柑橘砧穗间可移动mRNA分析及几个FT改造载体功能分析
发布时间：2020-08-20 12:26
【摘要】：本论文为了探索韧皮部mRNA远距离传递机制,和FT mRNA移动的可能性,构建了35S::PtFT:GFP,35S::PtFT:GFP:tRNA22和35S::PtFT:tRNA22超表达载体,以野生型番茄分别与超表达PtFT:GFP,PtFT:GFP:tRNA22和PtFT:tRNA22转基因番茄进行嫁接,以GFP荧光示踪研究FT的传导能力、方向、途径和分配规律;通过在PtFT和PtFT:GFP基因序列后面加tRNA22,来研究改造的FT mRNA在促进转基因植株成花能力上有增强。主要研究结果如下:(1)对实验室前期克里曼丁/早实枳种间嫁接组合转录组测序数据分析,筛查到1073个可移动的mRNA,从中挑取了61个基因进一步验证。根据候选基因目标SNP附近PCR扩增产物测序分析,有15个mRNA分子移动获得证实,其中8个mRNA由接穗向砧木移动,有5个mRNA由砧木向接穗移动,有2个mRNA发生双向移动。(2)通过利用PlaMoM(Plant Mobile Macromolecules)TLS finder在线分析工具(http://www.systembioinfo.org/plamom/),对检测发现的mRNA的TLS类似结构进行了扫描,发现向上移动和向下移动的mRNA中分别有8.6%和14.9%具有发夹结构,说明含有TLS类似结构的基因可能有利于mRNA移动或移动过程的稳定性。(3)构建了35S::PtFT:GFP、35S::PtFT:GFP:tRNA22和35S::PtFT:tRNA22超表达载体,分别转化番茄,获得了超表达阳性株系,从DNA水平和RNA水平进行阳性检测,结果表明外源基因已经成功整合到番茄的基因组中。(4)对转基因株系进行表型观察,结果发现与野生型番茄相比,PtFT:GFP和PtFT:tRNA22超表达番茄都表现出早花现象,而PtFT:GFP:tRNA22超表达番茄没有表现出明显的早花现象。这表明PtFT:GFP和PtFT:tRNA22基因的超表达均可以促进番茄的早花。(5)将野生型番茄分别嫁接到超表达PtFT:GFP:tRNA22和PtFT:tRNA22转基因番茄上,利用荧光显微镜研究PtFT:GFP:tRNA22在蛋白质水平的移动,结果发现在野生型接穗中嫁接口上1cm处检测到荧光信号,在嫁接口上4cm处荧光信号消失,说明PtFT:GFP:tRNA22基因可以在蛋白质水平发生移动。但在接穗部位未检测到外源PtFT mRNA,表明外源PtFT:GFP:tRNA22和PtFT:tRNA22的mRNA未能在砧穗间移动。
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S666
【图文】：
图 1.1 NCAP 机制（Roberto,2004）Fig.1.1 The mechanism of NCAP年来随着研究的深入，研究者发现韧皮部 mRNA 远距离运输还与 端 UTR 茎环发夹结构以及 5’端富含 CU 的原件有关（Mahajan et al 种特殊结构的 mRNA 能和一些特定的蛋白质相互识别结合形成 RNA从而协同 RNA 在韧皮部中的长距离运输。Li 等人首先在南瓜韧皮汁 结合蛋白 CmRBP50 可以在南瓜韧皮汁液中结合形成核糖核蛋白（Li 以与 mRNA 5’端的 CU 结构相互结合从而协同其在韧皮部的远距离、GAIP、GAIP-B、SCL14P 和 STMP 等。之后作者利用体外 Pulldown Bpso 可以与 Cmppl6、GTPbP 及 PsPL 等 5 个韧皮部蛋白在体外发生梨中一共克隆出 12 个 Wox 基因，其中 PbWoxT1 可以在伴胞中和 P成 RNP 复合体，使 PbWoxT1 传递量和传递效率得到提高，从而调控树木发育（Duan et al 2016）。有研究表明在马铃薯中一共有 6 个 StP StPTB1 和 StPTB6 与南瓜中的 PTB 蛋白同源性最高。StPTB 和 StPT
华中农业大学 2018 届硕士研究生学位（毕业）论文物病毒 tRNA 类似结构研究进展NA 简介A 是一类不编码蛋白质，长度一般为 71 至 94 bp 的小分子核糖核酸，酸转运到特定的位置，以 mRNA 为模板合成蛋白质。由于 tRNA 比较 1965 年人们就测出了第一个 tRNA，测序结果表明该 tRNA 序列主要G 四种核苷酸组成。随着测序技术的发展，更多的 tRNA 被测出来，构和三叶草模型逐渐被揭示，结果发现大多数的 tRNA 分子都可以形。它由 3 个环，四个茎，以及可变臂构成。3 个环是指 D 环、反密码四个茎是指 D 茎、反密码茎、TΨC 茎和氨基酸接受茎，可变臂在 TΨ茎之间。之后研究者利用 X 射线晶体衍射法，tRNA 的三维结构被揭A 的三维结构像倒写的英文字母 L，因此又称 L 型结构（如图 1.2）。
