苹果属小金海棠WRKY55与WRKY64基因的克隆与功能分析
发布时间：2021-04-25 06:31
本研究以小金海棠（Malus xiaojinensis Cheng et Jiang）为试材,克隆得到MxWRKY55和MxWRKY64基因,通过序列分析、亚细胞定位分析、组织特异性表达分析和转基因拟南芥抗性鉴定等方法,初步研究了小金海棠MxWRKY55和MxWRKY64基因的功能。根据已知的金冠苹果部分序列设计特异性引物,以小金海棠cDNA为模板,通过PCR扩增得到小金海棠MxWRKY55和MxWRKY64基因。MxWRKY55基因和MxWRKY64基因的开放阅读框分别为984bp和1116 bp。亚细胞定位结果显示MxWRKY55和MxWRKY64蛋白均定位在细胞核中。半定量PCR结果显示,MxWRKY55和MxWRKY64基因的表达具有组织特异性:在正常Hoagland营养液培养时（0 h）,MxWRKY55基因和MxWRKY64基因在所有检测部位中都表达,其中MxWRKY55基因在新叶和茎尖中的表达量较高,MxWRKY64基因只在新叶中的表达量较高。在盐胁迫（200 mM NaCl）,低温胁迫（2℃）,高铁胁迫（160μM Fe-EDTA）和低铁胁迫（4μM Fe-EDTA）下...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 植物抗逆相关转录因子的研究进展
1.2 WRKY转录因子的研究进展
1.2.1 WRKY类转录因子的结构特征
1.2.2 WRKY类转录因子的分类
1.2.3 WRKY类转录因子的作用机理
1.2.4 WRKY类转录因子在植物响应非生物胁迫过程中的作用
1.3 植物体内铁的营养
1.3.1 铁在植物体内的重要作用
1.3.2 高等植物的铁吸收机制
1.4 小金海棠铁高效机理研究进展
1.5 苹果中WRKY转录因子的研究进展
1.6 研究目的与意义
1.7 技术路线
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.2.1 总RNA的提取
2.2.2 cDNA第一链的合成
2.2.3 MxWRKY55、MxWRKY64基因全长的获得
2.2.4 MxWRKY55、MxWRKY64基因的电泳及纯化
2.2.5 MxWRKY55、MxWRKY64基因的连接和转化
2.2.6 MxWRKY55、MxWRKY64基因的序列分析
2.2.7 MxWRKY55、MxWRKY64蛋白的亚细胞定位
2.2.8 MxWRKY55、MxWRKY64基因的半定量PCR分析
2.2.9 MxWRKY55、MxWRKY64基因的实时荧光定量PCR分析
2.2.10 拟南芥转化试验
2.2.11 转基因拟南芥的耐盐胁迫、耐低铁胁迫和耐高铁胁迫实验
2.2.12 相关生理指标的测定
2.2.13 数据统计方法
3 结果与分析
3.1 MxWRKY55基因的克隆与功能分析
3.1.1 MxWRKY55基因的克隆与序列分析
3.1.2 MxWRKY55蛋白的亚细胞定位
3.1.3 MxWRKY55基因的表达分析
3.1.4 MxWRKY55基因的功能分析
3.2 MxWRKY64基因的克隆与功能分析
3.2.1 MxWRKY64基因的克隆与序列分析
3.2.2 MxWRKY64蛋白的亚细胞定位
3.2.3 MxWRKY64基因的表达分析
3.2.4 MxWRKY64基因的功能分析
4 讨论
4.1 MxWRKY55、MxWRKY64基因的序列分析
4.2 MxWRKY55、MxWRKY64基因的亚细胞定位
4.3 MxWRKY55、MxWRKY64基因的表达分析
4.4 转MxWRKY55、MxWRKY64基因拟南芥对低铁胁迫、高铁胁迫的应答
4.5 转MxWRKY55、MxWRKY64基因拟南芥对盐胁迫的应答
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]一个甘蔗Ⅱd类WRKY转录因子基因的克隆和表达分析[J]. 张旭,凌辉,刘峰,黄宁,王玲,毛花英,李聪娜,汤翰臣,苏炜华,苏亚春,阙友雄. 中国农业科学. 2018(23)
