梨高密度遗传连锁图谱构建与石细胞性状定位

发布时间：2020-11-12 06:56

　　 本文对'砀山酥梨'和'秋月'在内的88个品种进行石细胞含量的测定,然后以'砀山酥梨'和'秋月'杂交的110个F1代单株为作图群体,采用GBS分子标记技术结合“拟测交”策略构建了分子遗传图谱,并通过KW法和ICIM法对控制梨果实石细胞性状进行了 QTL定位研究。梨高密度遗传图谱的构建和果实石细胞QTL定位以及候选基因,为今后梨分子标记辅助育种提供了可靠的理论依据和方法材料,也为其遗传育种及分子标记辅助选择提供了有益的参考,对提高梨果实品质具有重要意义。主要结果如下:1以'砀山酥梨'和'秋月'在内的的88个梨品种资源为试材,利用冷冻分离法对成熟期的不同梨果实中的石细胞含量进行测定。结果表明:(1)88个梨品种的果肉石细胞含量平均值为0.227g,其变化范围为0.032～1.024g,变异系数为76%。秋子梨品种果肉石细胞含量总体最高,种间杂交品种最低。(2)基于对梨果实中石细胞含量频度分析,同时筛选出'六月酥'、'满天红'、'龙泉19'、'中1A3'、'丰水'等5个石细胞含量低的品种和'金川野生梨2号'、'白皮酥'、'红香酥'、'八月酥'等4个石细胞含量高的品种。(3)对不同梨果实中石细胞含量的聚类分析,将所有的梨品种分为两大类群,砂梨和白梨存在较近的亲缘关系,秋子梨和种间杂交品种有共同特征。2通过对'砀山酥梨'和'秋月'及杂交F1代群体的果实石细胞含量进行测定,并进行聚类和频率分析。聚类分析结果将112份材料分为父本类群和母本类群,频率分析结果显示作图频率分布基本接近正态分布,因此,此杂交后代群体适合作QTL定位。3利用'砀山酥梨'与'秋月'与的110株杂交F1代群体,以GBS分子标记方法构建梨的遗传图谱,构建了一张包含2600个标记位点的图谱,共17个遗传连锁群,覆盖了 1824.11 cM的遗传距离,每个连锁群的长度为0.26～1.14cM,平均长度为0.71 cM,每个连锁群上平均分布153个位点。通过Joinmap5.0分析软件基于构建的遗传图谱,结合F1群体果实石细胞含量的表型值,利用KW和ICIM法进行了 QTL定位分析,共检测出16个QTL位点和2个重要区域。最后通过对16个位点延伸区域内基因以及与2个重要区域重叠区域内的基因进行KEGG和GO分析,找出了苯丙烷合成途径,得到了 16个相关基因并筛选出3个候选基因。
【学位单位】：南京农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：S661.2
【部分图文】：

０．８００；?１７：＞０．８００￣０．８５０；?１８：＞０．８５０￣０．９００；?１９：＞０．９００￣０．９５０；２０：＞０．９５０—?１．０００；２１＞１．０００??２．２不同品种的石细胞含量的聚类分析??梨果实中总石细胞含量的变化范围是从０．０３２?ｇ到１．０２４ｇ?（图１－３），平均值是??０．２２７?ｇ，变异系数为７６％。根据聚类分析结果（图１－２），可将所有的梨品种分为两??大类群。??第一大类分为砂梨、白梨两大品系，其根据石细胞含量又细分为不同的亚群，即??砂梨Ｉ、砂梨ＩＩ、砂梨ＩＩＩ、砂梨ＩＶ和白梨Ｉ、白梨ＩＩ、白梨ＩＩＩ。砂梨品种共３７个，??石细胞含量的平均值为０．２２４?ｇ，变化范围为０．０４６－１．０２４?ｇ?（图１－３），变异系数为??８６．８５％；其中白梨品种共１８个，石细胞含量的平均值为０．２４９?ｇ，变化范围为??０．０３２￣０．５６１ｇ?（图?１－３），变异系数为?６６．１６ｇ。??砂梨品系Ｉ的石细胞含量区间为０．０４６？０．０６５?ｇ，共５个，如‘龙泉１９’，‘丰水’、??‘黄金梨’等；砂梨品系ＩＩ的石细胞含量区间为０．１０１？０．１４３?ｇ

