红花草莓茎尖组培快繁与叶片离体再生体系建立

发布时间：2020-05-26 12:39

【摘要】：草莓属植物开白花,红花草莓(Fragaria×Potentilla)为属间杂种,花朵呈红色或粉色,色彩鲜艳,是一种观赏兼食用的新型花卉,可应用于园林绿化及室内盆栽观赏,具有良好观赏价值与开发潜力。本试验以红花草莓品种‘四季红’的匍匐茎茎尖为外植体,分析了培养基、外源激素等对初代培养、继代增殖和生根培养的影响,建立了红花草莓无菌试管苗离体快繁体系,为红花草莓的良种繁育打下了基础,对实现红花草莓工厂化繁苗具有重要意义。同时以‘四季红’、‘粉佳人’、‘俏佳人’、‘粉公主’、‘小桃红’、‘红玫瑰’、‘莓红’、‘SF14’、‘26SF’、‘X1-3’10个品种品系叶片为外植体,分析了基因型、植物生长调节剂、暗培养、接种方式和AgNO_3浓度对愈伤组织诱导、不定芽分化和植株再生的影响,建立了红花草莓叶片高效离体再生体系。主要研究结果如下:在红花草莓‘四季红’茎尖培养中,通过比较1/2MS、MS、MS+BA 0.5 mg·L~(-1)三种初代培养基对‘四季红’茎尖萌发率的影响发现,MS和MS+BA 0.5 mg·L~(-1)为初代培养基的茎尖萌发率基本没有差异,均显著高于1/2MS,分别为64.43%和65.33%,其中MS+BA 0.5 mg·L~(-1)为初代培养基可产生少量增殖现象。比较了不同激素组合处理对红花草莓‘四季红’继代扩繁及生长发育状况的影响,获得继代扩繁的最适培养基为:MS+BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1),增殖系数为4.23,平均株高为3.80 cm。最佳生根培养基为:1/2MS+NAA 0.1 mg·L~(-1),生根率达到98.50%,平均根数为18.23条。驯化5d后将组培苗移栽至细沙:蛭石=1:1的沙床中,28 d后统计成活率为83.9%,且植株生长旺盛根系发育良好。以10个红花草莓基因型的叶片为外植体进行离体培养,建立了红花草莓叶片离体再生体系。结果表明,基因型是影响红花草莓叶片不定芽分化的主要因素。在比较的10个红花草莓基因型中,6个再生出了不定芽,不定芽分化率由高到低依次为‘粉佳人’‘俏佳人’‘26SF’‘14SF’‘莓红’‘小桃红’。比较不同激素配比对叶片愈伤组织及不定芽诱导的影响,综合效果来看TDZ诱导效果良好,且TDZ与NAA的组合效果好于IBA组合,品种‘粉佳人’叶片愈伤组织及不定芽诱导的最适培养基为:MS+TDZ 1.0 mg·L~(-1)+NAA 0.2 mg·L~(-1)。在此培养基上不定芽分化率最高达到44.57%,平均每叶片再生2.93个不定芽;叶片分别以近轴面向下放置和远轴面向下放置两种方式进行接种,结果表明接种方式对叶片愈伤组织诱导率没有影响。但远轴面向下放置时,叶中部拱起呈桥状,叶边缘伤口接触培养基能加速诱导进程,当培养至14 d时开始萌发愈伤组织,55 d时开始着生不定芽。在叶片近轴面向下放置时,叶面呈U字型,叶边缘不能接触培养基,诱导速度相对较慢;比较不同暗培养天数对叶片再生不定芽的诱导,发现暗培养14 d能有效提高不定芽分化率,此时的不定芽分化率为63.67%,平均叶片再生不定芽数为3.27个。当暗培养天数大于14 d时不定芽分化率呈下降趋势,暗培养28 d时已显著低于对照组仅为10.12%。通过在培养基内添加一定浓度的AgNO_3发现,当AgNO_3浓度为2 mg·L~(-1)时可提高叶片的再生频率,但随着浓度的继续升高,反而会抑制叶片不定芽再生。
【图文】：

红花草,红玫瑰,品系,品种

材料与方法2 材料与方法.1 试验材料试验所用材料均取自于沈阳农业大学草莓资源圃，红花草莓的品种品系包括‘四’、‘粉佳人’、‘俏佳人’、‘粉公主’、‘小桃红’、‘红玫瑰’、‘莓红SF14’、‘26SF’、‘X1-3’。以上 10 种试材于 2017 年 9 月种植于温室，次年移栽至露地，正常水肥管理，5 月-7 月抽生匍匐茎，采集 10 种试材幼嫩匍匐茎茎无菌操作室接种茎尖，建立无菌试管苗。叶片离体培养直接取至茎尖试管苗的叶E

红花草,茎尖,品种,侧芽

并有少量萌发侧芽部分于基部呈红色，更适用于初代培养（图2 C）。但相对继代增殖中的侧芽萌发率较少，时间也较长，可能是由于消毒处理时对茎尖也产生了毒害作用。表 1 初代培养基对红花草莓品种‘四季红’茎尖萌发的影响Table 1 Effect of primary media on the stem tip germination of red-flowered strawberry 'Sijihong'培养基代号Media codes培养基Media接种数No. of stem tipsincubated萌发数No. of stem tipsgerminated萌发率（%）Germinationrate生长状况Growth statusA1 1/2MS 30 10.33±1.89 b 34.43±3.89 b 长势较弱，褐化较严重A2 MS 30 19.67±3.16 a 64.43±6.67 a 长势良好，少量褐化A3 MS+BA0.5 mg·L-130 19.67±2.79 a 65.33±5.77 a 长势良好，，少量褐化，少量萌发侧芽注：不同小写字母表示在 0.05 水平上差异显著，下同。Note：Different lowercase indicate significant differences at the 0.05 level, the same as below.图 2 红花草莓品种‘四季红’茎尖在不同培养基上的萌发情况A.1/2MS；B. MS；C. MS+BA0.5 mg·L-1Fig. 2 Germination of stem tip of red-flowered strawberry ‘Sijihong’on different mediaA.1/2MS; B. MS; C. MS+BA0.5 mg·L-1A1BC1
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S682

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