[2]苹果MdWRKY18和MdWRKY40参与盐胁迫途径分子机理研究[J]. 许海峰,杨官显,张静,邹琦,王意程,曲常志,姜生辉,王楠,陈学森. 中国农业科学. 2018(23)
[3]MdWRKY40介导提高苹果与拟南芥对轮纹病菌的免疫抗性[J]. 周茜茜,邱化荣,何晓文,王宪璞,刘秀霞,李保华,吴树敬,陈学森. 中国农业科学. 2018(21)
[4]拟南芥WRKY61转录因子的转录活性与互作蛋白分析[J]. 范晓江,郭小华,牛芳芳,杨博,江元清. 西北植物学报. 2018(01)
[5]桃WRKY基因家族全基因组鉴定和表达分析[J]. 谷彦冰,冀志蕊,迟福梅,乔壮,徐成楠,张俊祥,周宗山,董庆龙. 遗传. 2016(03)
[6]苹果WRKY基因家族生物信息学及表达分析[J]. 谷彦冰,冀志蕊,迟福梅,乔壮,徐成楠,张俊祥,董庆龙,周宗山. 中国农业科学. 2015(16)
[7]高等植物中铁的代谢机制[J]. 刘士平,郑录庆,田伟,薛艳红,寿惠霞. 植物生理学报. 2011(10)
[8]论脯氨酸累积与植物抗渗透胁迫[J]. 焦蓉,刘好宝,刘贯山,王树林,侯娜,王全贞,刘朝科,冯祥国,胡晓明,靳义荣. 中国农学通报. 2011(07)
[9]植物过氧化氢酶的研究进展[J]. 南芝润,范月仙. 安徽农学通报. 2008(05)
[10]根癌农杆菌感受态细胞的制备以及质粒ProkⅡ对其转化的研究[J]. 朱锦辉,权军利,何玉科,陈耀锋,郭东伟,李春莲,曹团武,曹新有. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2006(07)
博士论文
[1]苹果铁高效基因型生物技术的研究——MxNrampl和MxIrtl基因的克隆[D]. 戚金亮.中国农业大学 2003
硕士论文
[1]缺铁胁迫下苹果砧木垂丝海棠幼苗的生理特性和转录组学分析[D]. 胡亚.甘肃农业大学 2018
[2]苹果MdWRKY33基因的克隆与功能分析[D]. 张远嬿.沈阳农业大学 2018
[3]‘云香’水仙WRKY转录因子的克隆及功能研究[D]. 温秀萍.福建农林大学 2018
[4]NO介导小金海棠缺铁适应性反应机理初步研究[D]. 李玉娜.四川农业大学 2016
[5]苹果两个WRKY转录因子的克隆和表达分析[D]. 谷彦冰.中国农业科学院 2016
[6]铁胁迫对豌豆幼苗铁代谢、光合作用及抗氧化系统的影响[D]. 岳丽娟.兰州大学 2009
本文编号：3158889
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 植物抗逆相关转录因子的研究进展
1.2 WRKY转录因子的研究进展
1.2.1 WRKY类转录因子的结构特征
1.2.2 WRKY类转录因子的分类
1.2.3 WRKY类转录因子的作用机理
1.2.4 WRKY类转录因子在植物响应非生物胁迫过程中的作用
1.3 植物体内铁的营养
1.3.1 铁在植物体内的重要作用
1.3.2 高等植物的铁吸收机制
1.4 小金海棠铁高效机理研究进展
1.5 苹果中WRKY转录因子的研究进展
1.6 研究目的与意义
1.7 技术路线
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.2.1 总RNA的提取
2.2.2 cDNA第一链的合成
2.2.3 MxWRKY55、MxWRKY64基因全长的获得
2.2.4 MxWRKY55、MxWRKY64基因的电泳及纯化
2.2.5 MxWRKY55、MxWRKY64基因的连接和转化
2.2.6 MxWRKY55、MxWRKY64基因的序列分析
2.2.7 MxWRKY55、MxWRKY64蛋白的亚细胞定位
2.2.8 MxWRKY55、MxWRKY64基因的半定量PCR分析
2.2.9 MxWRKY55、MxWRKY64基因的实时荧光定量PCR分析
2.2.10 拟南芥转化试验
