神农香菊CiMYB4基因的克隆及对野菊的遗传转化
发布时间：2021-01-18 08:58
神农香菊（Chrysanthemu indicum var.aromaticum）是近几年发现的野菊（Chrysanthemum indicum）一变种,其花、叶、根均具有浓郁的香气,可用于精油提取、药材加工,是一种极具药用开发价值和园林应用价值的植物。神农香菊主要的有效成分有两类:挥发油、黄酮类化合物。在类黄酮代谢途径中花色素苷生物合成途径是其重要分支,研究类黄酮代谢途径对园林植物花色的改良具有重大意义。MYB转录因子对植物类黄酮代谢途径有重要调控作用。本研究欲从神农香菊克隆得到一 MYB基因,通过转基因方法使CiMYB4在烟草中过量表达,初步探究CiMYB4基因的功能。再对野菊进行遗传转化,以期为菊花类黄酮代谢途径的调控网络提供参考,同时也为菊花花色创新提供理论依据。本研究以神农香菊为试验材料,在神农香菊转录组数据的基础上,分析筛选并克隆获得了CiMYB 基因,利用生物信息学方法对CiMYB4基因进行分析;双酶切方法构建植物过表达载体,对烟草进行遗传转化,初步探究CiMYB4基因的调控作用;再将CiMYB4基因转入野菊中,为后期在CiMYB4基因对野菊类黄酮代谢途径与花色变化的研究...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]黄梁木实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择[J]. 张登,李景剑,张梦洁,包钰韬,杨霄,徐武云,欧阳昆唏,陈晓阳. 植物学报. 2018(06)
[2]植物黄酮醇生物合成及其调控研究进展[J]. 曹运琳,邢梦云,徐昌杰,李鲜. 园艺学报. 2018(01)
[3]烟草FLS基因表达抑制对类黄酮代谢的影响[J]. 宋中邦,李文正,高玉龙,王丙武,师君丽,余玉珍,陈丽梅,李永平. 基因组学与应用生物学. 2016(12)
[4]植物黄酮化合物生物合成、积累及调控的研究进展[J]. 周明,沈勇根,朱丽琴,艾啸威,曾璟,杨洪烨. 食品研究与开发. 2016(18)
[5]水蕨（Ceratopteris thalictroides）查尔酮合成酶基因的克隆和表达（英文）[J]. 曹建国,陈雪菲,谢颖华,张敏,王全喜. 植物科学学报. 2015(04)
[6]神农香菊表皮毛特征及腺毛分泌物成分[J]. 何淼,刘颖竹,张蕊,孙颖. 东北林业大学学报. 2015(09)
[7]不同植物黄酮醇合成酶FLS的生物信息学分析[J]. 黄琼林,蔡春. 广东农业科学. 2014(13)
[8]紫山药花青素调控基因DaF3H的克隆及表达分析[J]. 闫瑞霞,殷剑美,韩晓勇,张培通. 园艺学报. 2014(04)
[9]石蒜黄烷酮3–羟化酶基因LrF3H的克隆及表达分析[J]. 黄春红,高燕会,朱玉球,童再康,姜小凤. 园艺学报. 2013(05)
[10]神农香菊黄酮类化合物酶促提取及抗氧化性研究[J]. 罗诚浩,魏敏,陈义坤,宋旭艳,柯炜昌. 世界中西医结合杂志. 2012(09)
硕士论文
[1]神农香菊CiMYB61基因的克隆及其功能的初步研究[D]. 王蕾.东北林业大学 2018
[2]野菊（Chrysanthemum indicum）ChiMYB基因克隆及其功能的初步研究[D]. 杨雪.东北林业大学 2017
[3]欧李四个花色苷相关MYB基因的克隆及遗传转化[D]. 郑斌.山西农业大学 2016
[4]桑树类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶基因的鉴定及功能分析[D]. 梁燕梅.西南大学 2016
[5]基于转录组测序的红盖鳞毛蕨类黄酮3’-羟化酶（F3’H）基因的克隆与表达分析[D]. 黄小芳.上海师范大学 2016
[6]拟南芥黄烷酮-3-羟化酶调控非生物胁迫抗性机理研究[D]. 孙鹏.山东农业大学 2014
本文编号：2984664
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１总ＲＮＡ胶图??
