基于细胞培养筛选抗对虾白斑综合征病毒（WSSV）中草药及其实验效果评价

发布时间：2023-05-03 15:03

　　随着对虾养殖规模的扩大、养殖环境的恶化，对虾病毒病大范围暴发，探索对虾病毒的感染机制、致病机理、传播途径等是防止其进一步曼延的基础，尽管国内外许多专家学者在对虾病毒性疾病防控技术上做出了不懈的努力，取得了一定的研究成果，但对虾疾病并未取得理想的防治效果。目前，随着细胞分子生物学、基因工程、计算机技术等学科的发展，出现了高效、快速的药物筛选模型，在新药的筛选和研发中发挥了积极的作用。结合细胞培养技术筛选有抗对虾白斑综合征病毒作用的中草药，防止对虾病毒性疾病的大肆传播，将为对虾养殖业的快速稳定发展提供有力的技术支持。 1.刀额新对虾原代淋巴细胞培养及其感染白斑综合征病毒（WSSV）的病理特征 配制改良的1.5×L-15培养基对刀额新对虾（Metapenaeus ensis，又名基围虾）淋巴组织进行体外培养，初步建立药物筛选的细胞平台。同时，使用蔗糖密度离心法提取WSSV病毒粒子，以纯化的病毒感染淋巴细胞，倒置显微镜、荧光显微镜、透射电子显微镜下观察接种病毒后细胞的病理变化，为药物筛选提供判断依据。结果表明，使用添加SME、FBS、EGF、bFGF、青霉素钠和硫酸链霉素的1.5×L-15培养...

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摘要
Abstract
引言
第一章 文献综述
    1. 对虾白斑综合征病毒（WSSV）
        1.1. WSSV 的大小及形态结构
        1.2. WSSV 的致病机理
        1.3. 机体感染 WSSV 后的症状及病理变化
        1.4. WSSV 的防治措施
    2. 对虾细胞培养
        2.1. 对虾细胞培养的研究历程
        2.2. 培养基的选择
        2.3. 对虾细胞培养的应用
    3. 抗病毒中草药
        3.1. 抗病毒中草药的作用机理
        3.2. 抗病毒中草药的活性成分
        3.3. 抗病毒中草药的应用
    4. 药物筛选技术的研究
        4.1. 整体动物筛选模型
        4.2. 组织器官水平筛选模型
        4.3. 细胞水平筛选模型
        4.4. 高通量药物筛选模型
        4.5. 高内涵药物筛选模型
    5. 立题依据、研究内容和意义
第二章 刀额新对虾原代淋巴细胞培养及其感染白斑综合征病毒（WSSV）的病理特征
    1. 前言
    2. 材料与方法
        2.1. 实验材料
            2.1.1. 实验动物
            2.1.2. 实验仪器
            2.1.3. 实验药品
        2.2. 实验方法
            2.2.1. 虾肌提取液（SME）的制备
            2.2.2. 培养基的配制
            2.2.3. 对虾淋巴组织原代培养
            2.2.4. 病毒粗提液的制备
            2.2.5. 对虾 WSSV 阳性检测
            2.2.6. WSSV 的纯化
            2.2.7. WSSV 感染原代细胞
            2.2.8. 病变细胞固定
            2.2.9. 细胞荧光染色
    3. 结果
        3.1. 对虾 WSSV 的阳性检测
        3.2. 对虾细胞的原代培养
        3.3. 病毒粒子的负染
        3.4. 感染 WSSV 后的淋巴细胞
        3.5. 感染病毒后淋巴细胞的电镜切片
        3.6. 感染病毒后淋巴细胞的荧光染色观察
    4. 讨论
    5. 本章小结
第三章 抗对虾白斑综合征病毒中草药的初步筛选
    1. 前言
    2. 材料与方法
        2.1. 实验材料
            2.1.1. 原代细胞
            2.1.2. 中草药
            2.1.3. 实验仪器
            2.1.4. 实验药品
        2.2 实验方法
            2.2.1. 中草药的煎制
            2.2.2. 中草药与 WSSV 的混合液感染细胞
            2.2.3. 细胞基因组 DNA 的提取
            2.2.4. 标准质粒的构建
            2.2.5. 标准曲线的绘制
            2.2.6. 实时荧光定量 PCR 检测
            2.2.7. 荧光染料染凋亡细胞
    3. 结果
        3.1. 标准品的构建
        3.2. 标准曲线的绘制
        3.3. 实时荧光定量 PCR 检测细胞中病毒拷贝数
        3.4. 细胞的荧光染色观察
    4. 讨论
    5. 本章小结
第四章 抗对虾白斑综合征病毒复方中草药的筛选及临床验证
    1. 前言
    2. 材料与方法
        2.1. 实验材料
            2.1.1. 原代细胞
            2.1.2. 中草药
            2.1.3. 实验动物
        2.2. 实验方法
            2.2.1. 中草药安全浓度的确定
            2.2.2. 复方中草药与 WSSV 的混合液感染细胞
            2.2.3. 实验用药饵的制作
            2.2.4. 复方中草药的临床验证
            2.2.5. 样品的固定与保存
    3. 结果
        3.1. 中草药安全浓度的确定
        3.2. 抗 WSSV 复方中草药的临床应用效果
        3.3. 组织的超微病理观察
    4. 讨论
    5. 本章小结
问题与展望
参考文献
致谢
硕士期间学术成果



本文编号：3806933