葡萄风信子花青素合成途径中转录因子MaHY5的功能研究
发布时间：2021-03-30 20:59
亚美尼亚葡萄风信子（Muscari armeniacum）作为一种园林中常用的地被观花植物,其花色是最重要的观赏性状。而光照作为植物生长最关键的环境因素之一,通过很多方式影响了葡萄风信子花色的形成。研究葡萄风信子花色的形成机理是花色育种工作的重中之重。目前对葡萄风信子的花色研究已初步对其含有的花青苷物质进行了鉴定,并且对其花青苷合成通路上的关键结构基因进行了克隆和表达分析,而且对调控其花色形成的转录机制进行了初步阐明,但是光照对葡萄风信子的影响机制尚不清楚。本研究在课题组前期相关研究的基础上,筛选出葡萄风信子光形态建成中的一个重要bZIP转录因子基因,通过对此转录因子基因的克隆、序列分析、转录表达分析及其在烟草中的瞬时转化分析对其功能进行了研究,获得以下结果:1.从亚美尼亚葡萄风信子花中克隆到了一个bZIP转录因子基因,通过基因序列比对和分析发现其具有HY5转录因子特征结构域,所以将其命名为MaHY5,GenBank登录号MK281355。生物信息学分析显示MaHY5基因的开放阅读框为438bp,编码145个氨基酸,含有一个保守的bZIP特征结构域;MaHY5蛋白质属于亲水性蛋白,无信...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转基因酵母菌落的PCR鉴定M.DNAMarkerCK1/CK2.空白对照1-5.转入PMaMybA-pABAi载体的酵母菌阳性克隆PCR
靥宓慕湍妇?梢员灰种粕?さ淖钚?bA浓度为600ng/mL（图2-2）。转入 PMaMybA-pABAi 载体的酵母菌在高浓度 1000ng/mLAbA 的培养基中依然能正常生长，高浓度 AbA 无法使酵母菌被抑制。图 2-2 转化酵母菌 AbA 浓度筛选Fig. 2-2 Transformed yeastAbAconcentration screening转入 PMaAN2-pABAi 载体的酵母菌在转入葡萄风信子花 cDNA 文库后，可以在含有600ng/mL AbA 的 SD/- Leu/AbA 培养基上生长，说明文库成功转入酵母菌，在重复划线步骤2-3次后，获得了48个阳性酵母菌菌株。利用Matchmaker Insert Check PCR Mix2 酶进行 PCR 检测后，共获得了具有单条带的酵母菌菌株 25 个，具有双条带酵母菌菌株 15 个（图 2-3）
图 2-3 MaMybA 启动子筛库结果M. DNAMarker; 图中*表示单条带结果Fig. 2-3 The result of the promoter of MaMybAyeast library scrM. DNAMarker; * in the figure indicates the result of a single带的酵母菌菌株用 YPDA 培养基扩繁之后提取酵母质t 网站上分析，推测结果均为未知蛋白。筛选技术是酵母双杂交系统的变体，是利用报告基合蛋白（如转录因子）之间物理相互作用的技术（Latchmaker Gold 酵母单杂交系统利用金担子素 AbA 究方法被广泛用于大规模筛选 cDNA 表达文库中的是，虽然酵母单杂交系统可以用来广泛筛选与特定 D是其鉴定效率很低。因为植物完整的 cDNA 文库中
【参考文献】：
期刊论文
[1]月季花瓣中农杆菌介导的基因瞬时表达体系的优化及其在RNAi中的应用[J]. 王磊,陈雯,刘娅,杨若韵,阴霞,马男,高俊平. 农业生物技术学报. 2014(02)
[2]转查尔酮合酶基因对烟草花色及花器官的影响[J]. 夏玉凤,耿晓娜,王万双,赵宝华. 生物技术通报. 2010(01)
[3]黄色花形成机制及基因工程研究进展[J]. 周琳,王雁,彭镇华. 林业科学. 2009(02)
