拟穴青蟹肌质钙结合蛋白的过敏性研究
发布时间：2020-12-18 13:25
蟹类作为一种营养价值高、肉质鲜美的水产品,广受消费者喜爱,但是随之引起的食物过敏发病率持续上升。本文以拟穴青蟹（Scylla paramamosain）为研究对象,对青蟹中的新型过敏原肌质钙结合蛋白（sarcoplasmic calcium binding protein,SCP）进行重组表达,对其抗原表位进行定位分析,探讨酶法交联反应、美拉德反应对重组SCP（rSCP）致敏性的影响,以期为过敏性疾病诊断和低致敏性食品开发提供理论依据。本研究首先从拟穴青蟹肌肉中纯化出分子量约20 kDa的SCP,通过免疫新西兰大白兔获得兔抗青蟹SCP血清,纯化得到兔抗SCP-IgG多克隆抗体。构建表达载体pET-22b-SCP,在E.coli Rossetta菌株中诱导表达获得可溶性的rSCP。圆二色谱、抑制性ELISA、免疫杂交分析结果显示,rSCP与天然SCP（nSCP）均呈典型的α/β蛋白特征,在Ig E结合活性方面能够相互抑制,在高温（60℃100℃）、弱酸（pH 2.05.0）、强碱（pH 10.011.0）条件下均易发生聚合...
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号表
第1章 引言
1.1 食物过敏概况
1.2 食物过敏反应机制及诊断
1.3 水产食物过敏及其过敏原
1.4 水产过敏原抗原表位的研究进展
1.5 食物过敏原的加工消减技术
1.6 本研究的目的和意义
第2章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 动物
2.1.2 甲壳类过敏患者血清
2.1.3 主要仪器设备
2.1.4 主要试剂
2.1.5 主要溶液配制
2.2 方法
2.2.1 SCP的纯化及抗体制备
2.2.2 SCP的重组表达
2.2.3 SCP的性质分析
2.2.4 SCP的抗原表位分析
2.2.5 rSCP的食品加工处理
2.2.6 统计分析
第3章 结果与分析
3.1 拟穴青蟹SCP的纯化及抗体制备
3.1.1 拟穴青蟹SCP的纯化鉴定
3.1.2 SCP多克隆抗体纯化及效价分析
3.2 拟穴青蟹SCP的重组表达
3.2.1 重组表达载体构建
3.2.2 重组蛋白的表达、纯化及鉴定
3.3 SCP的性质分析
3.3.1 rSCP与nSCP的pH稳定性及热稳定性比较
3.3.2 rSCP与nSCP的二级结构比较
3.3.3 rSCP与nSCP的IgE结合活性比较
3.3.4 不同来源SCP的免疫交叉反应分析
3.3.5 rSCP小鼠敏化模型分析
3.3.6 rSCP对患者外周血嗜碱性粒细胞的激活能力分析
3.4 SCP抗原表位分析
3.4.1 噬菌体随机肽库亲和淘选
3.4.2 SCP的IgG抗原表位分析
3.4.3 SCP的IgE抗原表位分析
3.4.4 IgG表位与IgE表位的分析比较
3.5 食品加工处理对rSCP致敏性的影响
3.5.1 食品加工处理条件的优化
3.5.2 食品加工处理对rSCP结构及致敏性的影响
3.5.3 食品加工产物的消化稳定性分析
3.5.4 美拉德反应产物的糖化位点鉴定
3.5.5 树突细胞对rSCP加工产物的吞噬情况
3.5.6 rSCP加工产物对嗜碱性粒细胞的活化能力分析
第4章 讨论
4.1 SCP的重组表达与性质分析
4.2 SCP的抗原表位分析
4.3 食品加工处理对SCP结构与表位的影响
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
附录
在学期间科研成果情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]水产食物过敏原及其抗原表位的研究进展[J]. 张永霞,杨阳,蔡秋凤,孙乐常,曹敏杰,刘光明. 中国渔业质量与标准. 2015(05)
