葡萄柚成年态外植体无菌体系建立与茎尖微芽嫁接脱毒研究

发布时间：2020-09-16 11:47

　　本研究选用西南林业大学试验地中的火焰、哈路比、瑞路比、里约红、星路比的8-9年生葡萄柚新生茎段为试验材料,开展了成年态葡萄柚茎段离体诱导试验,通过茎段离体诱导的产生再生不定芽作为接穗,对嫁接方式进行改进以提高茎尖微芽嫁接成活率,对嫁接苗进行聚合酶链式反应(PCR)检测,最终获得葡萄柚脱毒苗。主要的结果如下:1、通过对不同影响因子进行对比,改进了葡萄柚成年态茎段离体培养的消毒方法。试验表明:葡萄柚外植体消毒取大小2cm左右的茎段最佳,不同品种的葡萄柚消毒后污染率和萌芽率有差异,瑞路比污染率最高为68.8%,星路比萌芽率最高为21.3%;采用75%酒精先消毒20S,然后直接用5%NaClO消毒20min,静置48h后,用同样的方法二次消毒能有效降低茎段培养的污染率,污染率为21.3%,萌芽率为52.5%;将二次消毒的茎段接种于WPM+100mg/L半胱氨酸培养基中茎段污染率为15.6%,萌芽率为83.1%,能有效缓解多次消毒后的褐化现象,并提高萌芽率。2、葡萄柚的成年态茎段离体诱导培养试验中,WPM+0.2mg/L NAA+1.0mg/L6-BA+0.2mg/L GA_3+蔗糖40g/L为腋芽诱导的最佳培养基,诱导率为78.89%,诱导的再生芽长势旺、发育好,生长速度快。3、在提高砧木发芽率的研究中,MS培养基最适合曼赛龙柚种子萌芽,出苗率为81.7%。NAA、6-BA、GA_3三种激素均能缩短曼赛龙柚种子萌芽时间,砧木种子播种前用100 mg/L GA_3浸种24 h,萌芽率和出苗率最高、生长效果最好。4、通过四种嫁接方式对比改进葡萄柚微芽嫁接,发现穿刺法更适合葡萄柚的微芽嫁接,嫁接成活率最高为75%。劈接法的嫁接成活率最低,只有18.67%;不同品种葡萄柚微芽嫁接成活率依次为:瑞路比星路比哈路比火焰里约红;对田间茎尖和离体诱导茎尖两个不同来源接穗进行微芽嫁接试验,发现茎段诱导不定芽的作为接穗的微芽嫁接成活率为76.67%,田间嫩梢接穗的茎尖微芽嫁接成活率为38.33%,两者之间的影响差异显著。5、根据柑橘黄龙病病原的核苷酸序列设计PCR引物,利用PCR对疑似黄龙病的星路比、里约红、瑞路比、哈路比、火焰进行检测,结果发现带毒症状的植株均扩增到特异性条带,将以上感病植株的茎段分别进行茎尖微芽嫁接后,成活的嫁接苗则没有特异性条带,表明茎尖微芽嫁接能有效脱出感病植株上的柑橘黄龙病病原,可以作为获得无病毒苗木的有效途径。
【学位单位】：西南林业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：S666.3
【部分图文】：

示意图,茎尖,劈接法,穿刺法

图 1 四种茎尖嫁接方式示意图A：“T”接法。B：三角形法。C：劈接法。D：穿刺法。Figure 1 The diagram of the four STG methodsA:“T”shaped method. B:triangle method. C:Cleft grafting method. D:puncture method.

赛龙,种子,种子出苗,幼苗

图 2 曼赛龙柚种子萌发过程A:种子生根； B:种子转绿； C:开始萌芽； D:种子出苗； E:幼苗健康生长； F:不定量根系。Fig 2 Mansailong seed germination processA:Rooting of seeding B:Seed transformed into greenC:Seed germination D:Seed emergenceE:Seedlings healthy growth F:Seedlings not quantitative take root.

葡萄柚,微芽,接穗,嫁接成活

图 3 不同生长期接穗对葡萄柚微芽嫁接成活的影响Figure 3 different growth period a scion of grapefruit bud graft survival9-10 月晚秋时期，温度下降空气干燥，加上葡萄柚本身秋梢长势较弱，较多，经过消毒长容易褐化，消毒时间短外生菌内生菌急速繁殖，即使接穗失活因此萌芽率最低。11 月之后基地葡萄柚新梢黄化长势不好或自

【参考文献】