卵形鲳鲹TNFSF6的原核表达、纯化与多克隆抗体的制备

发布时间：2021-07-31 03:44

　　为了研究卵形鲳鲹肿瘤坏死因子配体6（TNFSF6）的功能,本研究构建了TNFSF6的原核表达载体并制备了其多克隆抗体,首先通过PCR扩增技术扩增获得了TroTNFSF6的开放阅读框序列,并构建了原核表达重组质粒pET-TroTNFSF6,随后将重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株BL21中,进行原核表达并获得重组蛋白rTroTNFSF6.结果显示,重组蛋白rTroTNFSF6大小约46.5 kDa,其最适诱导温度为20℃,诱导时间为8 h,IPTG的最佳浓度为0.6 mmol/L.可溶性分析表明,重组蛋白rTroTNFSF6主要在沉淀中,以包涵体的形式存在.将纯化后的重组蛋白rTroTNFSF6免疫小鼠以制备多克隆抗体,ELISA检测结果表明其效价高达1∶32 000.本研究为进一步探究卵形鲳鲹TNFSF6的功能奠定了基础. 

【文章来源】：海南大学学报(自然科学版). 2020,38(02)

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 质粒和菌株
        1.1.3 实验试剂与仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 引物设计
        1.2.2 卵形鲳鲹TNFSF6基因的获得与序列分析
        1.2.3 重组质粒的构建
        1.2.4 原核重组蛋白的诱导表达与纯化
        1.2.5 多克隆抗体的制备
        1.2.6 多克隆抗体效价检测
2 结 果
    2.1 卵形鲳鲹TNFSF6基因的获得
    2.2 重组质粒的构建与鉴定
    2.3 原核重组蛋白的诱导表达与纯化
    2.4 多克隆抗体效价检测
3 讨 论



本文编号：3312703