应用启动子替换技术构建香菇多糖高产菌株
发布时间：2021-04-06 23:50
香菇多糖在香菇菌丝和子实体中含量很低,导致工业生产产量低成本高,难以满足市场需求,因此应用遗传育种手段选育香菇多糖高产菌株十分必要。本实验采用启动子替代技术构建香菇多糖高产工程菌,应用平菇gpd启动子替代香菇葡聚糖合成酶基因gls的启动子,提高葡聚糖合成酶基因的表达,提高香菇多糖产量。结果如下:（1）从PAN7-1质粒克隆得到潮霉素抗性基因表达盒D2（3321 bp）,从香菇L26基因组中克隆得到gls基因启动子上游序列（上游同源臂）D1（870 bp）、gls基因起始密码子下游序列（下游同源臂）D4（867 bp）,从平菇新831基因组中克隆得到gpd启动子D3（950 bp）。用融合PCR把上游同源臂与潮霉素抗性基因表达盒融合在一起,连到PMD19-T载体得到PMDF19-T质粒。用融合PCR把gpd启动子与下游同源臂融合在一起,连到pEASY-BluntE1载体上得到PEASY-Blunt-F质粒。对两个构建好的质粒分别设计酶切位点,用AscI与PacI双酶切PMDF19-T质粒,得到D1和D2的融合片段（4191 bp）,用PacI酶切PEASY-Blunt-F质粒使之线性化,...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒Lhg-R的构建Fig.2-1TheconstractionoftheplasmidLhg-R
A BC D图 2-2：同源重组片段的 PCR 产物电泳检测图kb pLus DNA Ladder A；1：左臂 870bp；B；1：潮霉素抗性基因 3321bp2: ELectrophoresis pLot of PCR product of homoLogous recombination fragment.pLus DNA Ladder A; 1: Left arm 870bp; B; 1: hygromycin resistant gene 3321bp.
L26 下游同源臂扩增结果如图 2-2，2-3 所示。成功克隆出所需的目的基因以用于后续实验。abA B图 2-2：同源重组片段的 PCR 产物电泳检测图:1kb pLus DNA Ladder A；1：左臂 870bp；B；1：潮霉素抗性基因 3321bp2-2: ELectrophoresis pLot of PCR product of homoLogous recombination fragment.b pLus DNA Ladder A; 1: Left arm 870bp; B; 1: hygromycin resistant gene 3321bp.
【参考文献】：
期刊论文
[1]农杆菌介导香菇菌丝遗传转化体系的研究[J]. 姜宁,宋春艳,刘建雨,谭琦,章炉军,尚晓冬. 菌物学报. 2017(11)
[2]启动子替代构建糙皮侧耳漆酶高产菌株[J]. 刘冬忍,田芳,王小飞,王景冒,戚元成,宋安东,申进文,邱立友. 菌物学报. 2016(05)
[3]转座子中关于转座机制及相关技术的探究[J]. 尹洋. 赤峰学院学报(自然科学版). 2015(18)
[4]超微粉碎对香菇多酚组成及抗氧化活性的影响[J]. 张小利,夏春燕,王慧清,明建. 食品科学. 2015(11)
[5]两步融合PCR法构建烟曲霉ssk1基因敲除株[J]. 马彦,岑雯,刘昕,冯文莉. 山西医科大学学报. 2014(04)
[6]香菇多糖提取方法的研究[J]. 石来宝,陈静,殷霞. 药学研究. 2014(04)
[7]不同烘干方法对香菇干燥品质的影响[J]. 金昌福. 延边大学农学学报. 2013(04)
[8]根癌农杆菌介导双价载体pPK2转化黑曲霉条件的研究[J]. 王艳,王文雅,袁其朋. 食品科技. 2013(08)
[9]香菇多糖对幼建鲤肠道菌群数量及非特异性免疫指标的影响[J]. 黄小丽,邓永强,汪开毓,杜宗君,耿毅,陈德芳. 大连海洋大学学报. 2013(04)
[10]长片段融合PCR在构建烟曲霉rho1基因回补株中的应用[J]. 韩改革,贾晓东,韩雪琳,赵帅,韩黎. 中国真菌学杂志. 2013(03)
博士论文
[1]根癌农杆菌介导的灵芝遗传转化体系的建立及其在灵芝三萜生物合成研究中的应用[D]. 师亮.南京农业大学 2012
硕士论文
[1]香菇罐藏类食品的研制及HACCP在其加工中的应用[D]. 席甜.山西农业大学 2013
[2]真菌强启动子活性片段的克隆及转基因载体的构建[D]. 何莹莹.浙江农林大学 2013
[3]VDHl和GPCR基因在大丽轮枝菌微菌核发育过程中的功能研究[D]. 陈婷.西北农林科技大学 2013
[4]平菇NADPH氧化酶基因noxA的克隆及其功能的研究[D]. 李银凤.河南农业大学 2011
[5]阿魏化学成分对阿魏侧耳菌丝生长及蛋白质表达的研究[D]. 白羽嘉.新疆农业大学 2010
[6]根癌农杆菌介导哈茨木霉遗传转化体系优化及突变体筛选[D]. 叶小波.云南农业大学 2009
[7]华山新麦草附加系抗条锈病基因的遗传作图和小麦条锈菌毒性突变体的研究[D]. 张亮.西北农林科技大学 2009
[8]香菇农杆菌介导转化条件优化及BCA基因转化研究[D]. 喻义赣.福建农林大学 2009
本文编号：3122387
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒Lhg-R的构建Fig.2-1TheconstractionoftheplasmidLhg-R
A BC D图 2-2：同源重组片段的 PCR 产物电泳检测图kb pLus DNA Ladder A；1：左臂 870bp；B；1：潮霉素抗性基因 3321bp2: ELectrophoresis pLot of PCR product of homoLogous recombination fragment.pLus DNA Ladder A; 1: Left arm 870bp; B; 1: hygromycin resistant gene 3321bp.