Rietveld 等（1982）提出的 TYMV RNA级结构模型ndary structure of the tRNA-like fragment of fication and enzymatic digestion by Rietveld 质的 mRNA 可以通过韧皮部移动到植挥作用。近年来，很多研究发现韧究很少关注到是什么引发 mRNA 移翻译成蛋白质发挥功能的潜力。2009 tRNAs 富集，说明很多 tRNA 有选择者猜测 tRNA 类似结构可能是真正促解决这些问题，Zhang 等人在 DCM1的转录物，结果发现这些 mRNA 在韧对嫁接植物进行表型观察以及酶测定从转基因植株转移到野生型的叶，也这些 mRNA 分子在运输后可以被翻译
本文编号：2797969
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S666
【图文】：
图 1.1 NCAP 机制（Roberto,2004）Fig.1.1 The mechanism of NCAP年来随着研究的深入，研究者发现韧皮部 mRNA 远距离运输还与 端 UTR 茎环发夹结构以及 5’端富含 CU 的原件有关（Mahajan et al 种特殊结构的 mRNA 能和一些特定的蛋白质相互识别结合形成 RNA从而协同 RNA 在韧皮部中的长距离运输。Li 等人首先在南瓜韧皮汁 结合蛋白 CmRBP50 可以在南瓜韧皮汁液中结合形成核糖核蛋白（Li 以与 mRNA 5’端的 CU 结构相互结合从而协同其在韧皮部的远距离、GAIP、GAIP-B、SCL14P 和 STMP 等。之后作者利用体外 Pulldown Bpso 可以与 Cmppl6、GTPbP 及 PsPL 等 5 个韧皮部蛋白在体外发生梨中一共克隆出 12 个 Wox 基因，其中 PbWoxT1 可以在伴胞中和 P成 RNP 复合体，使 PbWoxT1 传递量和传递效率得到提高，从而调控树木发育（Duan et al 2016）。有研究表明在马铃薯中一共有 6 个 StP StPTB1 和 StPTB6 与南瓜中的 PTB 蛋白同源性最高。StPTB 和 StPT
华中农业大学 2018 届硕士研究生学位（毕业）论文物病毒 tRNA 类似结构研究进展NA 简介A 是一类不编码蛋白质，长度一般为 71 至 94 bp 的小分子核糖核酸，酸转运到特定的位置，以 mRNA 为模板合成蛋白质。由于 tRNA 比较 1965 年人们就测出了第一个 tRNA，测序结果表明该 tRNA 序列主要G 四种核苷酸组成。随着测序技术的发展，更多的 tRNA 被测出来，构和三叶草模型逐渐被揭示，结果发现大多数的 tRNA 分子都可以形。它由 3 个环，四个茎，以及可变臂构成。3 个环是指 D 环、反密码四个茎是指 D 茎、反密码茎、TΨC 茎和氨基酸接受茎，可变臂在 TΨ茎之间。之后研究者利用 X 射线晶体衍射法，tRNA 的三维结构被揭A 的三维结构像倒写的英文字母 L，因此又称 L 型结构（如图 1.2）。
Rietveld 等（1982）提出的 TYMV RNA级结构模型ndary structure of the tRNA-like fragment of fication and enzymatic digestion by Rietveld 质的 mRNA 可以通过韧皮部移动到植挥作用。近年来，很多研究发现韧究很少关注到是什么引发 mRNA 移翻译成蛋白质发挥功能的潜力。2009 tRNAs 富集，说明很多 tRNA 有选择者猜测 tRNA 类似结构可能是真正促解决这些问题，Zhang 等人在 DCM1的转录物，结果发现这些 mRNA 在韧对嫁接植物进行表型观察以及酶测定从转基因植株转移到野生型的叶，也这些 mRNA 分子在运输后可以被翻译
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 牛自勉,李全,郜晓梦,张忠仁;SDC系苹果矮化砧木生长、结果及抗逆性的研究[J];果树科学;1994年03期
相关硕士学位论文 前1条
1 余丹;PtFT基因不同转录本异位表达表型鉴定及嫁接信号转移[D];华中农业大学;2015年
本文编号：2797969
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