湖南辣椒病毒病毒原鉴定与进化分析

发布时间：2021-04-06 19:44

　　湖南是重要的辣椒产地,随着辣椒贸易的扩大和各地种子的频繁调运,辣椒病毒病危害日趋严重,影响了辣椒的产量和品质。辣椒病毒病的病毒种类很多,但地区间存在差异,掌握各地区病毒主要种类,建立快速、准确、灵敏的病毒检测方法对辣椒病毒病的防治具有重要的意义。本研究对采自湖南各地辣椒样本通过siRNAs测序与RT-PCR检测验证发现湖南辣椒病毒毒原种类有烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus, TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus, CMV）、马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）、蚕豆萎蔫病毒2号（Broad bean wilt virus 2, BBWV 2）、辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus, PMMoV）和辣椒叶脉斑驳病毒（Chilli veinal mottle virus, ChiVMV）、辣椒叶脉黄化病毒（Pepper vein yellows virus, PeVVV）、辣椒环斑病毒（Chilli ringspot virus, ChiRSV）和烟草轻型绿花叶病毒（Tobacco mild g... 

【文章来源】：湖南农业大学湖南省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 辣椒病毒病毒原种类
        1.1.1 烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）
        1.1.2 黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）
        1.1.3 马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）
        1.1.4 蚕豆萎蔫病毒2号（Broad bean wilt virus,BBWV2）
        1.1.5 辣椒叶脉斑驳病毒（Chilli veinal mottle virus,ChiVMV）
        1.1.6 辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus,PMMoV）
        1.1.7 辣椒叶脉黄化病毒（Pepper vein yellows virus,PeVYV）
        1.1.8 辣椒环斑病毒（Chilli ringspot virus,ChiRSV）
        1.1.9 烟草轻型绿花叶病毒（Tobacco mild green mosaic virus,TMGMV）
    1.2 siRNA深度测序技术
    1.3 全基因组克隆
        1.3.1 病毒基因组克隆策略
        1.3.2 病毒基因组3’端克隆
        1.3.3 病毒基因组5’端克隆
    1.4 辣椒病毒病检测技术研究进展
        1.4.1 常规植物病毒检测方法
        1.4.2 血清学检测法
        1.4.3 分子生物学方法
    1.5 本项目研究的目的与意义
第二章 湖南辣椒毒原种类鉴定
    2.1 材料
        2.1.1 样本采集
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 检测引物
    2.2 方法
        2.2.1 总RNA的提取及cDNA的合成
        2.2.2 病毒种类的RT-PCR验证
    2.3 结果与分析
        2.3.1 PCR验证siRNA测序存在的病毒
        2.3.2 2013年辣椒病毒病原检测结果
    2.4 讨论
第三章 ChiVMV和PMMoV湖南分离物的序列分析
    3.1 材料
    3.2 方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 辣椒叶脉斑驳病毒（ChiVMV）湖南分离物的结果与分析
        3.3.2 辣椒轻斑驳病毒（PMMoV）湖南分离物的结果分析
    3.4 讨论
第四章 四种病毒的多重PCR
    4.1 材料
        4.1.1 主要试剂
        4.1.2 主要仪器
        4.1.3 病毒和植物材料
    4.2 四种侵染辣椒病毒毒原的多重RT-PCR检测
        4.2.1 核酸提取与反转录
        4.2.2 引物设计与测序
        4.2.3 多重RT-PCR反应体系的优化
    4.3 实验结果与分析
        4.3.1 病毒引物和RT-PCR扩增产物的测序结果
        4.3.2 单重P-PCR退火温度结果和优化后多重RT-PCR的反应体系
        4.3.3 多重RT-PCR灵敏度实验结果
        4.3.4 多重RT-PCR的适用性试验结果
    4.4 讨论
第五章 总结与讨论
参考文献
附录 本实验所用重要缩写及中文对照
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]一种辣椒轻斑驳病毒和辣椒斑驳病毒复合侵染的线椒病毒病害分子鉴定[J]. 鲁宇文,彭杰军,郑红英,林林,燕飞,陈剑平.  科技通报. 2015(09)
[2]江苏省葫芦科作物6种病毒的多重RT-PCR方法及应用[J]. 任春梅,程兆榜,杨柳,缪倩,周益军.  江苏农业学报. 2015(04)
[3]辣椒轻斑驳病毒的分子杂交检测[J]. 刘崇,高颖,杨洪一.  湖南农业大学学报(自然科学版). 2015(04)
[4]贵州辣椒病毒病的种类检测[J]. 王莉爽,陈文,谭清群,陈小均,吴石平,何海永,杨学辉.  贵州农业科学. 2015(08)
[5]辣椒病毒病研究进展[J]. 汪沛,汤琳菲,雷艳,熊兴耀,聂先舟,胡新喜.  湖南农业科学. 2015(07)
[6]重庆辣椒病毒病病原初步鉴定和分析[J]. 郭思瑶,童艳,黄娅,罗信福,青玲.  园艺学报. 2015(02)
[7]辣椒轻斑驳病毒（PMMoV）新疆加工型辣椒分离物的鉴定和致病型分析[J]. 张强,张春竹,李克梅,罗明,楚金平.  中国农学通报. 2014(25)
[8]辣椒的生产现状及发展[J]. 王文霞.  北京农业. 2014(18)
[9]检测三种烟草病毒的一步法多重RT-PCR[J]. 张俊祺,杨军,宋纪真,罗朝鹏,王燃,李锋,周小龙.  烟草科技. 2014(02)
[10]一步RT-PCR检测水仙黄条病毒[J]. 沈建国,高芳銮,林双庆,李敏,于文涛,虞赟,蔡伟.  生物技术. 2014(01)

博士论文
[1]辣椒病毒病研究[D]. 张竹青.湖南农业大学 2009

硕士论文
[1]辣椒环斑病毒（Chilli ringspot virus）全基因组克隆及序列分析[D]. 龚殿.海南大学 2012
[2]利用多重PCR一次检测侵染大豆的几种检疫性病毒及大豆内源基因的研究[D]. 易汪雪.上海海洋大学 2011



本文编号：3122021