[2]噬菌体展示技术定位主要食物过敏原表位的研究进展[J]. 袁水林,李欣,陈红兵,高金燕,熊鼎. 食品工业科技. 2015(03)
[3]拟穴青蟹新型过敏原肌质钙结合蛋白的纯化、鉴定及分子克隆[J]. 毛海燕,蔡娜,陈亨莉,曹敏杰,蔡秋凤,刘光明. 食品科学. 2014(03)
[4]加工处理对鲢小清蛋白免疫活性的影响[J]. 蔡秋凤,王锡昌,郭城,沈海旺,刘光明,曹敏杰. 水产学报. 2013(02)
[5]食物过敏原构象性表位鉴别的研究进展[J]. 李欣,陈红兵. 食品科学. 2012(17)
[6]凡纳滨对虾次要过敏原肌质钙结合蛋白的质谱鉴定及免疫交叉反应[J]. 王彩霞,黄建芳,向军俭,孙一帆,吕思,郭洁. 细胞与分子免疫学杂志. 2012(08)
[7]甲壳类动物4种过敏原的序列分析、抗原表位预测及三维结构建模[J]. 沈海旺,陈亨莉,曹敏杰,蔡秋凤,毛海燕,苏文金,刘光明. 免疫学杂志. 2012(07)
[8]虾蛋白过敏实验动物模型的建立[J]. 王丽娟,胡志和,陈照丽,周汛,吴海明. 食品科学. 2010(19)
[9]鱼类主要过敏原小清蛋白的检测[J]. 蔡秋凤,刘光明,王瑞芳,王锡昌,苏文金,曹敏杰. 中国免疫学杂志. 2010(08)
[10]邻苯二甲酸酐化学修饰对辣根过氧化物酶催化活性的影响[J]. 宋海燕,尹友谊. 分子催化. 2009(05)
博士论文
[1]中国人群蒿花粉相关食物过敏精准诊断的研究[D]. 邓珊.北京协和医学院 2016
[2]鸡蛋卵转铁蛋白线性表位定位及热加工对其结构与过敏原性的影响[D]. 佟平.南昌大学 2011
硕士论文
[1]皱纹盘鲍丝氨酸蛋白酶的基因克隆、体外表达及其免疫调控作用[D]. 胡健健.集美大学 2017
[2]章鱼新型过敏原研究[D]. 陈仲玮.集美大学 2016
[3]拟穴青蟹过敏原精氨酸激酶的抗原表位分析研究[D]. 杨阳.集美大学 2015
[4]多酚氧化酶交联对花生过敏原蛋白Ara h 2致敏性的影响研究[D]. 韩远龙.南昌大学 2013
[5]克氏原螯虾过敏原的性质研究[D]. 陈亨莉.集美大学 2013
[6]拟穴青蟹精氨酸激酶的过敏性及其构效关系的初步研究[D]. 毛海燕.集美大学 2013
[7]章鱼过敏原的研究[D]. 沈海旺.集美大学 2012
[8]拟穴青蟹过敏原的性质研究[D]. 余惠琳.集美大学 2011
[9]虾类过敏原的活性分析及其抗原表位的研究[D]. 郑礼娜.中国海洋大学 2011
[10]牛乳中α-乳白蛋白的表位定位研究[D]. 文学方.南昌大学 2010
本文编号：2924073
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号表
第1章 引言
1.1 食物过敏概况
1.2 食物过敏反应机制及诊断
1.3 水产食物过敏及其过敏原
1.4 水产过敏原抗原表位的研究进展
1.5 食物过敏原的加工消减技术
1.6 本研究的目的和意义
第2章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 动物
2.1.2 甲壳类过敏患者血清
2.1.3 主要仪器设备
2.1.4 主要试剂
2.1.5 主要溶液配制
2.2 方法
2.2.1 SCP的纯化及抗体制备
2.2.2 SCP的重组表达
2.2.3 SCP的性质分析
2.2.4 SCP的抗原表位分析
2.2.5 rSCP的食品加工处理
2.2.6 统计分析
第3章 结果与分析
3.1 拟穴青蟹SCP的纯化及抗体制备
3.1.1 拟穴青蟹SCP的纯化鉴定
3.1.2 SCP多克隆抗体纯化及效价分析
3.2 拟穴青蟹SCP的重组表达
3.2.1 重组表达载体构建
3.2.2 重组蛋白的表达、纯化及鉴定
3.3 SCP的性质分析
3.3.1 rSCP与nSCP的pH稳定性及热稳定性比较
3.3.2 rSCP与nSCP的二级结构比较
3.3.3 rSCP与nSCP的IgE结合活性比较
3.3.4 不同来源SCP的免疫交叉反应分析
3.3.5 rSCP小鼠敏化模型分析
