草鱼抗病毒转基因P 0 代的构建和鱼类Chordin基因的克隆及其对金鱼尾型的影响
发布时间：2024-06-01 10:32
目前,鱼类育种领域的一个重要方向是基因功能和转基因研究。通过发掘重要性状主效基因或其基因型,开展基因与性状关联分析或转基因研究,从而选育出性状优良的新品种,有利于鱼类的养殖产业不断进步与发展。为探索草鱼抗出血病新技术,本研究采用衣壳蛋白靶向灭活(Capsid-targeted viral inactivation,CTVI)策略,利用Tgf2转座子元件,构建了带爪蟾EF1α和鲤热休克蛋白70的2种不同启动子的CTVI转基因质粒p Tgf2-EF1α-VP3-SN和p Tgf2-Hsp70-VP3-SN。该2种质粒均含有草鱼GCRV病毒衣壳蛋白VP3与金黄色葡萄球菌核酸酶(Staphylococcus nuclease,SN)融合表达阅读框。通过将2种CTVI转基因质粒与体外合成的Tgf2转座酶5’加帽m RNA共同显微注射入草鱼1-2细胞期受精卵,获得了带2种不同启动子的CTVI转基因草鱼群体。PCR和测序结果显示,2种转基因阳性草鱼基因组中均含有外源GCRV病毒衣壳蛋白VP3与金黄色葡萄球菌核酸酶SN基因片段,阳性率分别为40.2%和37.0%,表明Tgf2转座子已成功介导CTVI融...
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
引言
第一章 草鱼呼肠孤病毒衣壳蛋白靶向灭活转基因P0代的构建
1.1 材料和方法
1.1.1 实验材料
1.1.2 转基因质粒p Tgf2- EF1α-VP3-SN的构建
1.1.3 转基因质粒p Tgf2-Hsp70P-VP3-SN的构建
1.1.4 Tgf2转座酶m RNA的体外转录
1.1.5 显微注射
1.1.6 转基因阳性个体的检测与筛选
1.2 实验结果与分析
1.2.1 转基因质粒p Tgf2-EF1α-VP3-SN和p Tgf2-Hsp70-VP3-SN的构建
1.2.2 转基因草鱼阳性个体的观察与检测
1.2.3 转基因p Tgf2- EF1α-VP3-SN质粒草鱼阳性个体检测
1.2.4 转基因p Tgf2-Hsp70-VP3-SN质粒草鱼阳性个体检测
1.3 讨论
1.3.1 选用EF1α 和Hsp70启动子构建转基因载体的原因
1.3.2 Tgf2转座系统可提高草鱼CTVI转基因的效率
1.3.3 抗草鱼出血病转基因P0代构建的潜在价值
第二章 团头鲂Chordin基因c DNA全序列的克隆及功能研究
2.1 实验材料、仪器和试剂
2.1.1 实验用鱼和胚胎
2.1.2 主要仪器
2.1.3 主要生物化学试剂
2.2 实验方法
2.2.1 团头鲂胚胎及成鱼组织总RNA的提取
2.2.2 团头鲂Chordin基因c DNA全长克隆
2.2.3 逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光定量PCR分析
2.2.4 整胚原位杂交
2.2.5 饥饿与生长激素处理
2.2.6 序列比对及进化树构建
2.3 实验结果与分析
2.3.1 团头鲂Chordin基因c DNA全长克隆与分析
2.3.2 团头鲂Chordin基因氨基酸序列同源性及分子进化分析
2.3.3 团头鲂Chordin基因的m RNA表达分析
2.3.4 饥饿和生长激素处理结果分析
2.4 讨论
第三章 Chordin A基因对金鱼及其杂交鱼尾型的影响研究
3.1 实验材料与仪器
3.1.1 实验用鱼、胚胎及质粒
3.1.2 实验仪器
3.1.3 实验试剂
3.2 实验方法
3.2.1 分子检测及测序
3.2.2 整胚原位杂交
3.2.3 Chordin A基因的敲除
3.3 实验结果与分析
3.3.1 金鱼及其杂交鱼PCR扩增结果分析
3.3.2 金鱼及其杂交鱼品系尾型及Chordin A基因型分析
3.3.3 双尾型金鱼P0代杂交后代表型的分析
3.3.4 整胚原位杂交结果比较
3.3.5 单尾型Chordin A基因的敲除及检测
3.4 讨论
结论与展望
参考文献
附录：英文缩略语表
致谢
在校期间发表论文
本文编号：3985763
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
引言
第一章 草鱼呼肠孤病毒衣壳蛋白靶向灭活转基因P0代的构建
1.1 材料和方法
1.1.1 实验材料
1.1.2 转基因质粒p Tgf2- EF1α-VP3-SN的构建
1.1.3 转基因质粒p Tgf2-Hsp70P-VP3-SN的构建
1.1.4 Tgf2转座酶m RNA的体外转录
1.1.5 显微注射
1.1.6 转基因阳性个体的检测与筛选
1.2 实验结果与分析
1.2.1 转基因质粒p Tgf2-EF1α-VP3-SN和p Tgf2-Hsp70-VP3-SN的构建
1.2.2 转基因草鱼阳性个体的观察与检测
1.2.3 转基因p Tgf2- EF1α-VP3-SN质粒草鱼阳性个体检测
1.2.4 转基因p Tgf2-Hsp70-VP3-SN质粒草鱼阳性个体检测
1.3 讨论
1.3.1 选用EF1α 和Hsp70启动子构建转基因载体的原因
1.3.2 Tgf2转座系统可提高草鱼CTVI转基因的效率
1.3.3 抗草鱼出血病转基因P0代构建的潜在价值
第二章 团头鲂Chordin基因c DNA全序列的克隆及功能研究
2.1 实验材料、仪器和试剂
2.1.1 实验用鱼和胚胎
2.1.2 主要仪器
2.1.3 主要生物化学试剂
2.2 实验方法
2.2.1 团头鲂胚胎及成鱼组织总RNA的提取
2.2.2 团头鲂Chordin基因c DNA全长克隆
2.2.3 逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光定量PCR分析
2.2.4 整胚原位杂交
2.2.5 饥饿与生长激素处理
2.2.6 序列比对及进化树构建
2.3 实验结果与分析
2.3.1 团头鲂Chordin基因c DNA全长克隆与分析
2.3.2 团头鲂Chordin基因氨基酸序列同源性及分子进化分析
2.3.3 团头鲂Chordin基因的m RNA表达分析
2.3.4 饥饿和生长激素处理结果分析
2.4 讨论
第三章 Chordin A基因对金鱼及其杂交鱼尾型的影响研究
3.1 实验材料与仪器
3.1.1 实验用鱼、胚胎及质粒
3.1.2 实验仪器
3.1.3 实验试剂
3.2 实验方法
3.2.1 分子检测及测序
3.2.2 整胚原位杂交
3.2.3 Chordin A基因的敲除
3.3 实验结果与分析
3.3.1 金鱼及其杂交鱼PCR扩增结果分析
3.3.2 金鱼及其杂交鱼品系尾型及Chordin A基因型分析
3.3.3 双尾型金鱼P0代杂交后代表型的分析
3.3.4 整胚原位杂交结果比较
3.3.5 单尾型Chordin A基因的敲除及检测
3.4 讨论
结论与展望
参考文献
附录：英文缩略语表
致谢
在校期间发表论文
本文编号：3985763
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3985763.html
