我国梨黑斑病病原菌种类及一种dsRNA病毒的鉴定
发布时间：2020-10-12 01:46
梨黑斑病是由链格孢属(Alternaria)真菌所致,在我国梨主产区发生和危害十分严重。但目前我国尚缺乏对该病病原菌种类的系统鉴定,也未见从梨黑斑病病原菌分离出真菌病毒的报道。本研究从我国梨主产区大量采集黑斑病病样,进行病原真菌分离和形态与分子鉴定及致病性测定,并从SCFS-3菌株中分离到一种新的真菌病毒,主要研究结果如下:从我国重庆、江西、安徽、湖北、四川、甘肃、浙江、吉林和山东共9省市采集梨黑斑病病样,分离得到300个链格孢菌株。形态观察结果显示,这些菌株的分生孢子链长度及分支数有异,可分为四种类型,所占比例分别为类型Ⅰ72.6%、类型Ⅱ16.7%、类型Ⅲ6%,类型Ⅳ4.7%。分子鉴定结果显示,rDNA-ITS与GAPDH基因很难鉴定到种,CAD和Alta基因可鉴定出A.gaisen与A.longpies,对128个菌株的ATPase基因鉴定,其中56个菌株鉴定出6个种,分别为A.malvae(2个菌株)、A.longpies(3个菌株)、A.citrimacularis(18个菌株)、A.tenuissima(8个菌株)、A.herbiphorbicola(4个菌株)、A.dumosa个(18个菌株),其余72个菌株很难鉴定到种,其中,A.malvae、A.longpies、A.citrimacularis、A.herbiphorbicola和A.dumosa首次在梨树黑斑病样品上分离得到。215个菌株接种于丰水梨离体叶片,结果显示菌株间存在明显差异,强致病菌株占48%、中等致病菌株22%、弱致病菌株30%。从来源于四川成都的SCFS-3菌株中分离到一种新的dsRNA病毒,可能为Botybirnaviridae的一个新成员,暂命名为Alternaria botybirnavirus 1(ABRV1)。进化分析结果表明,ABRV1与已报道的SsBRV1和BpRV1亲缘关系最近。ABRV1可通过分生孢子垂直传播,后代菌株带毒率达94%。ABRV1可经水平传播到SCFS-50菌株中,使其致病力显著下降。经电镜观察,ABRV1的病毒粒子呈球形,直径为40 nm。病毒粒子裂解出的和从菌丝中提取到的dsRNA1、dsRNA2的大小一致。SDS-PAGE电泳表明,从病毒粒子可检测到三条结构蛋白条带,其大小分别为,80KDa(P80)、70KDa(P70)和60KDa(P60),P80与P70均由ORF2编码,P60由ORF1编码。
【学位单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：S436.612.14
【部分图文】：
图 2.1 梨黑斑病在果园中原始症状图Fig. 2.1 The original symptoms of the pear black spot in the fildA，梨黑斑病侵染幼嫩叶片症状；B-C，病斑逐渐扩大呈圆形或者不规则病斑；D，梨黑斑病侵染果.2 病原菌分离纯化及其形态学观察结果从我国重庆、江西、安徽、湖北、四川、甘肃、浙江、吉林、山东地区分离得到链格孢菌株共计 300 个，在所分离得到的分离物中 42 个青霉，23 个灰葡萄孢，42 个炭疽以及 42 个镰刀菌不在本研究范围内。从各得到的黑斑病菌株在 PDA 培养基上，均可以产生气生菌丝。且在培养后生黑色素（图 2.2）。
图 2.1 梨黑斑病在果园中原始症状图1 The original symptoms of the pear black spot in th嫩叶片症状；B-C，病斑逐渐扩大呈圆形或者不规则病斑；D，梨黑离纯化及其形态学观察结果江西、安徽、湖北、四川、甘肃、浙江、吉林、山孢菌株共计 300 个，在所分离得到的分离物中 42萄孢，42 个炭疽以及 42 个镰刀菌不在本研究范围内菌株在 PDA 培养基上，均可以产生气生菌丝。且在 2.2）。B C D
