百合体胚发生过程中内源生长素含量测定及miR393b/TIR1表达分析
发布时间：2021-01-29 15:38
兰州百合（Lilium davidian var.unicolor）和细叶百合（Lilium pumilum DC.Fisch.）是原产于我国的野生百合,具有较高的观赏价值和经济价值,但种球繁殖周期较长,繁殖系数较低。体细胞胚发生具有再生效率高,繁殖速度快等特点,对于百合的种质保存,种球繁殖等具有重要意义。生长素作为一种重要的植物激素,在植物生长发育过程中起重要调节作用,目前有关内源生长素对体细胞胚发生调控机理尚未明了。本研究利用超高液相色谱-三重四级杆质谱联用仪对两种百合体细胞胚发生过程中内源生长素含量进行了测定,根据实验室前期测序结果筛选出生长素信号转导过程中起调控作用的miR393b及靶基因TIR1,克隆了mi R393b成熟体序列,对miR393b及靶基因TIR1进行了表达分析。为进一步研究内源生长素在百合体细胞胚发生过程中的作用奠定了基础。主要结论如下:1.内源生长素含量测定两种百合中内源生长素含量均存在两次峰值。在细叶百合中,培养15 d胚性细胞以内起源形式出现时生长素含量达到最大值,培养42 d胚性愈伤组织Ⅱ阶段出现第二个峰值。在兰州百合中,培养12 d胚性细胞以内起源形...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
1.1 生长素对植物体细胞胚发生的重要作用
1.1.1 生长素合成
1.1.2 生长素的运输
1.1.3 生长素信号响应
1.1.4 植物内源激素检测研究进展
1.1.5 外源生长素与植物体细胞胚发生
1.1.6 内源生长素与植物体细胞胚发生
1.2 microRNA调控植物体细胞胚发生研究进展
1.2.1 miRNA的合成
1.2.2 miRNA的作用机制
1.2.3 植物miRNA与体细胞胚发生
1.2.4 植物miRNA与激素调节
1.2.5 miR393研究进展
1.3 本研究的目的意义
2 百合体细胞胚发生过程中生长素含量测定
2.1 材料与方法
2.1.1 试验材料
2.1.2 主要试剂及仪器
2.1.3 溶液配制
2.1.4 激素提取
2.1.5 固相萃取
2.1.6 浓缩
2.1.7 质谱条件
2.1.8 色谱条件
2.2 结果分析
2.2.1 提取溶剂的选择
2.2.2 提取时间的选择
2.2.3 质谱条件的选择
2.2.4 色谱条件的选择
2.2.5 线性关系和检测极限
2.2.6 回收率和准确度
2.2.7 百合体细胞胚各时期生长素含量变化
2.3 讨论
3 lda-miR393b和lpu-miR393b的克隆
3.1 材料方法
3.1.1 试验材料
3.1.2 主要试剂及仪器
3.1.3 RNA提取
3.1.4 miR393b特异茎环反转录
3.1.5 lda-miR393b和lpu-miR393b扩增反应
3.1.6 PCR产物纯化
3.1.7 目的片段的连接、转化和测序
3.2 结果分析
3.2.1 细叶百合和兰州百合总RNA提取
3.2.2 lpu-miR393b和lda-miR393b的克隆
3.3 讨论
4 百合体细胞胚发生过程中miR393b及靶基因TIR1表达分析
4.1 材料方法
4.1.1 试验材料
4.1.2 主要试剂及仪器
4.1.3 RNA提取
4.1.4 qRT-PCR引物设计
4.1.5 cDNA模板的合成
4.1.6 miR393b及其靶基因TIR1的qRT-PCR分析
4.2 结果分析
4.2.1 引物特异性分析
4.2.2 miR393b及其靶基因TIR1在百合体胚发生过程中表达及关联分析
4.3 讨论
总结
主要创新点
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]山杏体细胞胚胎发生及其组织学观察[J]. 何炎红,吴高殷,白玉娥,田春. 经济林研究. 2018(01)
[2]内源激素对同源四倍体黑皮冬瓜自交花粉萌发生长的影响[J]. 万正林,周艳霞,邓俭英,李立志,武鹏,龙明华. 华南农业大学学报. 2018(01)
[3]云南重楼种子萌发过程内源激素含量及酶活性变化研究[J]. 苏海兰,周先治,李希,陈敏健,卓景泰,唐建阳,封淼根,张林好. 核农学报. 2018(01)
