马蔺重金属ATP酶基因HMA2的克隆及其RNAi遗传转化研究
发布时间：2020-12-17 12:12
马蔺（Iris lactea）又名马莲,是鸢尾科鸢尾属多年生的宿根草本植物,广泛分布于全国各地。其根系十分发达、长势旺盛、对环境适应性强是耐重金属、抗旱、耐盐碱的优良观赏地被植物。本研究以马蔺为研究材料,拟采用RACE技术获得HMA2全长cDNA序列;利用原子吸收分光光度计和Real-time RT-PCR技术分别对不同浓度CdC12· 2.5H2O处理下其根及地上部的HMA2表达水平及Cd2+积累模式与变化规律进行分析;揭示其在低镉（25 mg L-1 CdC12·2.5H20）或高镉（150 mg L-1 CdC12.2.5H2O）处理不同时间（0-168 h）下马蔺IlHMA2表达模式时空变化规律。以马蔺根中总RNA为模板,采用RT-PCR方法获得了重金属ATP酶基因片段,以中间载体pHANNIBAL和植物表达载体pART27为基础,采用酶切和连接的方法,构建了 CaMV35S启动子驱动含有目的基因IlHMA2片段的反向重复序列表达载体pARTG1G2,并使用农杆菌介导将此重组质粒整合入农杆菌GV3101,并转入到马蔺幼苗体内获得了I万HMA2-RNAi转化株系。研究结果将为阐明...
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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上下无杂带与目的片段一致（图３．２）。经测序得到??序列长度为２６５?ｂｐ。??Ｍｌ?１??■｜??（＆???２５０＾，?ＫＳＫＳｉ?２６５ｂＰ??Ｉ?ｆ?１?ｎｐ??图３．２?／／Ｍ４２核心片段的ＰＣＲ凝胶电泳??Ｆｉｇ．?３．２?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＨＭＡ２?ｃｏｒｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ??注：１：／／Ｍ４２片段ＰＣＲ产物。??Ｎｏｔｅ：?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＨＭＡ２?ｆｒａｇｍｅｎｔ．??３．３?基因的３’ＲＡＣＥ扩增结果??以马蔺的３’ＲＡＣＥ得到的ｃＤＮＡ为模板，用３’ＨＭＡ２?ＷＦ１与３＇ＨＭＡ２ＮＦ］引物进??行ＰＣＲ扩增，经凝胶电泳检测可知其外侧ＰＣＲ产物并未出现目的条带，而通过内侧ＰＣＲ??得到约为３０００?ｂｐ的ＤＮＡ目的扩增产物（图３．３?），经测序长度为２８９８?ｂｐ。??Ｍ２?１??５０００ｂｐ?ＫｊＫ－４?ｉ??一２８９８ｂｐ??１０００ｂｐ???７５０ｂｐ?——??５〇〇ｂｐ—－－—??２５０ｂｐ???ｌＯＯｂｐ???图３．３?３’ＲＡＣＥ?ＰＣＲ的凝胶电泳??Ｆｉｇ．?３．３?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?３’ＲＡＣＥ??注：１：３’ＲＡＣＥＰＣＲ?产物。??Ｎｏｔｅ：?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?３，ＲＡＣＥ??３．４?／／Ｍ４２基因的５＿ＲＡＣＥ扩增结果??以马蔺５’ＲＡＣＥ得到的ｃＤＮＡ为模板，使用５＇ＨＭＡ２?ＷＲ１与５’ＨＭＡ２ＮＦ１引物进??行巢式ＰＣＲ。经凝胶电泳检测
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【参考文献】：
期刊论文
[1]马蔺VP基因的克隆与植物表达载体构建[J]. 郭静雅,李杉杉,郭强,毛培春,田小霞,孟林,杨晓盆. 分子植物育种. 2016(12)
[2]盐生植物小花碱茅外整流K+通道PtSKOR基因的克隆及RNAi载体构建[J]. 段丽婕,王沛,陈梦词,王锁民. 分子植物育种. 2015(04)
