常山胡柚的“祖宗树”组织培养及其起源的研究

发布时间：2020-06-23 12:08

【摘要】：常山胡柚(Citrus changshan-huyou Y.B.Chang)起源于浙江省常山县,为柑桔属的一个新种,具有较高的营养价值和药用价值。常山胡柚是天然杂交种,有性繁殖会出现明显的性状分离现象,亲本的优良性状难以保持。另外,常山胡柚的起源至今尚不明确。因此,本论文开展了常山胡柚的“祖宗树”组织培养再生植株的研究;并利用国际上鉴定物种的通用引物,对常山胡柚的起源进行了分析。主要研究结果如下:(1)首先利用常山胡柚普通栽培品种的幼叶、幼茎和幼胚作为外植体进行培养,结果表明,幼胚是组织培养再生植株的最佳外植体。据此,选取常山胡柚的“祖宗树”幼胚为外植体,置于冰箱4℃处理6 d,在0.5 mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA的MS固体培养基上诱导愈伤组织频率最高(78%);愈伤组织在1mg/L 6-BA的MS固体培养基中诱导丛生芽的分化率最高(78%);丛生芽在0.4 mg/L IAA的MS固体培养基中,诱导生根效果最好。成功地建立了常山胡柚的“祖宗树”植株再生快繁体系,并得到了大量常山胡柚的“祖宗树”组培苗。(2)选取常山胡柚的“祖宗树”、常山胡柚普通栽培品种、甜橙、衢橘、柚和i*柑作为材料,分别提取其基因组DNA。利用叶绿体特征基因片段(rbc L、rpo C1、rpo B和trn H-psb A)、5.8S r RNA和28S r RNA基因间隔区片段(ITS)、核糖体特征基因片段(18S r RNA-5S r RNA)和线粒体特征基因片段(nad1 exon BC)序列设计引物,进行目的基因片段的扩增,分别获得了叶绿体特征基因序列24条(rbc L、rpo C1、rpo B和trn H-psb A各6条),基因间隔区序列6条,核糖体特征基因序列6条,线粒体特征基因序列6条。利用Clustal W和MAGE 7.0制作系统进化树,ITS系统进化树结果显示常山胡柚“祖宗树”与甜橙和i*柑遗传距离最近;常山胡柚普通栽培品种与衢橘遗传距离最近。rbc L系统进化树结果显示常山胡柚“祖宗树”与柚的遗传距离最近;常山胡柚普通栽培品种与甜橙的遗传距离最近。rpo C1系统进化树结果显示常山胡柚“祖宗树”与常山胡柚普通栽培品种遗传距离最近。rpo B系统进化树结果显示常山胡柚“祖宗树”与柚的遗传距离最近;常山胡柚普通栽培品种与常山胡柚“祖宗树”遗传距离最近。trn H-psb A系统进化树结果显示常山胡柚“祖宗树”与甜橙的遗传距离最近;常山胡柚普通栽培品种与常山胡柚“祖宗树”遗传距离最近。18S-5S r RNA系统进化树结果显示,常山胡柚“祖宗树”与柚的遗传距离最近;常山胡柚普通栽培品种与柚的遗传距离最近。nad1 exon B-C系统进化树结果显示常山胡柚“祖宗树”与普通栽培常山胡柚、甜橙和i*柑的遗传距离最近,常山胡柚普通栽培品种与甜橙和i*柑的遗传距离最近。综合上述结果,显示常山胡柚“祖宗树”与甜橙、柚、衢橘和i*柑遗传距离均较近,常山胡柚“祖宗树”可能起源多种杂交;常山胡柚普通栽培品种来源于常山胡柚“祖宗树”,但与祖宗树并非完全一致,可能是在选育常山胡柚普通栽培品种时,常山胡柚不断地与甜橙、柚、衢橘和i*柑进行了杂交。本研究成功建立了常山胡柚的“祖宗树”植株再生技术体系,为保存和利用“祖宗树”这一特有的种质资源提供了基础;另外,本研究结果显示常山胡柚为甜橙、柚、衢橘和i*柑等多重自然杂交形成的物种,研究结果对常山胡柚的育种和优良性状的开发具有重要的意义。
【学位授予单位】：杭州师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S666.3
【图文】：

常山胡柚“祖宗树”Fig.1.1“ancestrytree”ofCitruschangshan-huyouY.B.Chang

常山胡柚的“祖宗树”组织培养及其起源的研究

幼叶培养AB

【参考文献】