柑橘砂皮病菌的分离鉴定及生物学特性研究
发布时间：2020-07-10 16:38
【摘要】：柑橘砂皮病是柑橘上的主要病害之一,通常在树体受伤或树势差时发生,特别是遭受冻害时最容易侵染叶片。受害后在表面形成砂粒状麻点,严重影响果实外观,使其果实商品价值下降。本文通过对湖南省不同来源的柑橘砂皮病进行研究,分离柑橘砂皮病的病原菌,观察致病菌的生物学特性,同时进行防治药剂的室内抑菌效果测定,为柑橘砂皮病的综合防治提供理论依据。主要研究结果如下:1.根据分离菌株的形态特征,结合分子生物学技术对所分离的柑橘砂皮病菌株进行鉴定,一共得到27株柑橘砂皮病菌株(Diaporthe citri),利用常规菌种保存方法对其进行保存。2.通过对6株具有代表性的柑橘砂皮病菌株的生物学特性比较研究。结果表明:6株柑橘砂皮病菌株均在V8果蔬培养基和燕麦培养基生长最佳,在10~35℃这个温度范围内均生长,菌丝生长的最佳温度范围是26℃~30℃,致死温度40℃。菌株在3~12这个pH值范围均生长,最适pH值6~9,6株菌株在酸性条件及碱性条件下致死pH分别是2、13,光暗交替对菌株生长影响明显,菌株对有机氮源蛋白胨、酵母以及牛肉膏利用效果最好。有机碳源蔗糖对菌株生长影响明显。3.根据菌丝生长速率法,检测了代森锰锌、苯醚甲环唑、乙铝·锰、多菌灵、咪鲜胺等5种杀菌剂对柑橘砂皮病菌的毒力,结果表明,本实验所用的5种杀菌剂均对柑橘砂皮病菌的菌丝有着抑制作用。5种杀菌剂根据抑菌作用的强到弱,依次为:咪鲜胺苯醚甲环唑多菌灵乙铝·锰锌代森锰锌,其中25%咪鲜胺对柑橘砂皮病菌的毒力最高,EC50值是0.099μg/mL。4.通过PCR技术扩增了27株柑橘砂皮病菌株的ITS及β-tubulin片段,并测序。将所得序列与Genbank中下载的相关序列进行比对,通过分子生物学软件MEGA 5.0构建系统发育树,结果表明:不同柑橘砂皮致病菌菌株之间存在着遗传多样性差异,但这种差异与菌株的来源没有明显相关性。
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S436.66
【图文】：
3.1.1 分离的柑橘砂皮病菌株统计表 2-2 柑橘砂皮的分离结果Table 2-2 The isolates of Diaporthe criti from different place of Hunan province菌株编号 寄主来源 采集地点 采集时间 菌株编号 寄主来源 采集地点 采集时间HLXQG 脐橙 回龙圩 2014 年 XNMG 蜜橘 新宁 2015 年HLXXG 夏橙 回龙圩 2014 年 XNPG i*柑叶片 新宁 2015 年HLXPY i*柑叶片 回龙圩 2014 年 MYXY 夏橙叶片 麻阳 2015 年HLXYG 柚子 回龙圩 2014 年 MYBG 冰糖橘 麻阳 2015 年HLXBG 冰糖橘 回龙圩 2014 年 TDPG i*柑 通道 2015 年SMBG 冰糖橘 石门 2014 年 TDMG 蜜橘 通道 2015 年SMMG 蜜橘 石门 2014 年 HJXG 夏橙 洪江 2015 年JYXG 夏橙 江永 2015 年 HJBG 冰糖橘 洪江 2015 年JYMG 蜜橘 江永 2015 年 ARMG 蜜橘 安仁 2016 年JYBG 冰糖橘 江永 2015 年 LYPG i*柑 耒阳 2016 年YZQG 脐橙 宜章 2015 年 YXBG 冰糖橘 永兴 2016 年YZXG 夏橙 宜章 2015 年 LXPY i*柑叶片 泸溪 2016 年YZPG i*柑 宜章 2015 年 LHQG 脐橙 隆回 2016 年YZBG 冰糖橘 宜章 2015 年3.1.2 分离菌株的菌落及形态特征
3.1.1 分离的柑橘砂皮病菌株统计表 2-2 柑橘砂皮的分离结果Table 2-2 The isolates of Diaporthe criti from different place of Hunan province菌株编号 寄主来源 采集地点 采集时间 菌株编号 寄主来源 采集地点 采集时间HLXQG 脐橙 回龙圩 2014 年 XNMG 蜜橘 新宁 2015 年HLXXG 夏橙 回龙圩 2014 年 XNPG i*柑叶片 新宁 2015 年HLXPY i*柑叶片 回龙圩 2014 年 MYXY 夏橙叶片 麻阳 2015 年HLXYG 柚子 回龙圩 2014 年 MYBG 冰糖橘 麻阳 2015 年HLXBG 冰糖橘 回龙圩 2014 年 TDPG i*柑 通道 2015 年SMBG 冰糖橘 石门 2014 年 TDMG 蜜橘 通道 2015 年SMMG 蜜橘 石门 2014 年 HJXG 夏橙 洪江 2015 年JYXG 夏橙 江永 2015 年 HJBG 冰糖橘 洪江 2015 年JYMG 蜜橘 江永 2015 年 ARMG 蜜橘 安仁 2016 年JYBG 冰糖橘 江永 2015 年 LYPG i*柑 耒阳 2016 年YZQG 脐橙 宜章 2015 年 YXBG 冰糖橘 永兴 2016 年YZXG 夏橙 宜章 2015 年 LXPY i*柑叶片 泸溪 2016 年YZPG i*柑 宜章 2015 年 LHQG 脐橙 隆回 2016 年YZBG 冰糖橘 宜章 2015 年3.1.2 分离菌株的菌落及形态特征
