用研究
发布时间：2020-08-25 03:12
【摘要】：温度不但与动物的生长息息相关,对于疾病的发生也密切相关。温度作为病毒感染的诱因,会影响一些病毒的复制过程,对于鲤春病毒血症病毒(Spring Viraemia of Carp Virus,SVCV),鱼体发病温度为16℃-17℃,高温或者低温都不易于发病。而温度对SVCV感染的影响研究较少。热休克蛋白,作为重要的温度效应蛋白,参与众多病毒的侵染过程,对SVCV复制的影响研究更少。鉴于此,本试验探讨不同温度对SVCV感染鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)活性的影响以及蛋白组学变化,通过筛选验证,初步探究了Hsp70其复制的影响,结果有利于深入了解SVCV的致病机制,为下一步SVCV的治疗以及预防提供新的策略。1.温度对SVCV感染EPC细胞活性和凋亡的影响MTT法检测细胞活性变化,细胞处理温度为16℃、21℃、26℃、31℃和36℃,时间为12h、24h和36h;相对于26℃,随着温度的变化,时间的增加,细胞活性逐渐降低;感染病毒后,高温状态下细胞活性随时间的增加,降低更显著;病毒滴度结果显示在31℃滴度最高。26℃和31℃,感染时间为24h,测定细胞凋亡,SVCV感染EPC细胞后,能够显著增加死细胞和晚期凋亡比例,温度升高时作用更显著;31℃时,SVCV-G基因表达量显著增加。2.温度对SVCV感染EPC细胞蛋白组学分析26℃和31℃,感染时间为24h,测定蛋白组学变化。结果表明:26℃SVCV对比26℃组,发现差异蛋白35个,其中19个上调表达,16个下降表达;31℃SVCV对比31℃组,发现差异蛋白786个,其中383个上调表达,403个下降表达;31℃对比26℃组,发现差异蛋白624个,其中314个上调表达,310个下调表达;31℃SVCV对比26℃SVCV组,发现差异表达蛋白220个,其中93上调表达,127个下调表达;差异蛋白主要功能注释集中在regulation of insulin secretion involved in cellular response,cell redox homeostasis,spindle assembly,DNA replication initiation等功能;差异蛋白富集通路主要富集在Protein processing in endoplasmic reticulum,Glutamatergic synapse,Melanogenesis等通路;对Protein processing in endoplasmic reticulum部分差异蛋白结果验证与蛋白组学一致。3.Hsp70敲降对SVCV复制的影响通过对蛋白组学结果进行筛选,对蛋白在内质网加工通路中Hsp70基因进行敲降;结果显示,Hsp70敲降显著调节TLR3、IRF3和IFN-β表达量,对TLR9、IRF7和IFN-α调节不显著;Hsp70敲降使得SVCV-G表达量显著升高,可能与Hsp70调节了TLR3和IRF3表达量,诱导了IFN-β降低表达有关。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S943
【图文】：
每个温度分为加病毒和不加病毒（0.1MOI），处理时间为 12h，24h 和 36h；结果如图1.1（A）(未染毒)和图 1.1（B）（染毒）；病毒滴度结果图 1.1（C）。结果显示：相对于 26℃，随着温度的变化，时间的增加，细胞活性逐渐降低；感染病毒后，高温状态下细胞活性随时间的增加，降低更显著；病毒滴度结果显示在 31℃滴度最高。
流式细胞检测在 26℃和 31℃下，SVCV 感染前后细胞凋亡情况1.2: Flow cytometry detection of apoptosis before and after SVCV-infection at 表 1-2：不同温度下 SVCV 对 EPC 细胞凋亡的影响ble 1-2: Effect of SVCV on apoptosis of EPC cells at different tempera细胞状态UL（死细胞） UR（晚期凋亡） LL（活细胞） LR（早6.323±0.345 3.578±0.350 88.131±1.051 1.102±VCV8.139±0.823* 9.100±1.196* 78.740±0.879* 2.526±16.063±0.480* 7.655±0.481* 75.963±1.625* 0.916±VCV22.286±0.814* 18.276±0.752* 58.188±0.933* 0.816±列数据标有*表示与 26℃对比差异显著。he same column data marked with * indicates a significant difference compared
.3：SVCV-G 在感染 EPC 细胞 24h，26℃和 31℃下的表达量re 1.3: Expression of SVCV-G gene in EPC cells for 24 h at 26.3 讨论对于养殖业，温度成为限制其发展的主要因素。激，热应激状态下会动物的采食量会减少，高温同引起动物死亡[49]；低温状态下会导致动物处于冷动物的采食量会增加，因而增加饲养成本，过度的，也会导致动物死亡[50]。鱼类属于变温动物，自受生长环境所影响较大，水温既影响鱼类生长发育养殖具有很重要的意义。水温快速或长期持续升高成一定的伤害，如虹鳟鱼适宜生长水温为 12-18℃衡状态，表现出生理机能减退及炎症反应，时间过现，温度的升高会影响幼鱼的进食状态，温度过高影响，而虹鳟的温度耐受范围大于硬头鳟[51]。周
本文编号：2803187
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S943
【图文】：
每个温度分为加病毒和不加病毒（0.1MOI），处理时间为 12h，24h 和 36h；结果如图1.1（A）(未染毒)和图 1.1（B）（染毒）；病毒滴度结果图 1.1（C）。结果显示：相对于 26℃，随着温度的变化，时间的增加，细胞活性逐渐降低；感染病毒后，高温状态下细胞活性随时间的增加，降低更显著；病毒滴度结果显示在 31℃滴度最高。
流式细胞检测在 26℃和 31℃下，SVCV 感染前后细胞凋亡情况1.2: Flow cytometry detection of apoptosis before and after SVCV-infection at 表 1-2：不同温度下 SVCV 对 EPC 细胞凋亡的影响ble 1-2: Effect of SVCV on apoptosis of EPC cells at different tempera细胞状态UL（死细胞） UR（晚期凋亡） LL（活细胞） LR（早6.323±0.345 3.578±0.350 88.131±1.051 1.102±VCV8.139±0.823* 9.100±1.196* 78.740±0.879* 2.526±16.063±0.480* 7.655±0.481* 75.963±1.625* 0.916±VCV22.286±0.814* 18.276±0.752* 58.188±0.933* 0.816±列数据标有*表示与 26℃对比差异显著。he same column data marked with * indicates a significant difference compared
.3：SVCV-G 在感染 EPC 细胞 24h，26℃和 31℃下的表达量re 1.3: Expression of SVCV-G gene in EPC cells for 24 h at 26.3 讨论对于养殖业，温度成为限制其发展的主要因素。激，热应激状态下会动物的采食量会减少，高温同引起动物死亡[49]；低温状态下会导致动物处于冷动物的采食量会增加，因而增加饲养成本，过度的，也会导致动物死亡[50]。鱼类属于变温动物，自受生长环境所影响较大，水温既影响鱼类生长发育养殖具有很重要的意义。水温快速或长期持续升高成一定的伤害，如虹鳟鱼适宜生长水温为 12-18℃衡状态，表现出生理机能减退及炎症反应，时间过现，温度的升高会影响幼鱼的进食状态，温度过高影响，而虹鳟的温度耐受范围大于硬头鳟[51]。周
【参考文献】
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