衽┫憔眨茫郑粒??纾驶?蚩寺〖吧?镄畔⒀Х治觯崳?２．３结果与分析??神农香菊叶片总ＲＮＡ电泳结果由图２－１可见，提取完整性好，其中５?ｓ、１８?ｓ和２８??ｓ三条核糖体带均清晰可见、无降解。ＲＮＡ的Ａ２６０／Ａ２３０在１．９３￣２．１２之间，??Ａ２６０／Ａ２８０在１．９５？２．０６之间，说明ＲＮＡ的纯度和浓度可以进行接下来的ｃＤＮＡ合成及??基因克隆等实验。??图２－１总ＲＮＡ胶图??Ｆｉｇ．２－１?Ｑｕａｎｔｉｔｙ?ｏｆ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｔｏｔｏｌ?ＲＮＡ??２．３＿１?ｃ／鮮似基因克隆与序列分析??以ＣｉＭＹＢ４－Ｆ／ＣｉＭＹＢ４－Ｒ为引物，以由神农香菊叶片总ＲＮＡ反转录获得ｃＤＮＡ为模??板，进行ＰＣＲ扩增，结果如图２－２。２％琼脂糖凝胶纯化后，进行胶回收。胶回收产物与??ｐＵＣ－Ｔ载体连接，热激法转化大肠杆菌ＤＨ５ａ感受态，提取阳性客隆菌液质粒，测序并??保存。测序结果显示与转录组预测序列相同。Ｃ７ＭＫ＾／基因长８４６?ｂｐ，编码２８１个氨基酸??（图２－３）。综上Ｃ７Ｍ｝似基因ＯＲＦ框已成功克隆出，将序列在ＮＣＢＩ上进行登录，登录??号：ＭＨ１４２２１４。??
图２－５ＴＭＰｒｅｄ预测ＣｉＭＹＢ４转录因子跨膜结构域??Ｆｉｇ．３－５?Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ?ｐｒｅｄｉｃｔ?ｏｆ?ＣｉＭＹＢ４?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｆａｃｔｏｒ?ｂｙ?ＴＭＰｒｅｄ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄梁木实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择[J]. 张登,李景剑,张梦洁,包钰韬,杨霄,徐武云,欧阳昆唏,陈晓阳. 植物学报. 2018(06)
[2]植物黄酮醇生物合成及其调控研究进展[J]. 曹运琳,邢梦云,徐昌杰,李鲜. 园艺学报. 2018(01)
[3]烟草FLS基因表达抑制对类黄酮代谢的影响[J]. 宋中邦,李文正,高玉龙,王丙武,师君丽,余玉珍,陈丽梅,李永平. 基因组学与应用生物学. 2016(12)
[4]植物黄酮化合物生物合成、积累及调控的研究进展[J]. 周明,沈勇根,朱丽琴,艾啸威,曾璟,杨洪烨. 食品研究与开发. 2016(18)
[5]水蕨（Ceratopteris thalictroides）查尔酮合成酶基因的克隆和表达（英文）[J]. 曹建国,陈雪菲,谢颖华,张敏,王全喜. 植物科学学报. 2015(04)
[6]神农香菊表皮毛特征及腺毛分泌物成分[J]. 何淼,刘颖竹,张蕊,孙颖. 东北林业大学学报. 2015(09)
[7]不同植物黄酮醇合成酶FLS的生物信息学分析[J]. 黄琼林,蔡春. 广东农业科学. 2014(13)
[8]紫山药花青素调控基因DaF3H的克隆及表达分析[J]. 闫瑞霞,殷剑美,韩晓勇,张培通. 园艺学报. 2014(04)
[9]石蒜黄烷酮3–羟化酶基因LrF3H的克隆及表达分析[J]. 黄春红,高燕会,朱玉球,童再康,姜小凤. 园艺学报. 2013(05)
[10]神农香菊黄酮类化合物酶促提取及抗氧化性研究[J]. 罗诚浩,魏敏,陈义坤,宋旭艳,柯炜昌. 世界中西医结合杂志. 2012(09)
硕士论文
[1]神农香菊CiMYB61基因的克隆及其功能的初步研究[D]. 王蕾.东北林业大学 2018
[2]野菊（Chrysanthemum indicum）ChiMYB基因克隆及其功能的初步研究[D]. 杨雪.东北林业大学 2017
[3]欧李四个花色苷相关MYB基因的克隆及遗传转化[D]. 郑斌.山西农业大学 2016
[4]桑树类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶基因的鉴定及功能分析[D]. 梁燕梅.西南大学 2016
[5]基于转录组测序的红盖鳞毛蕨类黄酮3’-羟化酶（F3’H）基因的克隆与表达分析[D]. 黄小芳.上海师范大学 2016
[6]拟南芥黄烷酮-3-羟化酶调控非生物胁迫抗性机理研究[D]. 孙鹏.山东农业大学 2014
本文编号：2984664
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