图 2-3 分生孢子释放的黄色形似奶油的滴状物Fig.2-3 The conidia release the yellowish creamy drops离物分别在马铃薯葡萄糖培养基（PDA）上恒温箱（24℃特征，分生孢子，对其进行显微观察：皮病菌在马铃薯葡萄糖培养基（PDA）上恒温箱（24℃）征，菌株在 PDA 培养基上 27℃培养 7 天后菌落直径达 63.较为发达的基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝为白色（图 2-1-2）纺锤形 α 型孢子，无色，正直，常具 2 个油球，有时油型，无色，正直或者弯钩状，无油球，单孢。分生孢子从分色的形似奶油的滴状物（图 2-3）。研究酒精对健康的柑橘果实表面消毒后用无菌水冲洗 3 次，在上液滴在小孔上，以灭菌水作对照，发现接种果实的发病部的病健交界处进行组织分离培养，获得与最初分离的病原
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S436.66
【图文】：
3.1.1 分离的柑橘砂皮病菌株统计表 2-2 柑橘砂皮的分离结果Table 2-2 The isolates of Diaporthe criti from different place of Hunan province菌株编号 寄主来源 采集地点 采集时间 菌株编号 寄主来源 采集地点 采集时间HLXQG 脐橙 回龙圩 2014 年 XNMG 蜜橘 新宁 2015 年HLXXG 夏橙 回龙圩 2014 年 XNPG i*柑叶片 新宁 2015 年HLXPY i*柑叶片 回龙圩 2014 年 MYXY 夏橙叶片 麻阳 2015 年HLXYG 柚子 回龙圩 2014 年 MYBG 冰糖橘 麻阳 2015 年HLXBG 冰糖橘 回龙圩 2014 年 TDPG i*柑 通道 2015 年SMBG 冰糖橘 石门 2014 年 TDMG 蜜橘 通道 2015 年SMMG 蜜橘 石门 2014 年 HJXG 夏橙 洪江 2015 年JYXG 夏橙 江永 2015 年 HJBG 冰糖橘 洪江 2015 年JYMG 蜜橘 江永 2015 年 ARMG 蜜橘 安仁 2016 年JYBG 冰糖橘 江永 2015 年 LYPG i*柑 耒阳 2016 年YZQG 脐橙 宜章 2015 年 YXBG 冰糖橘 永兴 2016 年YZXG 夏橙 宜章 2015 年 LXPY i*柑叶片 泸溪 2016 年YZPG i*柑 宜章 2015 年 LHQG 脐橙 隆回 2016 年YZBG 冰糖橘 宜章 2015 年3.1.2 分离菌株的菌落及形态特征
3.1.1 分离的柑橘砂皮病菌株统计表 2-2 柑橘砂皮的分离结果Table 2-2 The isolates of Diaporthe criti from different place of Hunan province菌株编号 寄主来源 采集地点 采集时间 菌株编号 寄主来源 采集地点 采集时间HLXQG 脐橙 回龙圩 2014 年 XNMG 蜜橘 新宁 2015 年HLXXG 夏橙 回龙圩 2014 年 XNPG i*柑叶片 新宁 2015 年HLXPY i*柑叶片 回龙圩 2014 年 MYXY 夏橙叶片 麻阳 2015 年HLXYG 柚子 回龙圩 2014 年 MYBG 冰糖橘 麻阳 2015 年HLXBG 冰糖橘 回龙圩 2014 年 TDPG i*柑 通道 2015 年SMBG 冰糖橘 石门 2014 年 TDMG 蜜橘 通道 2015 年SMMG 蜜橘 石门 2014 年 HJXG 夏橙 洪江 2015 年JYXG 夏橙 江永 2015 年 HJBG 冰糖橘 洪江 2015 年JYMG 蜜橘 江永 2015 年 ARMG 蜜橘 安仁 2016 年JYBG 冰糖橘 江永 2015 年 LYPG i*柑 耒阳 2016 年YZQG 脐橙 宜章 2015 年 YXBG 冰糖橘 永兴 2016 年YZXG 夏橙 宜章 2015 年 LXPY i*柑叶片 泸溪 2016 年YZPG i*柑 宜章 2015 年 LHQG 脐橙 隆回 2016 年YZBG 冰糖橘 宜章 2015 年3.1.2 分离菌株的菌落及形态特征
图 2-3 分生孢子释放的黄色形似奶油的滴状物Fig.2-3 The conidia release the yellowish creamy drops离物分别在马铃薯葡萄糖培养基（PDA）上恒温箱（24℃特征，分生孢子，对其进行显微观察：皮病菌在马铃薯葡萄糖培养基（PDA）上恒温箱（24℃）征，菌株在 PDA 培养基上 27℃培养 7 天后菌落直径达 63.较为发达的基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝为白色（图 2-1-2）纺锤形 α 型孢子，无色，正直，常具 2 个油球，有时油型，无色，正直或者弯钩状，无油球，单孢。分生孢子从分色的形似奶油的滴状物（图 2-3）。研究酒精对健康的柑橘果实表面消毒后用无菌水冲洗 3 次，在上液滴在小孔上，以灭菌水作对照，发现接种果实的发病部的病健交界处进行组织分离培养，获得与最初分离的病原
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本文编号：2749181
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