柑橘CsGABP启动子作用元件分析及互作蛋白筛选
发布时间：2021-03-21 04:12
有机酸是决定柑橘果实内在品质的重要组分之一,其含量的高低与果实的衰老进程和贮藏性能密切相关。高含量的有机酸有助于果实的保鲜,因此寻找维持高含量有机酸或减缓有机酸降解的方法来延缓柑橘果实衰老和维持果实品质对柑橘采后研究具有重要意义。柠檬酸是柑橘果实中最主要的有机酸,其含量在采后呈波动下降趋势。GABA代谢支路与TCA循环紧密联系,是调控柠檬酸含量的重要途径,参与调控采后柑橘果实有机酸的降解。GABP（线粒体GABA转运蛋白）是联系GABA支路与TCA循环的纽带,可作为调控柑橘果实采后柠檬酸代谢的关键点。寻找GABP上游调控因子,从转录调控水平探索GABP对柑橘果实采后柠檬酸代谢的调控机制,可为开发调控柑橘采后有机酸含量及延缓衰老的技术提供理论依据。本研究通过克隆柑橘GABP基因（CsGABP）并分析其启动子顺式作用元件,利用转录组数据筛选及酵母单杂交技术验证调控CsGABP的候选转录因子,并探讨其调控机制,研究结果如下:1.克隆得到HB柚和无酸柚CsGABP基因组全长及启动子序列,并克隆HB柚、无酸柚、冰糖橙、锦橙、沙田柚五个柑橘品种CsGABP基因ORF区。发现HB柚和无酸柚各存在两条...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 前言
1.1 课题的提出
1.2 柑橘果实有机酸代谢调控研究
1.3 GABA代谢研究
1.3.1 GABA功能
1.3.2 GABA代谢途径
1.3.3 GABA代谢调控
1.4 启动子与转录因子互作研究
1.4.1 启动子研究
1.4.2 转录因子研究
1.4.3 酵母单杂交
1.5 研究目的与内容
2 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株和载体
2.1.3 工具酶及主要试剂
2.1.4 酵母培养基及溶液配方
2.1.5 主要仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 HB柚和无酸柚基因组DNA提取
2.2.2 CsGABP基因组全长gDNA、ORF区及启动子序列克隆
2.2.3 生物信息学分析
2.2.4 qRT-PCR验证共表达的转录因子
2.2.5 载体构建
2.2.6 诱饵酵母菌株构建
2.2.7 筛选cDNA文库
2.2.8 酵母单杂点对点验证
3 结果与分析
3.1 CsGABP基因及启动子克隆
3.1.1 CsGABP基因组全长gDNA、ORF区
3.1.2 CsGABP基因启动子克隆
3.2 CsGABP-a基因启动子顺式作用元件预测
3.3 转录组数据筛选候选基因
3.4 qRT-PCR验证共表达转录因子
3.5 诱饵载体pBait-AbAi构建
3.5.1 元件诱饵载体构建
3.5.2 片段诱饵载体构建
3.6 诱饵酵母菌株构建
3.6.1 诱饵载体转化Y1H Gold酵母
3.6.2 诱饵酵母背景表达水平检测
3.7 cDNA文库筛选
3.8 猎物载体AD-Prey构建
3.9 酵母单杂点对点验证
3.9.1 AD-Prey载体质粒转化诱饵酵母
3.9.2 AD-Prey载体质粒转化诱饵酵母阳性克隆鉴定
4 讨论
4.1 酵母单杂交体系探讨
4.2 筛选的转录因子结合位点探讨
4.3 筛选转录因子在采后柑橘中功能探讨
4.4 展望
参考文献
附录I 酵母转化方法
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]启动子分析方法的研究进展[J]. 王秋岩,何淑雅,马云,李俐娟,李斌元. 现代生物医学进展. 2015(14)
[2]The CONSTANS-like 4 transcription factor,AtCOL4,positively regulates abiotic stress tolerance through an abscisic acid-dependent manner in Arabidopsis[J]. Ji-Hee Min,Jung-Sung Chung,Kyeong-Hwan Lee,Cheol Soo Kim. Journal of Integrative Plant Biology. 2015(03)
[3]转录因子相关数据库[J]. 陈鸿飞,王进科. 遗传. 2010(10)
[4]瓯柑果实采后的品质和氧化还原酶活性变化研究[J]. 陈巍,郭秀珠,黄品湖,林绍生,徐文荣,闫田力. 福建农业学报. 2010(04)
[5]柑橘果实采后热处理研究进展[J]. 王青云,龚吉军,钟海雁. 食品科学. 2010(11)
[6]采前壳寡糖处理对柑橘果实贮藏品质的影响[J]. 邓丽莉,黄艳,周玉翔,曾凯芳. 食品科学. 2009(24)
[7]柑橘果实发育过程中有机酸含量及相关代谢酶活性的变化[J]. 罗安才,杨晓红,邓英毅,李纯凡,向可术,李道高. 中国农业科学. 2003(08)
[8]茎部注射硒肥对金桔的生长及果实品质的影响[J]. 吴其飞,黄达明,管国强. 水土保持学报. 2002(06)
[9]脐橙果实有机酸代谢调控措施的初步研究[J]. 文涛,熊庆娥,曾伟光,刘远鹏. 四川农业大学学报. 2001(02)
[10]喷施核苷酸有机营养剂改进椪柑果实品质的效果[J]. 姜小文,张秋明,王灿辉,袁世珍. 中国南方果树. 2001(03)
