大白菜细胞核雄性不育相关蛋白的挖掘
发布时间：2021-04-08 19:32
本研究以复等位基因遗传的大白菜核雄性不育“两用系”不育株及可育株的花药作为研究材料,通过双向凝胶电泳技术（2-DE）分离差异蛋白,采用MS技术和生物信息学方法对蛋白的序列及功能进行鉴定,为大白菜雄性不育机理的研究提供一些线索。主要结果如下：1.对不同等级的不育和可育花药进行冷冻切片,显微观察显示可育株花药正常生长发育,最后形成正常的成熟花粉粒,而不育株花药中的花粉粒从第二等级开始发生败育,花粉粒逐渐干瘪、皱缩,后期越来越严重,因此选取第二等级花药作为实验材料。2.设置800μg、1000μg、1200μg三个等级对花药蛋白上样量进行双向电泳（2-DE）体系的优化,结果表明上样量为1000μg时,2-DE图谱分辨率较高,蛋白也较多。3.利用PDQuest8.0.1软件对大白菜雄性不育“两用系”花药总蛋白的2-DE图谱进行分析。结果表明：在等电点为4.0-7.0范围内不育株和可育株花药2-DE图谱平均识别到350个左右的蛋白,Protein score C.I%大于95%的差异蛋白有38个,可育花药中特异表达的蛋白数为12个,表达量上调的点数为24个；不育花药中特异表达的蛋白数为17个,表...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 植物细胞核雄性不育的应用及不育机理概述
1.2 复等位基因遗传的大白菜细胞核雄性不育研究现状
1.3 蛋白质组学在雄性不育研究中的应用
1.4 本试验的目的和意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 试验材料
2.1.2 仪器设备
2.1.3 生化试剂
2.2 方法
2.2.1 大白菜花药的获得
2.2.2 大白菜分级花药冷冻切片的制备
2.2.3 大白菜花药总蛋白提取方法
2.2.4 蛋白裂解液
2.2.5 蛋白质浓度的测定
2.2.6 双向电泳
2.2.7 凝胶染色与脱色
2.2.8 图像扫描
2.2.9 凝胶质谱分析
2.2.10 生物信息学分析
3 结果与分析
3.1 花药败育时期观察
3.2 蛋白上样量优化
3.3 凝胶图谱的分析
3.3.1 2-DE图谱
3.3.2 差异蛋白的统计
3.4 质谱分析
3.5 生物信息学分析
3.5.1 GO（Gene Ontology）分析
3.5.2 KEGG分析
3.5.3 候选蛋白的生物信息学分析
4 讨论
4.1 花药败育时期的研究
4.2 花药蛋白上样量的优化
4.3 差异蛋白功能预测
5 结论
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]大白菜育性相关蛋白差异表达[J]. 毕青,周雪,冀瑞琴,冯辉. 华北农学报. 2015(02)
[2]大白菜根系蛋白质双向电泳体系优化[J]. 赵玲玲,毕青,周雪,冀瑞琴,冯辉. 分子植物育种. 2015(01)
[3]甜瓜叶片蛋白的提取和双向电泳体系的优化[J]. 闫伟丽,钟俐,王贤磊,宁雪飞,李冠. 中国农学通报. 2014(19)
[4]水稻草状矮化病毒侵染寄主水稻差异表达蛋白的鉴定和分析[J]. 丁新伦,谢荔岩,吴祖建. 中国农业科学. 2014(09)
[5]干旱胁迫下根瘤菌共生紫花苜蓿抗旱生理变化研究[J]. 张攀,杨培志,王卫栋,张志强,韩博,王亚芳,曹玉曼,呼天明. 草地学报. 2013(05)
[6]适合双向电泳的大白菜花蕾蛋白提取及浓度测定方法[J]. 周雪,冯辉,冀瑞琴. 分子植物育种. 2013(02)
[7]甘蓝型油菜叶片蛋白质双向电泳体系优化[J]. 舒佳宾,文李,官春云. 作物研究. 2012(04)
[8]不同温度条件下高粱温敏雄性不育系冀130A育性变化规律及花粉败育研究[J]. 马晓娣,王建书,卢彦琦,李素英,刘国庆,侯升林,吕芃,籍贵苏,杜瑞恒. 植物遗传资源学报. 2012(02)
[9]不结球白菜雌蕊蛋白质双向电泳技术体系的建立[J]. 王立,张硕,侯喜林,李英. 南京农业大学学报. 2012(01)
[10]雄性不育大白菜小孢子败育与花蕾长度的关系[J]. 冀瑞琴,周雪,宋倩,辛喜凤,冯辉. 湖北农业科学. 2011(17)
博士论文
[1]小麦雄性不育蛋白组学与泛素化修饰蛋白组学的研究[D]. 刘红占.西北农林科技大学 2014
[2]白菜花粉壁发育相关的四个多糖代谢基因的表达分析与功能鉴定[D]. 林苏娥.浙江大学 2014
[3]白菜花粉壁发育相关基因的表达分析与功能验证[D]. 刘金龙.浙江大学 2013
