香石竹‘马斯特’原生质体分离、纯化及再生体系的研究

发布时间：2021-03-19 22:50

　　香石竹（Dianthuscaryophyllus）又名康乃馨,是全球销量最大的花卉之一,花朵还可提炼香精。在育种工作中,无人工处理条件下的香石竹通常不结实,成为其在杂交育种上的局限。原生质体融合育种能够克服香石竹杂交育种的局限,为香石竹耐高温、高观赏性状育种提供有利途径。高效的香石竹原生质分离、纯化及再生体系的建立,将为此育种工作提供基础。本实验以香石竹无菌系叶片为主要材料,分析了其原生质体分离、纯化及再生体系建立等相关条件。确立了香石竹原生质体培养的最佳的酶解方式、酶液组分、浓度水平、酶解时间和纯化方式。并对原生质体培养方式、激素种类与浓度水平、植株再生体系进行探究。结果如下:1.香石竹原生质体分离:1)渗透压稳定剂:利用质壁分离测定香石竹无菌系叶片的渗透压为0.5mol/L,选用甘露醇溶液作为渗透压稳定剂;2)原生质体粒径大小:通过显微镜标尺测量,香石竹原生质体粒径大小在40-70μm之间,选用200目尼龙网进行初步纯化;3)采用静置酶解—界面纯化法与低速振荡—沉降纯化法进行原生质体分离与纯化:静置酶解—界面纯化法,最适条件为0.3%纤维素酶+0.5%离析酶,酶解时间为12h。最高... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１．血球计数板（“Ｗ”为计数区，面积１ｍｍ２，体积Ｏ．ｌｐＬ）??Ｆｉｇ２－１．?Ｔｈｅ?ｈｅｍａｃｙｔｏｍｅｔｅｒ，?“Ｗ?’’?ｉｓ?ｔｈｅ?ｃｏｕｎｔｉｎｇ?ｒｅｇｉｏｎ，?ａｒｅａ?ｌｍｎｉ２，?ｖｏｌｕｍｅ??

?原生质体悬浮液混合，室温静置５－ｌＯｍｉｎ，取混合液于载玻片上，无活性的死细??胞能吸收酚藏花红染料而呈红色（图２－２），球状均匀、绿色、叶绿体清晰可见的??细胞即为活力较高的原生质体。每个样品重复３次，取平均值（王琴等２０１３）。??原生质体活力＝绿色的原生质体／观察原生质体总数Ｍ００％??ｉｐ?？?＊?■??图２－２原生质体活性检测??注：红色为无活性的原生质体，绿色有活性，Ｂａｒ＝５〇ｎｍ。??Ｆｉｇ?２－２?Ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ??Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ?ｒｅｄ?ｉｓ?ｉｎａｃｔｉｖｅ，?ｇｒｅｅｎ?ｉｓ?ａｃｔｉｖｅ，?Ｂａｒ＝５０｜ｉｍ．??２．３结果与分析??２．３．１香石竹原生质体培养材料状态的调整??在含ＡｇＮＯ；的培养基中，植株普遍生长迅速，四周苗平均株高达６．１８ｃｍ?（图??２－３Ａ），高于对照组的株高４．２５ｃｍ（图２－３Ａ、图２－３Ａ，?Ｂａｒ＝ｌｃｍ），叶片增大（图??２－３Ｃ、图２－３Ｄ，Ｂａｒ＝ｌｃｍ）。Ｔ－ｔｅｓｔ结果表明处理组与对照差异不显著（图２－４Ｂ、??图２－４Ｂ）。因而，ＡｇＮ０３的添加对于材料生长量的作用并不显著，不能达到有??效的作用效果。但处理组玻璃化现象减少

Ａ?ＭＳ＾ＡｇＮ０３?ＭＳ?Ｂ?ＭＳ＋．ＡｇＮ０３?ＭＳ??图２－４株高与叶片长度比较??注：Ａ．处理组与对照株高方差比较；Ｂ．处理组与对照长度方差比较??Ｆｉｇ２－４?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｐｌａｎｔ?ｈｅｉｇｈｔ?ａｎｄ?ｌｅａｆ?ｌｅｎｇｔｈ??Ｎｏｔｅ：?Ａ．?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｐｌａｎｔ?ｈｅｉｇｈｔ；?Ｂ．??Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｌｅａｆ?ｌｅｎｇｔｈ．??１７??

【参考文献】：
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本文编号：3090366