的典型分布。通过果实石细胞含量的变异系数（０．７０５）可知被调査的群体个体间存在??着明显的分离，均存在一定数量的超亲类型，性状在亲本间具有一定的差异。??果实石细胞含量在群体中频率分布见图２－２所示，作图频率分布基本接近正态分??布，表明被调查的性状受多基因控制，是典型的数量性状，因而用此双亲构建群体有??可能获得控制梨果实相关性状的ＱＴＬ。??表２－２果实石细胞含量正态分布检测??Ｔａｂｌｅ?４－１?Ｔｅｓｔ?ｏｆ?ｎｏｒｍａｌ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｆｏｒ?ｓｔｏｎｅ?ｃｅｌｌ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｉｎ?ｍａｐｐｉｎｇ?ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ??ｍｉ?ｉｉ?标准差?变异系数?５ｉｉ??Ｔｒａｉｔ?Ｍｅａｎ?ＳＤ?ＣＶ?（％）?Ｋｕｒｔｏｓｉｓ?Ｓｋｅｗｎｅｓｓ??石细胞含量?０．１５２?０Ａ０１?０．７０５?９．９８２?２．４３３??Ｍｂ??３（＾??〇?ｉ??將ｓ??遐?Ｉ?Ｊ??ｒ?＼??１?１?１?１?Ｍ?１?Ｉｒ＾ＬＪ—．—．??〇〇〇?〇?｜〇?０?２０?Ｏ?ｉＯ?０４０?０?５０?０．６０?０?７０?０８０??石细胞含量范围?Ｒａｎｇｅ?ｏｆ?ｓｔｏｎｅ?ｃｅｌｌ?ｃｏｎｔｅｎｔ??图２－２?ＦＩ后代石细胞含量在群体中的频率分布??Ｆｉｇ．２－２?Ｔｈｅ?ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓｔｏｎｅ?ｃｅｌｌ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｏｆ?ＦＩ?ｉｎ?ｐ

１．２．２测序实验??用干冰将提取的ＤＮＡ运输至深圳华大基因科技服务有限公司，采用??ＩｌｌｕｍｉｎａＨｉＳｅａ２０００仪进行测序工作。具体建库流程如图４－１所示：首先将提取的ＤＮＡ??进行检测，质量合格的进行样品、ｂａｒｃｏｄｅ及接头的准备及干燥；之后利用限制性酶??（ＲｅｓｔｒｉｃｔＥｎｚｙｍｅ，ＲＥ）?ＡｐｅＫＩ?（ＧＣＷＧＣ）消化?ＤＮＡ；消化后的?ＤＮＡ?片段两端加接??头（ａｄａｐｔｅｒ），其中一端的接头含有ｂａｒｃｏｄｅ序列，另一端的接头不含有ｂａｒｃｏｄｅ序列；??然后进行Ｐｏｏｌｉｎｇ和纯化；纯化后进行ＰＣＲ扩增，只有两端接头种类不同的片段以及??片段长度在１７０－３５０?ｂｐ之间的可被选择性扩增；最后纯化ＰＣＲ产物并将构建好的文??库质检合格后进行测序。??４．?Ｐｏｏｌ?ＤＮＡｓ?＆?Ｃｌｅａｎ?ｕｐ??６．?Ｃｌｅａｎ?ｕｐ?ＰＣＲ??１．?Ｐｌａｔｅ?ＤＮＡ?＆??ａｄａｐｔｅｒｐｌｆ?ｆ?＼??Ｍ?５．?Ｐｅｒｆｏｒｍ?ｆｅｌ?？，??２．?Ｄｉｇｅｓｔ?ＤＮＡ?ｗｉｔｈ?ＡｐｅＫＩ?７．?Ｅｖａｌｕａｔｅ??３．?Ｌｉｇａｔｅ
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本文编号：2880419