副溶血弧菌DsbA蛋白功能的研究

发布时间：2024-03-05 00:55

　　副溶血弧菌是一种短杆菌,革兰氏染色呈阴性,具有嗜盐性。其主要的栖息地在海水中,是近海岸常见的食源性病原菌。临床上主要通过食用被副溶血弧菌污染的生的或未熟的海产品而感染,能够引起人呕吐、腹泻、头痛、伤口感染,甚至会导致败血症。对动物主要引起水生动物疾病,例如对虾、鲍鱼、蟹类等,造成动物大量死亡。为研究副溶血弧菌二硫键氧化还原蛋白VpDsbA的氧化性和还原性,首先将编码VpDsbA蛋白的目的基因VP3054(VpdsbA1)和VPA1271(VpdsbA2)克隆至原核表达载体pET-28a上,进而转化到E.coli BL21(DE3)中,进行蛋白原核表达,并使用镍柱亲和层析的方法,纯化出VpDsbA1和VpDsbA2蛋白。利用纯化后的蛋白制备VpDsbA1和VpDsbA2多克隆抗体,为后续试验的开展奠定基础。为了进一步研究VpDsbA的体外功能,采用胰岛素作为底物测定还原酶活性的方法,确定VpDsbA具有还原酶活性,且VcDsbA>VpDsbA1>EcDsbA>VpDsbA2。利用谷胱甘肽(GSH/GSSG)处理蛋白并根据相应的公式,从而计算出VpDsbA1的氧还电位大小...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2.1A.重组载体pSL1301的PCR（VpdsbA2-n载体pSL1301图谱；C.重组载体pSL1302的PC鉴定；D.重组载

第二章VpDsbA蛋白表达2.3结果与分析2.3.1重组表达载体的构建与鉴定将VpdsbA1和VpdsbA2的PCR产物和HindⅢ和NdeⅠ、HindⅢ进行双酶切之后DH5α中，得到重组载体pSL1302和pS基因的上游引物VpdsbA1-nosignal....

图2.215%SDS-PAGE检测蛋白VpDsbA1、VpDsbA2纯化结果

副溶血弧菌DsbA蛋白功能的研究Figure2.1A.IdentificationofrecombinantplasmidpSL1301byPCR（VpdsbA2-nosignal-Fwd-NdeⅠ，T7-Terminal）;B.Themapofrec....

图2.3VpDsbA1和VpDsbA2多克隆抗体制备结果特异性检测Figure2.3PreparationresultverificationdetectionofVpDsbA1andVpDsbA2

图2.3VpDsbA1和VpDsbA2多克隆抗体制备结果特异性检测Figure2.3PreparationresultverificationdetectionofVpDsbA1andVpDsbA注：M为蛋白分子量标准4讨论构建的重组载体要成功表达....

图3.1不同菌株DsbA蛋白二硫键还原酶活性对比

其中：E0`GSH/GSSG=-240mV，R=8.314JK-1mol，T=298K，n=2，F=9.648×104Cmol-13.3结果与分析3.3.1VpDsbA蛋白还原酶活性测定通过胰岛素作为底物，将不同蛋白分别用PBS缓冲液稀释，使用酶标仪连续读数的....

本文编号：3919431