中国桃核心种质果实Pru p 3过敏原含量比较分析

发布时间：2021-04-09 06:52

　　随着人们生活水平的提高,水果已经成为几乎每一个人的必备食物,同时水果也是最常见的致敏食物。而桃又会常常引起过敏反应。现在已经鉴定桃过敏原有5大类。其中脂质转移蛋白Prup 3是引起中国人食桃过敏的最主要过敏原。桃过敏患者反映不同桃（油桃）品种引发过敏的程度不同。为明确不同桃品种间Prup3蛋白含量的差异,在研究应用双单抗夹心ELISA方法,对中国100多份桃核心种质资源进行果实Pru p3含量测定。主要结果如下:1.针对桃果皮中存在大量果胶等杂质,影响后面蛋白纯化等实验,对桃蛋白粗提物用微量浓盐酸（每50ml桃总蛋白提取液加20μl浓盐酸）处理,经SDS-PAGE检测,浓盐酸处理样品后目的蛋白Prup 3没有沉淀,再用间接ELISA检测Prup 3免疫活性,结果显示,少量浓盐酸处理后纯化得到的Prup 3的免疫活性良好。实验所用过敏原标准品nPrup3来源于’湖景蜜露’果皮。2.研究发现大部分桃品种随着桃成熟,其Prup3含量也在升高,少量品种随着桃成熟,其Prup 3含量在降低;同一桃品种,连续两年测定结果显示,不同年份（2014年和2015年）,桃中的Prup3含量变化明显。差异幅... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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图２－１浓盐睃处理‘湖景蜜露’果皮去除果胶后ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图

?一??１０??图２－１浓盐睃处理‘湖景蜜露’果皮去除果胶后ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图。其中，Ｍ为蛋白??质ｍａｒｋｅｒ?（丨ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，货号ＬＣ５８００），１为果皮粗提物，２为浓ＨＣ１处理后条??带。??Ｆｉｇ．２－１?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ｏｆ?ｐｅｃｔｉｎ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ?ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ??ａｃｉｄ．Ｍ，ｐｒｏｔｅｉｎ?ｍａｒｋｅｒ?（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，货号?ＬＣ５８００）；?１，ｐｅａｃｈ?ｐｅｅｌ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；?２，??ｐｅａｃｈ?ｐｅｅｌ?ｅａｔｒａｃｔｉｏｎ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｂｙ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ?ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ?ａｃｉｄ．??２．４．２Ｐｒｕ?ｐ３纯化结果及Ｐｒｕｐ３的定量结果??‘湖景蜜露’桃果皮蛋白粗提物中ＰｍＰ３经阳离子交换柱层析纯化后，纯化结??果经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测，结果如图２－２所示，图中显示在约９ｋＤａ位置有单一??清晰明亮的蛋白条带。??Ｍ?１?ｍＡＵ?—ＵＶ１．２８ＣＴ，??４〇０－?Ｉ?Ｉ?Ｉ?（?｜｜??＝Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??＾?１°：?ｉ?ＬＪ?ｂ?Ｕ?ｉｊｊ?Ｕ?Ｌｊｉｌ??５?１０?１５?２０?２５?３０?３５?４０?４５?５０?５５?６０?６５?７０??图２－２?纯化产物ｎＰｒｕ?ｐ?３和阳离子交换柱图谱。Ｍ为蛋白质ｍａｒｋｅｒ??（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｃｎ

?３１．２５?ｎｇ／ｍＪ，?１５．６２５?ｎｇ／ｍｌ，?７．８１?ｎｇ／ｍｌ，?３．９１?ｎｇ／ｍｌ，?１．９５?ｎｇ＾ｒｎｌ，?０．９７?ｎｇ／ｍｌ，??０．４９?ｎ以ｍｌ，０．２４?ｎｇ／ｍｌ，?０．１２?ｎ以ｍｌ。每个浓度测三次，同时设置六个空白对照。??绘制拟合曲线，如图２－３。从图中可以看出，以ｎＰｒｕｐ?３为标准品时，最佳浓度??测定范围是１．９５?－３１．２５ｎｇ／ｍＬ??——Ｐｒｕ?ｐ?３?’?Ｈ?ＭＡ?ｉｌｉ?？遍??３．９９??ｙ?？麄？?４．０２??３．９４??０．６１??２．４８??１２９??０．５８??０３８??０．３２????０３１??°１?１?．?１?．?■ＫＢＳＲ?０．２７??０?１?１?１０?１００?ｌＯＯＯ??ｎ?ｔｏ??ｐｒｏｔｅｉｎ（ｎｇ／ｇ）?！?厶。??图２－３?Ｐｒｕ?ｐ３?ＥＵＳＡ定量标准曲线。??Ｆｉｇ．２－３?Ｄｏｓｅ－ｒｃｓｐｏｎｓｃ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｎＰｒｕ?ｐ３?ｉｎ?ＥＬＩＳＡｗｉｔｈ?ｍＡｂ?Ｂ１０－５?ａｓ??ｔｈｅ?ｃａｐｔｕｒｅ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ａｎｄ?ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ?ｍ＼ｂ?４－１?ａｓ?ｔｈｅ?ｄｅｔｅｃｔｏｒ?ａｎｔｉｂｏｄｙ．??３２??


本文编号：3127140