[3]无芒隐子草CsLEA基因超表达载体和反义表达载体构建[J]. 段珍,狄红艳,张吉宇,霍雅馨,孔令芳. 草业科学. 2014(08)
[4]水稻P1B型ATPase重金属转运蛋白的结构与功能研究进展[J]. 钟茜,李韶山. 宁夏师范学院学报. 2013(06)
[5]植物hpRNA干扰载体构建的研究进展[J]. 言普,沈文涛,黎小瑛,周鹏. 生物技术通报. 2013(09)
[6]RNAi机制及在植物中应用的研究概述[J]. 崔喜艳,孙小杰,刘忠野,张继伟. 吉林农业大学学报. 2013(02)
[7]重金属污染土壤修复技术及其修复实践[J]. 黄益宗,郝晓伟,雷鸣,铁柏清. 农业环境科学学报. 2013(03)
[8]马蔺对铅尾砂土壤酶活性和铅形态的影响[J]. 原海燕,佟海英,黄苏珍. 生态环境学报. 2012(11)
[9]多浆旱生植物霸王质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因RNAi载体构建[J]. 马清,王锁民. 草业科学. 2012(04)
[10]湘江流域土壤重金属污染及其生态环境风险评价[J]. 刘春早,黄益宗,雷鸣,郝晓伟,李希,铁柏清,谢建治. 环境科学. 2012(01)
博士论文
[1]东南景天镉超积累相关基因的克隆与功能研究[D]. 张敏.浙江大学 2011
硕士论文
[1]长穗偃麦草高亲和K+转运蛋白基因EeHKT1;4的克隆及对烟草遗传转化研究[D]. 张琳.山西农业大学 2015
[2]鸢尾属（Iris L.）4种植物镉（Cd）积累、耐性机理及影响因子研究[D]. 原海燕.南京农业大学 2006
本文编号：2922020
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．］马蔺总ＲＮＡ的凝胶电泳??
上下无杂带与目的片段一致（图３．２）。经测序得到??序列长度为２６５?ｂｐ。??Ｍｌ?１??■｜??（＆???２５０＾，?ＫＳＫＳｉ?２６５ｂＰ??Ｉ?ｆ?１?ｎｐ??图３．２?／／Ｍ４２核心片段的ＰＣＲ凝胶电泳??Ｆｉｇ．?３．２?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＨＭＡ２?ｃｏｒｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ??注：１：／／Ｍ４２片段ＰＣＲ产物。??Ｎｏｔｅ：?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＨＭＡ２?ｆｒａｇｍｅｎｔ．??３．３?基因的３’ＲＡＣＥ扩增结果??以马蔺的３’ＲＡＣＥ得到的ｃＤＮＡ为模板，用３’ＨＭＡ２?ＷＦ１与３＇ＨＭＡ２ＮＦ］引物进??行ＰＣＲ扩增，经凝胶电泳检测可知其外侧ＰＣＲ产物并未出现目的条带，而通过内侧ＰＣＲ??得到约为３０００?ｂｐ的ＤＮＡ目的扩增产物（图３．３?），经测序长度为２８９８?ｂｐ。??Ｍ２?１??５０００ｂｐ?ＫｊＫ－４?ｉ??一２８９８ｂｐ??１０００ｂｐ???７５０ｂｐ?——??５〇〇ｂｐ—－－—??２５０ｂｐ???ｌＯＯｂｐ???图３．３?３’ＲＡＣＥ?ＰＣＲ的凝胶电泳??Ｆｉｇ．?３．３?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?３’ＲＡＣＥ??注：１：３’ＲＡＣＥＰＣＲ?产物。??Ｎｏｔｅ：?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?３，ＲＡＣＥ??３．４?／／Ｍ４２基因的５＿ＲＡＣＥ扩增结果??以马蔺５’ＲＡＣＥ得到的ｃＤＮＡ为模板，使用５＇ＨＭＡ２?ＷＲ１与５’ＨＭＡ２ＮＦ１引物进??行巢式ＰＣＲ。经凝胶电泳检测