2.2.11 转基因拟南芥的耐盐胁迫、耐低铁胁迫和耐高铁胁迫实验
2.2.12 相关生理指标的测定
2.2.13 数据统计方法
3 结果与分析
3.1 MxWRKY55基因的克隆与功能分析
3.1.1 MxWRKY55基因的克隆与序列分析
3.1.2 MxWRKY55蛋白的亚细胞定位
3.1.3 MxWRKY55基因的表达分析
3.1.4 MxWRKY55基因的功能分析
3.2 MxWRKY64基因的克隆与功能分析
3.2.1 MxWRKY64基因的克隆与序列分析
3.2.2 MxWRKY64蛋白的亚细胞定位
3.2.3 MxWRKY64基因的表达分析
3.2.4 MxWRKY64基因的功能分析
4 讨论
4.1 MxWRKY55、MxWRKY64基因的序列分析
4.2 MxWRKY55、MxWRKY64基因的亚细胞定位
4.3 MxWRKY55、MxWRKY64基因的表达分析
4.4 转MxWRKY55、MxWRKY64基因拟南芥对低铁胁迫、高铁胁迫的应答
4.5 转MxWRKY55、MxWRKY64基因拟南芥对盐胁迫的应答
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]一个甘蔗Ⅱd类WRKY转录因子基因的克隆和表达分析[J]. 张旭,凌辉,刘峰,黄宁,王玲,毛花英,李聪娜,汤翰臣,苏炜华,苏亚春,阙友雄. 中国农业科学. 2018(23)
[2]苹果MdWRKY18和MdWRKY40参与盐胁迫途径分子机理研究[J]. 许海峰,杨官显,张静,邹琦,王意程,曲常志,姜生辉,王楠,陈学森. 中国农业科学. 2018(23)
[3]MdWRKY40介导提高苹果与拟南芥对轮纹病菌的免疫抗性[J]. 周茜茜,邱化荣,何晓文,王宪璞,刘秀霞,李保华,吴树敬,陈学森. 中国农业科学. 2018(21)
[4]拟南芥WRKY61转录因子的转录活性与互作蛋白分析[J]. 范晓江,郭小华,牛芳芳,杨博,江元清. 西北植物学报. 2018(01)
[5]桃WRKY基因家族全基因组鉴定和表达分析[J]. 谷彦冰,冀志蕊,迟福梅,乔壮,徐成楠,张俊祥,周宗山,董庆龙. 遗传. 2016(03)
[6]苹果WRKY基因家族生物信息学及表达分析[J]. 谷彦冰,冀志蕊,迟福梅,乔壮,徐成楠,张俊祥,董庆龙,周宗山. 中国农业科学. 2015(16)
[7]高等植物中铁的代谢机制[J]. 刘士平,郑录庆,田伟,薛艳红,寿惠霞. 植物生理学报. 2011(10)
[8]论脯氨酸累积与植物抗渗透胁迫[J]. 焦蓉,刘好宝,刘贯山,王树林,侯娜,王全贞,刘朝科,冯祥国,胡晓明,靳义荣. 中国农学通报. 2011(07)
[9]植物过氧化氢酶的研究进展[J]. 南芝润,范月仙. 安徽农学通报. 2008(05)
[10]根癌农杆菌感受态细胞的制备以及质粒ProkⅡ对其转化的研究[J]. 朱锦辉,权军利,何玉科,陈耀锋,郭东伟,李春莲,曹团武,曹新有. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2006(07)
博士论文
[1]苹果铁高效基因型生物技术的研究——MxNrampl和MxIrtl基因的克隆[D]. 戚金亮.中国农业大学 2003
硕士论文
[1]缺铁胁迫下苹果砧木垂丝海棠幼苗的生理特性和转录组学分析[D]. 胡亚.甘肃农业大学 2018
[2]苹果MdWRKY33基因的克隆与功能分析[D]. 张远嬿.沈阳农业大学 2018
[3]‘云香’水仙WRKY转录因子的克隆及功能研究[D]. 温秀萍.福建农林大学 2018
[4]NO介导小金海棠缺铁适应性反应机理初步研究[D]. 李玉娜.四川农业大学 2016
[5]苹果两个WRKY转录因子的克隆和表达分析[D]. 谷彦冰.中国农业科学院 2016
[6]铁胁迫对豌豆幼苗铁代谢、光合作用及抗氧化系统的影响[D]. 岳丽娟.兰州大学 2009
本文编号：3158889
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