第二类在 WA 上培养极易产孢，形成 3-20 个孢子左右的主链（图 2.3- II），分枝或主链上形成 1-2 个侧链，侧链一般较短（1-5 个分生孢子），分生孢子梗者弯曲，多数不分枝（表 2.2）。分生孢子倒棒状或者长椭圆形，成熟分生孢子 3-7 个横隔膜，1-4 个纵隔膜，分生孢子长度范围为 16.67-27.28 μm，宽度范围.24-11.25 μm，平均长宽比为 2.52（表 2.3）。234 个菌株中共 39 个菌株产孢表Ⅱ型。第三类在 WA 上培养易产孢，形成短分支的孢子链，因假喙可多次产孢，呈轴式延伸（图 2.3- III）。分生孢子长度范围为 19.92-25.86 μm,宽度范围为 9.17-12.m，平均长宽比为 2.07（表 2.3）。234 个菌株中共 14 个菌株产孢表型为Ⅲ型。四类在 WA 上培养不易产孢，培养 20 d 之后，也很难产生分生孢子，故未统计生孢子大小。其中第一类产孢表型所占比例为 72.6%，第二种产孢表型所占比 16.7%，第三种产孢表型所占比例为 6%，第四种产孢表型所占比例为 4.7%（.2）。234 个菌株中共 14 个菌株产孢表型为Ⅳ型ⅠⅡ Ⅲ
【参考文献】
本文编号：2837449
【学位单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：S436.612.14
【部分图文】：
图 2.1 梨黑斑病在果园中原始症状图Fig. 2.1 The original symptoms of the pear black spot in the fildA，梨黑斑病侵染幼嫩叶片症状；B-C，病斑逐渐扩大呈圆形或者不规则病斑；D，梨黑斑病侵染果.2 病原菌分离纯化及其形态学观察结果从我国重庆、江西、安徽、湖北、四川、甘肃、浙江、吉林、山东地区分离得到链格孢菌株共计 300 个，在所分离得到的分离物中 42 个青霉，23 个灰葡萄孢，42 个炭疽以及 42 个镰刀菌不在本研究范围内。从各得到的黑斑病菌株在 PDA 培养基上，均可以产生气生菌丝。且在培养后生黑色素（图 2.2）。
图 2.1 梨黑斑病在果园中原始症状图1 The original symptoms of the pear black spot in th嫩叶片症状；B-C，病斑逐渐扩大呈圆形或者不规则病斑；D，梨黑离纯化及其形态学观察结果江西、安徽、湖北、四川、甘肃、浙江、吉林、山孢菌株共计 300 个，在所分离得到的分离物中 42萄孢，42 个炭疽以及 42 个镰刀菌不在本研究范围内菌株在 PDA 培养基上，均可以产生气生菌丝。且在 2.2）。B C D
第二类在 WA 上培养极易产孢，形成 3-20 个孢子左右的主链（图 2.3- II），分枝或主链上形成 1-2 个侧链，侧链一般较短（1-5 个分生孢子），分生孢子梗者弯曲，多数不分枝（表 2.2）。分生孢子倒棒状或者长椭圆形，成熟分生孢子 3-7 个横隔膜，1-4 个纵隔膜，分生孢子长度范围为 16.67-27.28 μm，宽度范围.24-11.25 μm，平均长宽比为 2.52（表 2.3）。234 个菌株中共 39 个菌株产孢表Ⅱ型。第三类在 WA 上培养易产孢，形成短分支的孢子链，因假喙可多次产孢，呈轴式延伸（图 2.3- III）。分生孢子长度范围为 19.92-25.86 μm,宽度范围为 9.17-12.m，平均长宽比为 2.07（表 2.3）。234 个菌株中共 14 个菌株产孢表型为Ⅲ型。四类在 WA 上培养不易产孢，培养 20 d 之后，也很难产生分生孢子，故未统计生孢子大小。其中第一类产孢表型所占比例为 72.6%，第二种产孢表型所占比 16.7%，第三种产孢表型所占比例为 6%，第四种产孢表型所占比例为 4.7%（.2）。234 个菌株中共 14 个菌株产孢表型为Ⅳ型ⅠⅡ Ⅲ
【参考文献】
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本文编号：2837449
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