“新发中秋花”萱草离体快速繁殖技术研究

发布时间：2020-07-25 20:22

【摘要】：百合科萱草属花卉以其植株强健且花型硕大、色泽鲜艳,叶形优雅、叶姿挺拔等特点,被园林工作者认为是优秀的园林地被和庭院观赏植物之一。我国萱草属野生种质资源极为多样,但长期的自然、人工杂交造成我国现有萱草品种杂交起源相近、遗传背景复杂,一定程度上给育种工作带来难题。因此,近些年我国研究学者积极收集国内优良的种质资源,并引进诸多国外品质精良的萱草新品种开展繁育研究。本研究以祁东新发食品有限公司培育的晚花新品种“新发中秋花”萱草作为研究对象,针对取材时间不同选取不同部位,以萱草花蕾、花梗上部、心叶及茎段等不同部位作为外植体采用不同的灭菌方式,利用调节植物生长剂的方法开展启动、增殖培养环节,以获得优质的愈伤组织及不定芽,并对诱导出的愈伤组织进行再分化,对直接、间接不定芽进行继代增殖,实验后期进行生根培养以及炼苗移栽等培养环节。实验旨在寻找建立“新发中秋花”萱草材料离体快速繁殖体系的正确方法,为其在园林市场应用奠定工厂化大规模生产育苗基础、为萱草新品种深度育种研究提供技术支撑。实验结果表明:(1)综合考虑外植体污染率、死亡率的高低以及消毒条件的难易程度,认为“新发中秋花”萱草组织培养最适宜的外植体为幼嫩花梗分蘖的结节处,取材时期为八月中上旬即植株抽蕾期,可有效获得无菌幼苗,外植体可在两周左右萌芽、一个月形成愈伤组织,较大程度上缩短了获得无菌幼苗的时间。以幼嫩花梗、心叶及子房为实验材料,最佳的灭菌方案为C2处理:70%酒精(C_2H_5OH)30s+0.1%升汞(HgCl_2)10min(添加适量的吐温-80);以茎段为实验材料,最佳灭菌方案为C9处理:70%酒精(C_2H_5OH)30s+0.1%升汞(HgCl_2)(添加适量的吐温-80)12min+2%次氯酸钠(NaClO)4min。(2)通过对植物生长调节剂在“新发中秋花”萱草品种的启动培养诱导中启动率的影响结果分析得出P7处理:MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L,对“新发中秋花”品种外植体进行愈伤诱导、萌芽和促进后期外植体植株形态塑造均有较好的效果。因此,该处理为此萱草品种花梗、子房及茎段部位组织培养的最佳启动培养基。心叶部位外植体最适宜启动培养为EP处理:SH+L-脯氨酸(C_5H_9NO_2)0.3g/L+琼脂糖(AG)4g/L+2,4-D 3.0mg/L+TDZ 0.5mg/L+肌醇100mg/L+蔗糖30g/L。通过观察10个处理下增殖培养植株的增殖率和增殖系数,分析结果发现适宜浓度的植物生长素与细胞分裂素合理搭配可以有效的促进植物后期的形态塑造,提高组培苗的增殖系数,获取更多长势健康植株优良的组培苗。经过实验论证得出,Q7处理:MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L为“新发中秋花”萱草的最佳增殖培养基。(3)生根培养阶段Z6处理生根时间较早,根系为黄绿色长势优良,呈放射状生长,综合多方面考虑Z6处理:1/2MS+NAA0.1mg/L+IBA0.1mg/L最为适合“新发中秋花”萱草进行生根培养。若想缩短生根时间,不计生产成本可以先使用1/2MS+NAA0.2mg/L进行7d生根培养,后接入1/2MS+NAA0.1mg/L+IBA 0.1mg/L培养基中。两种处理方式在组培苗的长势及生长速度上有差异,在生根率与移栽成活率上无显著差异。长势正常的组培苗单株苗根数在4-6条,培育20d后根系稳定,长度超过3cm时,在正常管理情况下移栽到多种基质中组培苗均可成活。(4)大多数萱草材料进行移栽时炼苗时间不超过2d最为合适,“新发中秋花”萱草适宜炼苗天数为1d,炼苗后植株后期生长良好。经过分析,最适宜“新发中秋花”萱草的栽培基质为(2)处理,即V(园土):V(蛭石)=1:1的混合基质,处理基质简单,植株生长良好。在移栽前还需对栽培基质进行高温高压灭菌处理以减少土壤中的细菌、病菌,在此基础上“新发中秋花”萱草组培炼苗移栽后成活率可达100%,多种基质下长势均良好。
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S682.19
【图文】：

外植体,花梗,幼蕾,萱草

图 2-1(A-D) 预处理萱草外植体A: 待取茎段材料；B: 心叶；C: 幼嫩“Y”型花梗；D：幼蕾Fig.2-1 (A-D) Pretreatment day lily explant.（1）前期材料预处理：将摘取的外植体材料用洗衣粉水进行冲洗，约 20min 左右用小试管刷轻轻刷洗表面绒毛，用较舒缓水流反复冲洗 5min，最后用无菌水冲洗。为保持材料细胞活性，在实验前夕先将材料放入盛有少量无菌水的烧杯中浸泡要进行消毒时，拿进组培室放置于超净工作台上，用消毒过的试纸吸去多余水分备进行外植体消毒工作。（2）外植体准备：将花梗剪切成约 2.0cm-2.5cm 小段，在花梗分节点两端各留出.0cm 左右长度花梗，以便消毒后剪切出新伤口。消毒时先不切开花苞，待消毒完毕离取出洁净的子房外植体。待取茎段材料只留环状生长点部位，挖除发黑变褐的，减少污染。（3）外植体灭菌操作：将准备完毕的外植体用无菌水冲洗 1-2 次后，用 70%酒

外植体,花梗,茎段,灭菌处理

表 3-1 不同的灭菌处理对外植体接种的影响Tab.3-1 Influence of different Sterilization programmes for explant inoculation处理方案接种/个花梗污染率% 花梗死亡率% 茎段污染率% 茎段死Treatment scheme Number Pedicel of pollution Pedicel of death Root of pollution Root oC1 30 83.33 0 100 0C2 30 34.44 0 76.66 0C3 30 17.54 85.44 46.67 0C4 30 34.22 46.33 95.56 0C5 30 22.22 65.56 81.11 0C6 30 0 100 47.78 26C7 30 24.33 33.33 62.22 0C8C9303013.22053.2210037.7827.4500

萱草,茎段外植体,花梗,茎段

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