博士论文
[1]柠檬酸代谢及转运相关基因对柑橘果实酸度的调控机制[D]. 林琼.浙江大学 2015
[2]椪柑和脐橙果实柠檬酸合成与降解相关基因表达及其调控研究[D]. 陈明.浙江大学 2013
[3]柚果实采后贮藏期间有机酸代谢的研究[D]. 孙晓华.华中农业大学 2013
[4]病原诱导启动子和组织特异性启动子的分离克隆和功能鉴定[D]. 蔡萌.华中农业大学 2007
硕士论文
[1]柑橘果实有机酸代谢及调控研究[D]. 赵淼.安徽农业大学 2008
本文编号：3092300
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 前言
1.1 课题的提出
1.2 柑橘果实有机酸代谢调控研究
1.3 GABA代谢研究
1.3.1 GABA功能
1.3.2 GABA代谢途径
1.3.3 GABA代谢调控
1.4 启动子与转录因子互作研究
1.4.1 启动子研究
1.4.2 转录因子研究
1.4.3 酵母单杂交
1.5 研究目的与内容
2 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株和载体
2.1.3 工具酶及主要试剂
2.1.4 酵母培养基及溶液配方
2.1.5 主要仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 HB柚和无酸柚基因组DNA提取
2.2.2 CsGABP基因组全长gDNA、ORF区及启动子序列克隆
2.2.3 生物信息学分析
2.2.4 qRT-PCR验证共表达的转录因子
2.2.5 载体构建
2.2.6 诱饵酵母菌株构建
2.2.7 筛选cDNA文库
2.2.8 酵母单杂点对点验证
3 结果与分析
3.1 CsGABP基因及启动子克隆
3.1.1 CsGABP基因组全长gDNA、ORF区
3.1.2 CsGABP基因启动子克隆
3.2 CsGABP-a基因启动子顺式作用元件预测
3.3 转录组数据筛选候选基因
3.4 qRT-PCR验证共表达转录因子
3.5 诱饵载体pBait-AbAi构建
3.5.1 元件诱饵载体构建
3.5.2 片段诱饵载体构建
3.6 诱饵酵母菌株构建
3.6.1 诱饵载体转化Y1H Gold酵母
3.6.2 诱饵酵母背景表达水平检测
3.7 cDNA文库筛选
3.8 猎物载体AD-Prey构建
3.9 酵母单杂点对点验证
3.9.1 AD-Prey载体质粒转化诱饵酵母
3.9.2 AD-Prey载体质粒转化诱饵酵母阳性克隆鉴定
4 讨论
4.1 酵母单杂交体系探讨
4.2 筛选的转录因子结合位点探讨
4.3 筛选转录因子在采后柑橘中功能探讨
4.4 展望
参考文献
附录I 酵母转化方法
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]启动子分析方法的研究进展[J]. 王秋岩,何淑雅,马云,李俐娟,李斌元. 现代生物医学进展. 2015(14)
[2]The CONSTANS-like 4 transcription factor,AtCOL4,positively regulates abiotic stress tolerance through an abscisic acid-dependent manner in Arabidopsis[J]. Ji-Hee Min,Jung-Sung Chung,Kyeong-Hwan Lee,Cheol Soo Kim. Journal of Integrative Plant Biology. 2015(03)
[3]转录因子相关数据库[J]. 陈鸿飞,王进科. 遗传. 2010(10)
[4]瓯柑果实采后的品质和氧化还原酶活性变化研究[J]. 陈巍,郭秀珠,黄品湖,林绍生,徐文荣,闫田力. 福建农业学报. 2010(04)
[5]柑橘果实采后热处理研究进展[J]. 王青云,龚吉军,钟海雁. 食品科学. 2010(11)
[6]采前壳寡糖处理对柑橘果实贮藏品质的影响[J]. 邓丽莉,黄艳,周玉翔,曾凯芳. 食品科学. 2009(24)
[7]柑橘果实发育过程中有机酸含量及相关代谢酶活性的变化[J]. 罗安才,杨晓红,邓英毅,李纯凡,向可术,李道高. 中国农业科学. 2003(08)
[8]茎部注射硒肥对金桔的生长及果实品质的影响[J]. 吴其飞,黄达明,管国强. 水土保持学报. 2002(06)
[9]脐橙果实有机酸代谢调控措施的初步研究[J]. 文涛,熊庆娥,曾伟光,刘远鹏. 四川农业大学学报. 2001(02)
[10]喷施核苷酸有机营养剂改进椪柑果实品质的效果[J]. 姜小文,张秋明,王灿辉,袁世珍. 中国南方果树. 2001(03)
博士论文
[1]柠檬酸代谢及转运相关基因对柑橘果实酸度的调控机制[D]. 林琼.浙江大学 2015
[2]椪柑和脐橙果实柠檬酸合成与降解相关基因表达及其调控研究[D]. 陈明.浙江大学 2013
[3]柚果实采后贮藏期间有机酸代谢的研究[D]. 孙晓华.华中农业大学 2013
[4]病原诱导启动子和组织特异性启动子的分离克隆和功能鉴定[D]. 蔡萌.华中农业大学 2007
硕士论文
[1]柑橘果实有机酸代谢及调控研究[D]. 赵淼.安徽农业大学 2008
本文编号：3092300
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