SlAS2和SlTKN3调控番茄果实发育的功能研究
发布时间：2021-04-18 03:57
番茄是一种重要的蔬菜作物,同时也是研究浆果果实发育的模式植物。番茄果实大小和形状不仅决定其产量还和其品质性状直接相关。番茄果实发育的调控网络非常复杂,转录因子在其中扮演着十分重要的角色。本实验室之前为了揭示番茄早期果实发育的调控网络,通过对早期果实多个时期的子房壁和胚珠进行转录组测序,发现了多个在早期果实子房壁或胚珠中特异表达的转录因子。本研究中利用CRISPR/Cas9技术获得了早期果实子房壁特异表达转录因子Solyc11g008830（SlAS2）的突变体,与野生型Moneymaker（MM）相比,该突变体的果实变小、纵横比增加、果皮细胞层数减少和果皮厚度变薄,表明SlAS2参与调控番茄果实发育。进一步研究发现,该突变体5天和绿熟时期的果实果皮中细胞层数较野生型显著减少,说明突变体果实形态的改变有可能是由SlAS2的突变抑制了番茄果皮中的细胞分裂造成的。不仅如此,SlAS2突变体的花瓣明显变小,叶片极性改变,而且叶片呈杯状和针状,因此SlAS2具有和拟南芥中同源基因AS2相似的功能,也在叶极性发育和顶端分生组织维持中发挥重要作用。SlTKN3（Solyc05g005090）作为拟南...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
番茄果实的发育过程（Azzietal.,2015）
图 2.1 果形分析的示意图Fig 2.1 Schematic diagram of fruit shape analysis报告实验实验使用的载体是双荧光素酶报告质粒 pluc-35Rlu90（SlTKN3）大约 3-kb 左右的启动子，之后通过无到双荧光素酶报告质粒 pluc-35Rluc 的 luc 上N3 pro-LUC 。从 MM 果实的 cDNA 中扩增 S2）cDNA 全长，之后通过双酶切连接的方式ag 的 35S 下游，即得到效应因子 CaMV35S-SlAS1 和效应因子构建所用的引物。之后将报告因子和效准备好的菌液打入烟草叶片中，2 天后收集烟草叶910）和 Promega 公司的 GLOMAX 20/20 LUMINO素酶活性，相关实验操作按照说明书进行。引物详转录组数据的分析slas2-cr1 0 DPA果实中提取的总RNA送去公司建库
国农业科学院硕士学位论文 第二章 SlAS2 和 SlTKN3 调控番茄果实发育的功能研.2 结果与分析.2.1 SlAS2基因的组织表达分析我们前期的研究结果显示，SlAS2 在 0 DPA、1 DPA、2 DPA 和 5 DPA 的子房壁中表达水平，而在胚珠中几乎不表达，而且在 0 DPA 的子房壁中表达水平较其他几个时期更高，表明 SlA一个早期果实子房壁特异表达基因（Zhang et al., 2016）。为了进一步验证 RNA-seq 的结果，利用定量 PCR 技术检测 SlAS2 在栽培番茄 MM 不同发育时期子房壁和胚珠中的表达水平， SlAS2 在 0 DPA、2 DPA、5 DPA、10 DPA 和 20 DPA 果实子房壁中的表达水平很高，而在各期的胚珠中几乎不表达（图 2.2A）。其中 SlAS2 在 0 DPA 和 2 DPA 时期的果实子房壁中表达较其他几个时期更高，该结果与转录组数据一致。不仅如此，我们还利用 SlAS2 启动子驱US 报告基因的表达，然后对转基因阳性植株的早期果实进行 GUS 染色。发现 SlAS2 在 0 D 5 DPA 的子房壁、横隔和胎座中均表达，在 0 DPA 时的表达活性较高，而在两个时期的胚珠乎不表达（图 2.2B）。
本文编号：3144754
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
番茄果实的发育过程（Azzietal.,2015）
图 2.1 果形分析的示意图Fig 2.1 Schematic diagram of fruit shape analysis报告实验实验使用的载体是双荧光素酶报告质粒 pluc-35Rlu90（SlTKN3）大约 3-kb 左右的启动子，之后通过无到双荧光素酶报告质粒 pluc-35Rluc 的 luc 上N3 pro-LUC 。从 MM 果实的 cDNA 中扩增 S2）cDNA 全长，之后通过双酶切连接的方式ag 的 35S 下游，即得到效应因子 CaMV35S-SlAS1 和效应因子构建所用的引物。之后将报告因子和效准备好的菌液打入烟草叶片中，2 天后收集烟草叶910）和 Promega 公司的 GLOMAX 20/20 LUMINO素酶活性，相关实验操作按照说明书进行。引物详转录组数据的分析slas2-cr1 0 DPA果实中提取的总RNA送去公司建库
国农业科学院硕士学位论文 第二章 SlAS2 和 SlTKN3 调控番茄果实发育的功能研.2 结果与分析.2.1 SlAS2基因的组织表达分析我们前期的研究结果显示，SlAS2 在 0 DPA、1 DPA、2 DPA 和 5 DPA 的子房壁中表达水平，而在胚珠中几乎不表达，而且在 0 DPA 的子房壁中表达水平较其他几个时期更高，表明 SlA一个早期果实子房壁特异表达基因（Zhang et al., 2016）。为了进一步验证 RNA-seq 的结果，利用定量 PCR 技术检测 SlAS2 在栽培番茄 MM 不同发育时期子房壁和胚珠中的表达水平， SlAS2 在 0 DPA、2 DPA、5 DPA、10 DPA 和 20 DPA 果实子房壁中的表达水平很高，而在各期的胚珠中几乎不表达（图 2.2A）。其中 SlAS2 在 0 DPA 和 2 DPA 时期的果实子房壁中表达较其他几个时期更高，该结果与转录组数据一致。不仅如此，我们还利用 SlAS2 启动子驱US 报告基因的表达，然后对转基因阳性植株的早期果实进行 GUS 染色。发现 SlAS2 在 0 D 5 DPA 的子房壁、横隔和胎座中均表达，在 0 DPA 时的表达活性较高，而在两个时期的胚珠乎不表达（图 2.2B）。
本文编号：3144754
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