3.3.6 rSCP对患者外周血嗜碱性粒细胞的激活能力分析
3.4 SCP抗原表位分析
3.4.1 噬菌体随机肽库亲和淘选
3.4.2 SCP的IgG抗原表位分析
3.4.3 SCP的IgE抗原表位分析
3.4.4 IgG表位与IgE表位的分析比较
3.5 食品加工处理对rSCP致敏性的影响
3.5.1 食品加工处理条件的优化
3.5.2 食品加工处理对rSCP结构及致敏性的影响
3.5.3 食品加工产物的消化稳定性分析
3.5.4 美拉德反应产物的糖化位点鉴定
3.5.5 树突细胞对rSCP加工产物的吞噬情况
3.5.6 rSCP加工产物对嗜碱性粒细胞的活化能力分析
第4章 讨论
4.1 SCP的重组表达与性质分析
4.2 SCP的抗原表位分析
4.3 食品加工处理对SCP结构与表位的影响
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
附录
在学期间科研成果情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]水产食物过敏原及其抗原表位的研究进展[J]. 张永霞,杨阳,蔡秋凤,孙乐常,曹敏杰,刘光明. 中国渔业质量与标准. 2015(05)
[2]噬菌体展示技术定位主要食物过敏原表位的研究进展[J]. 袁水林,李欣,陈红兵,高金燕,熊鼎. 食品工业科技. 2015(03)
[3]拟穴青蟹新型过敏原肌质钙结合蛋白的纯化、鉴定及分子克隆[J]. 毛海燕,蔡娜,陈亨莉,曹敏杰,蔡秋凤,刘光明. 食品科学. 2014(03)
[4]加工处理对鲢小清蛋白免疫活性的影响[J]. 蔡秋凤,王锡昌,郭城,沈海旺,刘光明,曹敏杰. 水产学报. 2013(02)
[5]食物过敏原构象性表位鉴别的研究进展[J]. 李欣,陈红兵. 食品科学. 2012(17)
[6]凡纳滨对虾次要过敏原肌质钙结合蛋白的质谱鉴定及免疫交叉反应[J]. 王彩霞,黄建芳,向军俭,孙一帆,吕思,郭洁. 细胞与分子免疫学杂志. 2012(08)
[7]甲壳类动物4种过敏原的序列分析、抗原表位预测及三维结构建模[J]. 沈海旺,陈亨莉,曹敏杰,蔡秋凤,毛海燕,苏文金,刘光明. 免疫学杂志. 2012(07)
[8]虾蛋白过敏实验动物模型的建立[J]. 王丽娟,胡志和,陈照丽,周汛,吴海明. 食品科学. 2010(19)
[9]鱼类主要过敏原小清蛋白的检测[J]. 蔡秋凤,刘光明,王瑞芳,王锡昌,苏文金,曹敏杰. 中国免疫学杂志. 2010(08)
[10]邻苯二甲酸酐化学修饰对辣根过氧化物酶催化活性的影响[J]. 宋海燕,尹友谊. 分子催化. 2009(05)
博士论文
[1]中国人群蒿花粉相关食物过敏精准诊断的研究[D]. 邓珊.北京协和医学院 2016
[2]鸡蛋卵转铁蛋白线性表位定位及热加工对其结构与过敏原性的影响[D]. 佟平.南昌大学 2011
硕士论文
[1]皱纹盘鲍丝氨酸蛋白酶的基因克隆、体外表达及其免疫调控作用[D]. 胡健健.集美大学 2017
[2]章鱼新型过敏原研究[D]. 陈仲玮.集美大学 2016
[3]拟穴青蟹过敏原精氨酸激酶的抗原表位分析研究[D]. 杨阳.集美大学 2015
[4]多酚氧化酶交联对花生过敏原蛋白Ara h 2致敏性的影响研究[D]. 韩远龙.南昌大学 2013
[5]克氏原螯虾过敏原的性质研究[D]. 陈亨莉.集美大学 2013
[6]拟穴青蟹精氨酸激酶的过敏性及其构效关系的初步研究[D]. 毛海燕.集美大学 2013
[7]章鱼过敏原的研究[D]. 沈海旺.集美大学 2012
[8]拟穴青蟹过敏原的性质研究[D]. 余惠琳.集美大学 2011
[9]虾类过敏原的活性分析及其抗原表位的研究[D]. 郑礼娜.中国海洋大学 2011
[10]牛乳中α-乳白蛋白的表位定位研究[D]. 文学方.南昌大学 2010
本文编号：2924073
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