L26 下游同源臂扩增结果如图 2-2，2-3 所示。成功克隆出所需的目的基因以用于后续实验。abA B图 2-2：同源重组片段的 PCR 产物电泳检测图:1kb pLus DNA Ladder A；1：左臂 870bp；B；1：潮霉素抗性基因 3321bp2-2: ELectrophoresis pLot of PCR product of homoLogous recombination fragment.b pLus DNA Ladder A; 1: Left arm 870bp; B; 1: hygromycin resistant gene 3321bp.
【参考文献】：
期刊论文
[1]农杆菌介导香菇菌丝遗传转化体系的研究[J]. 姜宁,宋春艳,刘建雨,谭琦,章炉军,尚晓冬. 菌物学报. 2017(11)
[2]启动子替代构建糙皮侧耳漆酶高产菌株[J]. 刘冬忍,田芳,王小飞,王景冒,戚元成,宋安东,申进文,邱立友. 菌物学报. 2016(05)
[3]转座子中关于转座机制及相关技术的探究[J]. 尹洋. 赤峰学院学报(自然科学版). 2015(18)
[4]超微粉碎对香菇多酚组成及抗氧化活性的影响[J]. 张小利,夏春燕,王慧清,明建. 食品科学. 2015(11)
[5]两步融合PCR法构建烟曲霉ssk1基因敲除株[J]. 马彦,岑雯,刘昕,冯文莉. 山西医科大学学报. 2014(04)
[6]香菇多糖提取方法的研究[J]. 石来宝,陈静,殷霞. 药学研究. 2014(04)
[7]不同烘干方法对香菇干燥品质的影响[J]. 金昌福. 延边大学农学学报. 2013(04)
[8]根癌农杆菌介导双价载体pPK2转化黑曲霉条件的研究[J]. 王艳,王文雅,袁其朋. 食品科技. 2013(08)
[9]香菇多糖对幼建鲤肠道菌群数量及非特异性免疫指标的影响[J]. 黄小丽,邓永强,汪开毓,杜宗君,耿毅,陈德芳. 大连海洋大学学报. 2013(04)
[10]长片段融合PCR在构建烟曲霉rho1基因回补株中的应用[J]. 韩改革,贾晓东,韩雪琳,赵帅,韩黎. 中国真菌学杂志. 2013(03)
博士论文
[1]根癌农杆菌介导的灵芝遗传转化体系的建立及其在灵芝三萜生物合成研究中的应用[D]. 师亮.南京农业大学 2012
硕士论文
[1]香菇罐藏类食品的研制及HACCP在其加工中的应用[D]. 席甜.山西农业大学 2013
[2]真菌强启动子活性片段的克隆及转基因载体的构建[D]. 何莹莹.浙江农林大学 2013
[3]VDHl和GPCR基因在大丽轮枝菌微菌核发育过程中的功能研究[D]. 陈婷.西北农林科技大学 2013
[4]平菇NADPH氧化酶基因noxA的克隆及其功能的研究[D]. 李银凤.河南农业大学 2011
[5]阿魏化学成分对阿魏侧耳菌丝生长及蛋白质表达的研究[D]. 白羽嘉.新疆农业大学 2010
[6]根癌农杆菌介导哈茨木霉遗传转化体系优化及突变体筛选[D]. 叶小波.云南农业大学 2009
[7]华山新麦草附加系抗条锈病基因的遗传作图和小麦条锈菌毒性突变体的研究[D]. 张亮.西北农林科技大学 2009
[8]香菇农杆菌介导转化条件优化及BCA基因转化研究[D]. 喻义赣.福建农林大学 2009
本文编号：3122387
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