平菇菌株提纯复壮技术应用效果研究

发布时间：2020-07-01 01:16

【摘要】：本试验以平菇“99”菌株为试验材料,采用组织分离、尖端分离、原生质体再生技术分别进行提纯复壮技术的应用效果进行研究,试验共获得59个分离菌株,经过初步筛选得到19个优势菌株;进一步对19个优势菌株进行生理、生化、真实性及农艺性状等检测,获得了性状优良的提纯复壮菌株11个,主要研究结果如下:(1)利用组织分离技术获得4个菌株,菌丝长速、漆酶活性等性状测定结果表明,4个复壮菌株在漆酶活性、生物学产量菌丝生长速度等方面均优于出发对照菌株;4个复壮菌株在酯酶同工酶和ISSR电泳图谱中与对照菌株无显著差异。综合农艺性状进行筛选获得三个优势复壮菌株,分别命名为“PoZ1”、“PoZ2”、“PoZ3”。(2)利用尖端菌丝分离技术获得3个分离菌株,菌丝长速、漆酶活性等性状测定结果表明,3个复壮菌株在漆酶活性、发酵液生物产量、生物学产量等方面均优于出发对照菌株;3个复壮菌株母种、栽培种菌丝日平均生长速度均快于出发对照菌株;有2个菌株在原种菌丝日平均生长速度快于出发对照菌株;3个复壮菌株在酯酶同工酶和ISSR电泳图谱中与对照菌株无显著差异。综合农艺性状进行筛选获得两个优势复壮菌株分别命名为“PoJ1”和“PoJ2”。(3)运用原生质体再生技术分离得到50个菌株,通过对50个菌株进行菌丝长速、菌丝颜色、菌落形态等筛选获得12个优势复壮菌株,进一步对12个复壮菌株的菌丝长速、漆酶活性等性状研究表明,10个复壮菌株母种菌丝和原种菌丝日平均生长速度显著优于对照菌株,6个菌株在栽培种菌丝日平均生长速度方面优于对照菌株,12个复壮菌株在漆酶活性、菌丝生物产量、第一潮菇产量等方面均优于出发对照菌株,12个复壮菌株在酯酶同工酶和ISSR电泳图谱中与对照菌株无显著差异。综合农艺性状进行筛选获得6个优势复壮菌株,分别命名为“Po11”、“Po23”、“Po26”、“Po30”、“Po45”、“Po46”,其中“Po45”菌株在菌丝长速、发酵液生物产量、第一潮菇产量等方面优于其他复壮菌株。(4)通过对三种复壮技术获得的菌株进行筛选比较。结果表明应用原生质体再生复壮技术提纯平菇菌株应用效果最佳,利用原生质体再生复壮技术获得复壮菌株在菌丝长速、漆酶活性、第一潮菇产量、农艺性状等方面都要优于组织分离与尖端分离复壮技术获得的菌株。
【学位授予单位】：河北工程大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S646.14
【图文】：

形态图,子实体,菌株,形态

0.1g 隔膜培养菌丝，加入适当液氮迅速研磨使组织完全破裂，按 DNA 提取试剂盒具体操作步骤进行 DNA 样品提取并对获得的 DNA 样品进行质量检测，将片段大于 20kb、无降解的 DNA 样品置-20℃冰箱保存备用。将 DNA 样品进行 PCR 扩增处理。PCR 反应体系为 2×PCR Master Mix10μl，10μm 引物 1μl，DNA 模板 1μl，ddH2O 8μl，PCR 反应总体积为 20μl。PCR 反应条件为：94℃预变性 4min，94℃变性 30s，55℃退火 20s，72℃延伸 2min，共 33 个循环，72℃补齐 10min，4℃终止反应。对 PCR 扩增产物进行电泳，电泳条件为：取 6μl 反应产物，6μl Marke分别点样于 1.0%琼脂糖凝胶上，在 1×TAE 缓冲液中电泳，电压为 8V/cm，待溴酚兰距凝胶前缘 1cm 左右停止电泳。取出胶板在紫外凝胶成像仪上拍照分析。2.3 结果与分析2.3.1 组织分离选取 4 朵菇形圆整生长良好的子实体分别进行组织分离得到 4 株组织分离菌株分别标记为 PoZ1、PoZ2、PoZ3、PoZ4。部分子实体形态见图 2-1。

菌丝形态,母种,组织分离,菌丝形态

河北工程大学硕士学位论文 2-1 组织分离复壮菌株母种菌丝日平均生长速度比on of daily average growth rate of seed hyphae of tissuestrains菌株编号train numberAverage（cm/d）差异显著性Significant differenc0.05 0.01PoZ1 1.23 a APoZ3 1.22 a APoZ2 1.20 a ABPoZ4 1.06 b BCCK 1.01 b C

【参考文献】