[4]甘蓝型油菜黄（褐）籽性状形成的分子机理研究[D]. 蒋金金.扬州大学 2013
硕士论文
[1]太谷核不育小麦花药及花粉发育过程的细胞形态学研究[D]. 王艳.山东农业大学 2015
[2]甘蓝型油菜种子萌发时期油体蛋白双向电泳分析[D]. 梁丛敏.郑州大学 2014
[3]低磷胁迫下油菜幼苗根系蛋白双向电泳分析[D]. 王哲.郑州大学 2014
[4]大白菜雄性不育相关基因的分离与鉴定[D]. 宋倩.沈阳农业大学 2013
本文编号：3126128
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 植物细胞核雄性不育的应用及不育机理概述
1.2 复等位基因遗传的大白菜细胞核雄性不育研究现状
1.3 蛋白质组学在雄性不育研究中的应用
1.4 本试验的目的和意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 试验材料
2.1.2 仪器设备
2.1.3 生化试剂
2.2 方法
2.2.1 大白菜花药的获得
2.2.2 大白菜分级花药冷冻切片的制备
2.2.3 大白菜花药总蛋白提取方法
2.2.4 蛋白裂解液
2.2.5 蛋白质浓度的测定
2.2.6 双向电泳
2.2.7 凝胶染色与脱色
2.2.8 图像扫描
2.2.9 凝胶质谱分析
2.2.10 生物信息学分析
3 结果与分析
3.1 花药败育时期观察
3.2 蛋白上样量优化
3.3 凝胶图谱的分析
3.3.1 2-DE图谱
3.3.2 差异蛋白的统计
3.4 质谱分析
3.5 生物信息学分析
3.5.1 GO（Gene Ontology）分析
3.5.2 KEGG分析
3.5.3 候选蛋白的生物信息学分析
4 讨论
4.1 花药败育时期的研究
4.2 花药蛋白上样量的优化
4.3 差异蛋白功能预测
5 结论
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]大白菜育性相关蛋白差异表达[J]. 毕青,周雪,冀瑞琴,冯辉. 华北农学报. 2015(02)
[2]大白菜根系蛋白质双向电泳体系优化[J]. 赵玲玲,毕青,周雪,冀瑞琴,冯辉. 分子植物育种. 2015(01)
[3]甜瓜叶片蛋白的提取和双向电泳体系的优化[J]. 闫伟丽,钟俐,王贤磊,宁雪飞,李冠. 中国农学通报. 2014(19)
[4]水稻草状矮化病毒侵染寄主水稻差异表达蛋白的鉴定和分析[J]. 丁新伦,谢荔岩,吴祖建. 中国农业科学. 2014(09)
[5]干旱胁迫下根瘤菌共生紫花苜蓿抗旱生理变化研究[J]. 张攀,杨培志,王卫栋,张志强,韩博,王亚芳,曹玉曼,呼天明. 草地学报. 2013(05)
[6]适合双向电泳的大白菜花蕾蛋白提取及浓度测定方法[J]. 周雪,冯辉,冀瑞琴. 分子植物育种. 2013(02)
[7]甘蓝型油菜叶片蛋白质双向电泳体系优化[J]. 舒佳宾,文李,官春云. 作物研究. 2012(04)
[8]不同温度条件下高粱温敏雄性不育系冀130A育性变化规律及花粉败育研究[J]. 马晓娣,王建书,卢彦琦,李素英,刘国庆,侯升林,吕芃,籍贵苏,杜瑞恒. 植物遗传资源学报. 2012(02)
[9]不结球白菜雌蕊蛋白质双向电泳技术体系的建立[J]. 王立,张硕,侯喜林,李英. 南京农业大学学报. 2012(01)
[10]雄性不育大白菜小孢子败育与花蕾长度的关系[J]. 冀瑞琴,周雪,宋倩,辛喜凤,冯辉. 湖北农业科学. 2011(17)
博士论文
[1]小麦雄性不育蛋白组学与泛素化修饰蛋白组学的研究[D]. 刘红占.西北农林科技大学 2014
[2]白菜花粉壁发育相关的四个多糖代谢基因的表达分析与功能鉴定[D]. 林苏娥.浙江大学 2014
[3]白菜花粉壁发育相关基因的表达分析与功能验证[D]. 刘金龙.浙江大学 2013
[4]甘蓝型油菜黄（褐）籽性状形成的分子机理研究[D]. 蒋金金.扬州大学 2013
硕士论文
[1]太谷核不育小麦花药及花粉发育过程的细胞形态学研究[D]. 王艳.山东农业大学 2015
[2]甘蓝型油菜种子萌发时期油体蛋白双向电泳分析[D]. 梁丛敏.郑州大学 2014
[3]低磷胁迫下油菜幼苗根系蛋白双向电泳分析[D]. 王哲.郑州大学 2014
[4]大白菜雄性不育相关基因的分离与鉴定[D]. 宋倩.沈阳农业大学 2013
本文编号：3126128
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