罗非鱼gsdf在性腺的表达及其在性别决定中的功能
发布时间：2024-05-29 06:22
TGF-p超家族成员在脊椎动物的生殖、发育、和生长等方面均具有重要作用。gsdf (gonadal somaderived factor)是TGF-p超家族新成员,以往的研究表明gsdf仅存在于硬骨鱼类和腔棘鱼类,且主要表达于性腺。Gsdf功能研究以往多是通过分析其在性腺的表达模式来推测它对于性别决定与分化的作用,鲜有研究通过缺失功能(loss of function)和获得功能(gain of function)两方面研究Gsdf对性别决定与分化的影响。尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)是重要的世界性养殖鱼类,具有XX/XY性别决定类型。因易于获得单性鱼苗以及全基因组测序的公开,罗非鱼已成为研究鱼类性别决定与分化的良好实验模型。本研究从基因组水平和性腺转录组水平对罗非鱼gsdf进行分离鉴定,并做进一步的生物信息学分析；通过RT-PCR、real-time PCR和免疫组化等方法分析gsdf/Gsdf在罗非鱼中的表达模式；使用转基因过表达和CR1SPR/Cas9介导的基因敲除两种方法,从正反两方面对Gsdf进行功能研究,以揭示Gsdf在罗非鱼性别决定与分化中的作用...
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文縮略词
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 脊椎动物的性别决定
1.1 哺乳类性别决定
1.2 鸟类性别决定
1.3 爬行类性别决定
1.4 两栖类性别决定
1.5 鱼类性别决定
2 性别决定基因的研究进展
2.1 SRY/Sry
2.2 Dmrt1
2.3 Foxl2
2.4 DMY
2.5 DM-W
2.6 amhY
2.7 amhr Ⅱ
2.8 sdY
2.9 gsdyY
3 硬骨鱼类gsdf研究现状
4 科学问题的提出和本研究的目的意义
第二章 罗非鱼gsdf/Gsdf分离及表达的初步研究
1 前言
2 材料、仪器与方法
2.1 实验动物
2.2 实验试剂和仪器
2.3 有关试剂的配制
2.4 实验方法
2.4.1 罗非鱼gsdf基因的分离
2.4.2 gsdf基因结构分析
2.4.3 gsdf氨基酸序列比对
2.4.4 gsdf系统进化分析
2.4.5 gsdf共线性分析
2.4.6 总RNA提取
2.4.7 第一链cDNA的合成
2.4.8 罗非鱼gsdf组织表达模式分析
2.4.9 罗非鱼性腺个体发育过程中gsdf的表达
2.4.10 免疫组化检测罗非鱼性腺组织中Gsdf表达
3 结果与分析
3.1 gsdf基因结构分析
3.2 gsdf氨基酸同源性比对
3.3 gsdf系统进化分析
3.4 gsdf共线性分析
3.5 gsdf组织表达模式分析
3.6 gsdf在不同时期性腺中的表达
3.7 Gsdf在罗非鱼性腺发育过程中的细胞定位
4 讨论
第三章 罗非鱼Gsdf功能的初步研究
1 前言
2 材料、仪器与方法
2.1 实验动物
2.2 实验试剂和仪器
2.3 有关试剂的配制
2.4 实验方法
2.4.1 罗非鱼gsdf CRISPR/Cas9敲除
2.4.2 罗非鱼性腺过表达gsdf
2.4.3 gsdf突变F1代的建立
3 结果与分析
3.1 敲除序列的选择以及突变检测
3.2 阳性敲除鱼的筛选和敲除效率统计
3.3 Gsdf缺失产生不完全性逆转
3.4 3月龄XY个体Gsdf缺失阳性鱼性腺免疫组化检测结果
3.5 6月龄XY个体Gsdf敲除阳性鱼性腺免疫组化检测结果
3.6 Gsdf缺失阳性鱼血清雌激素水平上调雄激素水平下调
3.7 转基因过表达Gsdf的筛选和效率统计
3.8 转基因过表达Gsdf阳性个体发生性逆转
3.9 gsdf突变F1代鱼检测
4 讨论
结论
参考文献
致谢
在读期间所发表的论文
在读期间参加科研情况
本文编号：3984191
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文縮略词
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 脊椎动物的性别决定
1.1 哺乳类性别决定
1.2 鸟类性别决定
1.3 爬行类性别决定
1.4 两栖类性别决定
1.5 鱼类性别决定
2 性别决定基因的研究进展
2.1 SRY/Sry
2.2 Dmrt1
2.3 Foxl2
2.4 DMY
2.5 DM-W
2.6 amhY
2.7 amhr Ⅱ
2.8 sdY
2.9 gsdyY
4 科学问题的提出和本研究的目的意义
第二章 罗非鱼gsdf/Gsdf分离及表达的初步研究
1 前言
2 材料、仪器与方法
2.1 实验动物
2.2 实验试剂和仪器
2.3 有关试剂的配制
2.4 实验方法
2.4.1 罗非鱼gsdf基因的分离
2.4.2 gsdf基因结构分析
2.4.3 gsdf氨基酸序列比对
2.4.4 gsdf系统进化分析
2.4.5 gsdf共线性分析
2.4.6 总RNA提取
2.4.7 第一链cDNA的合成
2.4.8 罗非鱼gsdf组织表达模式分析
2.4.9 罗非鱼性腺个体发育过程中gsdf的表达
2.4.10 免疫组化检测罗非鱼性腺组织中Gsdf表达
3 结果与分析
3.1 gsdf基因结构分析
3.2 gsdf氨基酸同源性比对
3.3 gsdf系统进化分析
3.4 gsdf共线性分析
3.5 gsdf组织表达模式分析
3.6 gsdf在不同时期性腺中的表达
3.7 Gsdf在罗非鱼性腺发育过程中的细胞定位
4 讨论
第三章 罗非鱼Gsdf功能的初步研究
1 前言
2 材料、仪器与方法
2.1 实验动物
2.2 实验试剂和仪器
2.3 有关试剂的配制
2.4 实验方法
2.4.1 罗非鱼gsdf CRISPR/Cas9敲除
2.4.2 罗非鱼性腺过表达gsdf
2.4.3 gsdf突变F1代的建立
3 结果与分析
3.1 敲除序列的选择以及突变检测
3.2 阳性敲除鱼的筛选和敲除效率统计
3.3 Gsdf缺失产生不完全性逆转
3.4 3月龄XY个体Gsdf缺失阳性鱼性腺免疫组化检测结果
3.5 6月龄XY个体Gsdf敲除阳性鱼性腺免疫组化检测结果
3.6 Gsdf缺失阳性鱼血清雌激素水平上调雄激素水平下调
3.7 转基因过表达Gsdf的筛选和效率统计
3.8 转基因过表达Gsdf阳性个体发生性逆转
3.9 gsdf突变F1代鱼检测
4 讨论
结论
参考文献
致谢
在读期间所发表的论文
在读期间参加科研情况
本文编号：3984191
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