[4]脯氨酸通过影响生长素途径相关信号抑制拟南芥根的生长[J]. 王翠平,陈建伟,乔改霞. 植物生理学报. 2017(08)
[5]光皮桦miR393及其靶基因在低氮胁迫中的表达分析[J]. 潘樱,张仪平,朱敏慧,叶丰,林仕雄,黄蒙慧,童再康,张俊红. 核农学报. 2017(10)
[6]枇杷叶片胚性愈伤组织诱导与内源激素含量的关系[J]. 周思宇,王永清. 植物科学学报. 2017(01)
[7]灵发素（LFS）对诱导半夏体细胞胚胎发生过程中内源激素含量的影响[J]. 梁琼月,周凤珏,许鸿源,覃柳兰,何丽珊,何冰. 热带农业科学. 2017(02)
[8]马蔺根系响应Cd胁迫的miRNA高通量测序分析[J]. 刘凉琴,宋爱萍,张永侠,原海燕,黄苏珍,刘兆磊,顾春笋. 植物资源与环境学报. 2016(03)
[9]栓皮栎胚性和非胚性愈伤组织生化特性研究[J]. 孟姣,张存旭,孙琳,戎旭旭. 西北林学院学报. 2015(05)
[10]百子莲生长素受体基因TIR1的全长cDNA克隆及功能分析[J]. 邹梦雯,岳建华,张荻,申晓辉. 上海交通大学学报(农业科学版). 2015(03)
博士论文
[1]两种中国原产百合体细胞胚发生及miRNA调控网络初步解析[D]. 张静.沈阳农业大学 2017
[2]陆地棉体细胞胚胎发生过程中miRNAs及其靶标的鉴定和GhmiR157a/GhSPL10功能分析[D]. 王丽晨.华中农业大学 2017
[3]基于基质固相分散萃取—高效液相色谱—串联质谱的植物激素分析[D]. 王璐.中国科学技术大学 2014
[4]牡丹胚性愈伤组织诱导及胚性相关基因PsSERK的初步研究[D]. 刘艺平.河南农业大学 2015
硕士论文
[1]百合体胚发生过程中miR166及其靶基因的鉴定与表达分析[D]. 杨越.沈阳农业大学 2017
[2]基于体细胞胚发生的两种中国原产百合多倍体创制[D]. 盖美竹.沈阳农业大学 2017
[3]植物激素脱落酸在草莓果实成熟着色上的研究[D]. 宋晓隽.四川农业大学 2015
[4]毒莠定（PIC）调控百子莲愈伤组织胚性诱导与保持生理生化基础的研究[D]. 邹梦雯.上海交通大学 2015
[5]石斛兰离体培养条件优化及其离体培养物的microRNA研究[D]. 吴高杰.福建农林大学 2012
[6]液相串联质谱测定水稻37种内源激素方法的研究[D]. 马有宁.中国农业科学院 2011
[7]柑橘中冷胁迫相关miRNAs的克隆与鉴定[D]. 张金梅.湖南农业大学 2011
[8]番茄果实中miRNA的克隆及表达水平鉴定[D]. 邹臣华.重庆大学 2007
本文编号：3007135
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
1.1 生长素对植物体细胞胚发生的重要作用
1.1.1 生长素合成
1.1.2 生长素的运输
1.1.3 生长素信号响应
1.1.4 植物内源激素检测研究进展
1.1.5 外源生长素与植物体细胞胚发生
1.1.6 内源生长素与植物体细胞胚发生
1.2 microRNA调控植物体细胞胚发生研究进展
1.2.1 miRNA的合成
1.2.2 miRNA的作用机制
1.2.3 植物miRNA与体细胞胚发生
1.2.4 植物miRNA与激素调节
1.2.5 miR393研究进展
1.3 本研究的目的意义
2 百合体细胞胚发生过程中生长素含量测定
2.1 材料与方法
2.1.1 试验材料
2.1.2 主要试剂及仪器
2.1.3 溶液配制
2.1.4 激素提取
2.1.5 固相萃取
2.1.6 浓缩
2.1.7 质谱条件
2.1.8 色谱条件
2.2 结果分析
2.2.1 提取溶剂的选择
2.2.2 提取时间的选择
2.2.3 质谱条件的选择
2.2.4 色谱条件的选择
2.2.5 线性关系和检测极限
2.2.6 回收率和准确度
2.2.7 百合体细胞胚各时期生长素含量变化
2.3 讨论
3 lda-miR393b和lpu-miR393b的克隆
3.1 材料方法
3.1.1 试验材料
3.1.2 主要试剂及仪器
3.1.3 RNA提取
3.1.4 miR393b特异茎环反转录
