无核葡萄胚挽救育种与分子标记辅助选择应用

发布时间：2020-04-15 18:15

【摘要】：为了探究更适合的无核葡萄胚挽救亲本,创制一批无核葡萄新种质,本研究选用6个种子败育型无核葡萄品种作为母本,3个有核葡萄品种做父本,配置8个杂交组合,运用胚挽救技术,进行离体胚珠培养、胚培养、胚萌发、成苗、炼苗移栽,在胚挽救工作中一共取回的杂交果粒数5524个,离体接种的胚珠6632个,获得发育的离体幼胚1297个,获得357个胚挽救杂种株系。采用分子标记辅助选择,使用无核标记对杂交后代进行早期鉴定,取得以下结果:父母本的基因型对胚挽救均有影响。‘摩尔多瓦’做父本时,母本为‘红宝石无核’的杂交组合胚发育率(19.19%)和成苗率(9.58%)最高,‘无核白鸡心’(5.84%,3.28%)、‘火焰无核’(胚发育率:5.54%,成苗率:1.32%)、‘奇妙无核’(胚发育率:2.60%,成苗率:0.94%)做母本的杂交组合胚挽救效率依次递减。以‘阳光玫瑰’为父本的杂交组合中,‘火焰无核’(胚发育率:5.49%,成苗率:3.30%)做母本的组合胚发育率和成苗率高于‘赫什无核’(胚发育率:4.41%,成苗率:1.04%)做母本的组合。‘北冰红’做父本时,以‘波尔莱特’(胚发育率:7.11%,成苗率:3.56%)为母本的杂交组合胚发育率和成苗率均高于以‘赫什无核’(胚发育率:3.81%,成苗率:1.17%)为母本的组合。‘阳光玫瑰’做父本的杂交组合胚发育率较高但成苗率较低。母本基因型对胚挽救效率的影响显著,父本基因型对胚挽救效率影响较小。使用GSLP1无核标记快速检测火焰无核×摩尔多瓦、波尔莱特×北冰红、红宝石无核×摩尔多瓦三个组合的子代株系,2-4、2-8、5-7、6-64、6-99这5个株系扩增出569bp特异性条带,初步确定为无核株系。
【图文】：

技术路线

每次更换花粉品种前，将手、镊子等用75%酒精喷淋，更换新的脱脂棉，避免花粉混杂污染。根据母本的授粉日期，采集杂种果实。图2-2 田间杂交过程Figure 2-2 Field hybridization processA.去雄前花序；B.去雄后花序；C.柱头出现粘液；D.人工授粉；E.挂牌、套袋；F.取幼果A. Inflorescence before emasculation；B. Inflorescence after emasculation；C. The stigma has mucus onit；D. Artificial pollination；E. Hang tag 、Set of paper bag ；F. Take the young fruit2.2.1.3葡萄胚挽救步骤参考课题组前人研究成果，不同杂交组合的果实发育到一定时间后将幼果采收回实验室。用剪刀将果穗上所有的果实从果柄处剪下，计数后将幼果放到干净的网兜中，在清水下冲洗2-4 h，将果粒及网兜用75%酒精喷淋后放入超净工作台，再转移到丝口瓶中待消毒。用75%酒精浸泡果粒30 s，倒出酒精，用灭菌蒸馏水将果粒冲洗一遍。加入1%浓度的次氯酸钠溶液没过所有果粒，浸泡20 min，其间定时摇晃丝口瓶，使消毒效果更充分彻底
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S663.1

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本文编号：2628835