[4]植物花色形成及其调控机理[J]. 赵昶灵,郭维明,陈俊愉. 植物学通报. 2005(01)
[5]蓝色花卉分子育种[J]. 徐清燏,戴思兰. 分子植物育种. 2004(01)
[6]蓝光、紫外光的受体及其对CHS表达诱导的研究[J]. 王曼,王小菁. 植物学通报. 2002(03)
博士论文
[1]葡萄风信子MYB和bHLH转录因子对花青苷合成的调控研究[D]. 陈凯利.西北农林科技大学 2017
硕士论文
[1]蝴蝶兰花色成因分析及适宜转蓝色基因的品种选择[D]. 王琳.西北农林科技大学 2017
本文编号：3110143
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转基因酵母菌落的PCR鉴定M.DNAMarkerCK1/CK2.空白对照1-5.转入PMaMybA-pABAi载体的酵母菌阳性克隆PCR
靥宓慕湍妇?梢员灰种粕?さ淖钚?bA浓度为600ng/mL（图2-2）。转入 PMaMybA-pABAi 载体的酵母菌在高浓度 1000ng/mLAbA 的培养基中依然能正常生长，高浓度 AbA 无法使酵母菌被抑制。图 2-2 转化酵母菌 AbA 浓度筛选Fig. 2-2 Transformed yeastAbAconcentration screening转入 PMaAN2-pABAi 载体的酵母菌在转入葡萄风信子花 cDNA 文库后，可以在含有600ng/mL AbA 的 SD/- Leu/AbA 培养基上生长，说明文库成功转入酵母菌，在重复划线步骤2-3次后，获得了48个阳性酵母菌菌株。利用Matchmaker Insert Check PCR Mix2 酶进行 PCR 检测后，共获得了具有单条带的酵母菌菌株 25 个，具有双条带酵母菌菌株 15 个（图 2-3）
图 2-3 MaMybA 启动子筛库结果M. DNAMarker; 图中*表示单条带结果Fig. 2-3 The result of the promoter of MaMybAyeast library scrM. DNAMarker; * in the figure indicates the result of a single带的酵母菌菌株用 YPDA 培养基扩繁之后提取酵母质t 网站上分析，推测结果均为未知蛋白。筛选技术是酵母双杂交系统的变体，是利用报告基合蛋白（如转录因子）之间物理相互作用的技术（Latchmaker Gold 酵母单杂交系统利用金担子素 AbA 究方法被广泛用于大规模筛选 cDNA 表达文库中的是，虽然酵母单杂交系统可以用来广泛筛选与特定 D是其鉴定效率很低。因为植物完整的 cDNA 文库中
【参考文献】：
期刊论文
[1]月季花瓣中农杆菌介导的基因瞬时表达体系的优化及其在RNAi中的应用[J]. 王磊,陈雯,刘娅,杨若韵,阴霞,马男,高俊平. 农业生物技术学报. 2014(02)
[2]转查尔酮合酶基因对烟草花色及花器官的影响[J]. 夏玉凤,耿晓娜,王万双,赵宝华. 生物技术通报. 2010(01)
[3]黄色花形成机制及基因工程研究进展[J]. 周琳,王雁,彭镇华. 林业科学. 2009(02)
[4]植物花色形成及其调控机理[J]. 赵昶灵,郭维明,陈俊愉. 植物学通报. 2005(01)
[5]蓝色花卉分子育种[J]. 徐清燏,戴思兰. 分子植物育种. 2004(01)
[6]蓝光、紫外光的受体及其对CHS表达诱导的研究[J]. 王曼,王小菁. 植物学通报. 2002(03)
博士论文
[1]葡萄风信子MYB和bHLH转录因子对花青苷合成的调控研究[D]. 陈凯利.西北农林科技大学 2017
硕士论文
[1]蝴蝶兰花色成因分析及适宜转蓝色基因的品种选择[D]. 王琳.西北农林科技大学 2017
本文编号：3110143
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