“哈斯”油梨离体再生体系初探

发布时间：2020-06-03 14:04

【摘要】：油梨(Persea Americana.Mill)营养价值丰富,是热带亚热带水果。建立和形成高效稳定的离体再生体系是进行遗传转化和培育优良品种的前提和基础。油梨的离体再生较为艰难,在一定程度上妨碍了油梨现代生物技术育种的进程。通过离体培养,可为油梨建立快速、不受季节限制的繁殖方式。本试验以“哈斯”油梨为试材,利用茎段、叶片等为外植体,通过对激素种类及其浓度配比、基本培养基类型和外植体类型等一系列因素的研究,初步建立了“哈斯”油梨(Persea Americana.Mill‘Hass’)离体培养体系,为后期“哈斯”及其它品种系油梨离体再生体系研究和优良品种育种工作提供理论借鉴意义。通过试验得出以下研究结果:利用诱导形成愈伤组织建立分化不定芽体系:(1)适宜消毒灭菌方法:选取生长期(3~8月)的外植体(叶片、叶柄、带芽/不带芽茎段),75%酒精处理20~30 s+无菌水冲洗2次+0.1%HgCl_2处理5~6mins+无菌水冲洗4~5次;(2)适宜诱导愈伤组织的培养基:MS+1.0 mg·L~-11 6-BA+1.0 mg·L~-11 NAA+30g·L~(-1)蔗糖+7 g·L~(-1)琼脂(84%),pH=5.8±0.1,黑暗处理;(3)愈伤组织诱导最佳的外植体类型:茎段最佳(72.7%),叶柄次之(66.3%),叶片和茎尖较差(30~33.4%);(4)愈伤组织诱导最佳的基本培养基类型:H培养基诱导效果最佳(72.1%),N_6和MS培养基次之(分别为61.4%和39.5%),WPM和B_(5改)较差(分别为27.6%和16.2%),1/2MS诱导率最低(11.6%);(5)叶片直接出芽:光照条件下,在H养基中(附加不同浓度6-BA和NAA)叶片外植体难以直接诱导不定芽,但可诱导愈伤组织;(6)愈伤组织分化不定芽:在MS分化培养基中(含有6-BA和NAA),愈伤组织难以分化不定芽;(7)油梨花药愈伤组织诱导:冷处理后的“哈斯”油梨花药在愈伤组织诱导培养基中(以MS、N_6、H、WPM和B_(5改)为基本培养基,添加1.0 mg·L~-11 6-BA、2.0 mg·L~(-1) 2,4-D、0.2 mg·L~(-1) NAA、5 g·L~(-1) CH、30 g·L~(-1)蔗糖和7 g·L~(-1)琼脂)难以诱导形成愈伤组织。利用带芽茎段(半木质化)进行快速繁殖:(1)适宜消毒灭菌方法:选取生长期(3~8月)的外植体,75%酒精处理30~40s+无菌水冲洗2次+0.1%HgCl_2处理6~8 mins+无菌水冲洗4~5次;(2)适宜诱导侧芽的基本培养基:MS基本培养基(73.7%),H基本培养基次之(66.6%);(3)适宜诱导侧芽的培养基:MS+1.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.2 mg·L~(-1)IBA+30 g·L~(-1)蔗糖+7 g·L~(-1)琼脂,pH=5.8±0.1;(4)适宜增殖培养基:MS+1.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.1 mg·L~(-1) NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+7g·L~(-1)琼脂,pH=5.8±0.1;(5)“哈斯”油梨试管苗生根有困难,后期需作进一步的研究探讨。
【图文】：

“哈斯”油梨离体再生体系初探

不同浓度2,4-D/NAA对叶片愈伤组织诱导的影响

油梨,哈斯,干鲜重,字母表示

图 3-2 不同浓度 2,4-D/NAA 下“哈斯”油梨叶片愈伤组织干鲜重Figure 3-2 Dry and fresh weight of callusi nduced by different concentration of 2,4-D/NAA via leexplant from avocado 'Hass'注：同一列数据后的不同字母表示差异显著(p<0.05)，下图同。
【学位授予单位】：仲恺农业工程学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S667.9

【参考文献】