黄花菜染色体制片及荧光原位杂交技术体系的建立

发布时间：2021-03-02 12:18

　　[目的]黄花菜（Hemerocallis citrina Barni）是我国特有的经济型蔬菜,目前急需加速分子育种进程,开发遗传学平台。本文旨在优化黄花菜染色体制片技术,构建黄花菜荧光原位杂交体系,为遗传图谱与物理图谱的整合提供技术基础。[方法]以大同黄花菜（H.cv.‘DatongHuanghua’）为研究材料,分别对中期根尖细胞和粗线期花粉母细胞的制片方法进行优化,同时以拟南芥45S rDNA和5S rDNA序列为探针,筛选和优化黄花菜荧光原位杂交体系技术参数。[结果]中期染色体制片最佳体系:2.9μg·mL^-1浓度的八羟基喹啉溶液处理4 h,混合酶液（纤维素酶∶果胶酶=2∶1）37℃酶解160 min;粗线期染色体制片最佳体系:采集4～5 mm龄段花蕾,卡诺固定液4℃固定24 h后,混合酶液（纤维素酶∶果胶酶=2∶1）37℃酶解220 min,使用改良火焰干燥法,均可得到理想制片。采用直接标记法对45S rDNA和5S rDNA探针序列进行荧光标记,结果显示杂交信号清晰稳定,背景干扰小。[结论]本研究构建并优化了黄花菜染色体制片技术及荧光原位杂交体系,可为黄... 

【文章来源】：山西农业大学学报(自然科学版). 2020,40(06)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

不同预处理条件下染色体凝缩情况

在花蕾发育早期，通过采集不同长度花蕾并观察花药内花粉母细胞的细胞学特征，以确定花粉母细胞集中在粗线期时对应的花蕾长度。由图3可以得出，花蕾处于2～3 mm龄段时，花药内花粉母细胞多处于分裂间期和减数分裂细线期（图3B）。花蕾处于4～5 mm龄段时，花粉母细胞多处于粗线期或粗线期之前（图3C），此时细胞内核仁明显，与细线期相比，由于同源染色体联会二价体开始收缩变粗并相互缠绕，适合作为花粉母细胞粗线期染色体制片材料。当花蕾生长至4～5 mm时，花粉母细胞大多已进入减数分裂Ⅰ中期和后期（图3D）。超过6 mm的花蕾，花粉母细胞已进入四分体时期甚至发育成花粉粒。图3 花粉母细胞减数分裂不同时期细胞学特征

花粉母细胞减数分裂不同时期细胞学特征

【参考文献】：
期刊论文
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[3]萱草属植物染色体制片技术优化及倍性鉴定[J]. 张俊,王荣梅,王金耀,侯非凡,亢秀萍,李森,邢国明.  河北农业大学学报. 2018(03)
[4]食用黄花菜中含秋水仙碱的质证研究[J]. 汤敏娜,刘秀斌,黄嘉璐,邓放明,曾建国.  中草药. 2016(18)
[5]黄瓜倍性材料创制及染色体组成的FISH鉴定[J]. 管苇,张云霞,杨树琼,陈劲枫,娄群峰.  中国农业科学. 2014(17)
[6]蔷薇属3个野生种中45S rDNA和5S rDNA的物理定位[J]. 张婷,蹇洪英,田敏,王其刚,张颢,晏慧君,邱显钦,唐开学.  园艺学报. 2014(05)
[7]橡胶树叶片染色体制片方法的优化[J]. 高和琼,王英,金鸽,邱海燕,庄南生.  热带作物学报. 2009(05)
[8]荧光原位杂交技术在细胞遗传学和基因图谱绘制中的应用[J]. 赵志强,黄永,陈玲.  河南科技大学学报(医学版). 2003(02)
[9]黄花菜品种资源研究[J]. 刘永庆,沈美娟.  园艺学报. 1990(01)

博士论文
[1]萱草属（Hemerocallis spp.）种质资源亲缘关系及种内杂交新种质选择[D]. 朱云华.南京林业大学 2010

硕士论文
[1]梅花染色体制片技术优化及基于荧光原位杂交的核型分析[D]. 陈晶鑫.北京林业大学 2013



本文编号：3059248