3.1.5 lda-miR393b和lpu-miR393b扩增反应
3.1.6 PCR产物纯化
3.1.7 目的片段的连接、转化和测序
3.2 结果分析
3.2.1 细叶百合和兰州百合总RNA提取
3.2.2 lpu-miR393b和lda-miR393b的克隆
3.3 讨论
4 百合体细胞胚发生过程中miR393b及靶基因TIR1表达分析
4.1 材料方法
4.1.1 试验材料
4.1.2 主要试剂及仪器
4.1.3 RNA提取
4.1.4 qRT-PCR引物设计
4.1.5 cDNA模板的合成
4.1.6 miR393b及其靶基因TIR1的qRT-PCR分析
4.2 结果分析
4.2.1 引物特异性分析
4.2.2 miR393b及其靶基因TIR1在百合体胚发生过程中表达及关联分析
4.3 讨论
总结
主要创新点
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]山杏体细胞胚胎发生及其组织学观察[J]. 何炎红,吴高殷,白玉娥,田春. 经济林研究. 2018(01)
[2]内源激素对同源四倍体黑皮冬瓜自交花粉萌发生长的影响[J]. 万正林,周艳霞,邓俭英,李立志,武鹏,龙明华. 华南农业大学学报. 2018(01)
[3]云南重楼种子萌发过程内源激素含量及酶活性变化研究[J]. 苏海兰,周先治,李希,陈敏健,卓景泰,唐建阳,封淼根,张林好. 核农学报. 2018(01)
[4]脯氨酸通过影响生长素途径相关信号抑制拟南芥根的生长[J]. 王翠平,陈建伟,乔改霞. 植物生理学报. 2017(08)
[5]光皮桦miR393及其靶基因在低氮胁迫中的表达分析[J]. 潘樱,张仪平,朱敏慧,叶丰,林仕雄,黄蒙慧,童再康,张俊红. 核农学报. 2017(10)
[6]枇杷叶片胚性愈伤组织诱导与内源激素含量的关系[J]. 周思宇,王永清. 植物科学学报. 2017(01)
[7]灵发素（LFS）对诱导半夏体细胞胚胎发生过程中内源激素含量的影响[J]. 梁琼月,周凤珏,许鸿源,覃柳兰,何丽珊,何冰. 热带农业科学. 2017(02)
[8]马蔺根系响应Cd胁迫的miRNA高通量测序分析[J]. 刘凉琴,宋爱萍,张永侠,原海燕,黄苏珍,刘兆磊,顾春笋. 植物资源与环境学报. 2016(03)
[9]栓皮栎胚性和非胚性愈伤组织生化特性研究[J]. 孟姣,张存旭,孙琳,戎旭旭. 西北林学院学报. 2015(05)
[10]百子莲生长素受体基因TIR1的全长cDNA克隆及功能分析[J]. 邹梦雯,岳建华,张荻,申晓辉. 上海交通大学学报(农业科学版). 2015(03)
博士论文
[1]两种中国原产百合体细胞胚发生及miRNA调控网络初步解析[D]. 张静.沈阳农业大学 2017
[2]陆地棉体细胞胚胎发生过程中miRNAs及其靶标的鉴定和GhmiR157a/GhSPL10功能分析[D]. 王丽晨.华中农业大学 2017
[3]基于基质固相分散萃取—高效液相色谱—串联质谱的植物激素分析[D]. 王璐.中国科学技术大学 2014
[4]牡丹胚性愈伤组织诱导及胚性相关基因PsSERK的初步研究[D]. 刘艺平.河南农业大学 2015
硕士论文
[1]百合体胚发生过程中miR166及其靶基因的鉴定与表达分析[D]. 杨越.沈阳农业大学 2017
[2]基于体细胞胚发生的两种中国原产百合多倍体创制[D]. 盖美竹.沈阳农业大学 2017
[3]植物激素脱落酸在草莓果实成熟着色上的研究[D]. 宋晓隽.四川农业大学 2015
[4]毒莠定（PIC）调控百子莲愈伤组织胚性诱导与保持生理生化基础的研究[D]. 邹梦雯.上海交通大学 2015
[5]石斛兰离体培养条件优化及其离体培养物的microRNA研究[D]. 吴高杰.福建农林大学 2012
[6]液相串联质谱测定水稻37种内源激素方法的研究[D]. 马有宁.中国农业科学院 2011
[7]柑橘中冷胁迫相关miRNAs的克隆与鉴定[D]. 张金梅.湖南农业大学 2011
[8]番茄果实中miRNA的克隆及表达水平鉴定[D]. 邹臣华.重庆大学 2007
本文编号：3007135
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