上下无杂带与目的片段一致（图３．２）。经测序得到??序列长度为２６５?ｂｐ。??Ｍｌ?１??■｜??（＆???２５０＾，?ＫＳＫＳｉ?２６５ｂＰ??Ｉ?ｆ?１?ｎｐ??图３．２?／／Ｍ４２核心片段的ＰＣＲ凝胶电泳??Ｆｉｇ．?３．２?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＨＭＡ２?ｃｏｒｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ??注：１：／／Ｍ４２片段ＰＣＲ产物。??Ｎｏｔｅ：?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＨＭＡ２?ｆｒａｇｍｅｎｔ．??３．３?基因的３’ＲＡＣＥ扩增结果??以马蔺的３’ＲＡＣＥ得到的ｃＤＮＡ为模板，用３’ＨＭＡ２?ＷＦ１与３＇ＨＭＡ２ＮＦ］引物进??行ＰＣＲ扩增，经凝胶电泳检测可知其外侧ＰＣＲ产物并未出现目的条带，而通过内侧ＰＣＲ??得到约为３０００?ｂｐ的ＤＮＡ目的扩增产物（图３．３?），经测序长度为２８９８?ｂｐ。??Ｍ２?１??５０００ｂｐ?ＫｊＫ－４?ｉ??一２８９８ｂｐ??１０００ｂｐ???７５０ｂｐ?——??５〇〇ｂｐ—－－—??２５０ｂｐ???ｌＯＯｂｐ???图３．３?３’ＲＡＣＥ?ＰＣＲ的凝胶电泳??Ｆｉｇ．?３．３?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?３’ＲＡＣＥ??注：１：３’ＲＡＣＥＰＣＲ?产物。??Ｎｏｔｅ：?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?３，ＲＡＣＥ??３．４?／／Ｍ４２基因的５＿ＲＡＣＥ扩增结果??以马蔺５’ＲＡＣＥ得到的ｃＤＮＡ为模板，使用５＇ＨＭＡ２?ＷＲ１与５’ＨＭＡ２ＮＦ１引物进??行巢式ＰＣＲ。经凝胶电泳检测
【参考文献】：
期刊论文
[1]马蔺VP基因的克隆与植物表达载体构建[J]. 郭静雅,李杉杉,郭强,毛培春,田小霞,孟林,杨晓盆. 分子植物育种. 2016(12)
[2]盐生植物小花碱茅外整流K+通道PtSKOR基因的克隆及RNAi载体构建[J]. 段丽婕,王沛,陈梦词,王锁民. 分子植物育种. 2015(04)
[3]无芒隐子草CsLEA基因超表达载体和反义表达载体构建[J]. 段珍,狄红艳,张吉宇,霍雅馨,孔令芳. 草业科学. 2014(08)
[4]水稻P1B型ATPase重金属转运蛋白的结构与功能研究进展[J]. 钟茜,李韶山. 宁夏师范学院学报. 2013(06)
[5]植物hpRNA干扰载体构建的研究进展[J]. 言普,沈文涛,黎小瑛,周鹏. 生物技术通报. 2013(09)
[6]RNAi机制及在植物中应用的研究概述[J]. 崔喜艳,孙小杰,刘忠野,张继伟. 吉林农业大学学报. 2013(02)
[7]重金属污染土壤修复技术及其修复实践[J]. 黄益宗,郝晓伟,雷鸣,铁柏清. 农业环境科学学报. 2013(03)
[8]马蔺对铅尾砂土壤酶活性和铅形态的影响[J]. 原海燕,佟海英,黄苏珍. 生态环境学报. 2012(11)
[9]多浆旱生植物霸王质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因RNAi载体构建[J]. 马清,王锁民. 草业科学. 2012(04)
[10]湘江流域土壤重金属污染及其生态环境风险评价[J]. 刘春早,黄益宗,雷鸣,郝晓伟,李希,铁柏清,谢建治. 环境科学. 2012(01)
博士论文
[1]东南景天镉超积累相关基因的克隆与功能研究[D]. 张敏.浙江大学 2011
硕士论文
[1]长穗偃麦草高亲和K+转运蛋白基因EeHKT1;4的克隆及对烟草遗传转化研究[D]. 张琳.山西农业大学 2015
[2]鸢尾属（Iris L.）4种植物镉（Cd）积累、耐性机理及影响因子研究[D]. 原海燕.南京农业大学 2006
本文编号：2922020
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