溃疡病菌入侵柑橘叶片的解剖观察及抗性相关基因FLS2的克隆与分析
发布时间：2021-05-11 04:29
柑橘溃疡病是由柑橘溃疡病菌引起的一种世界性检疫病害,危害严重,防治困难,对柑橘产业造成了巨大损失。加强对柑橘溃疡病菌的检测,只能暂缓病情形势的发展,找到抗病柑橘资源、培育抗病品种是最根本的解决途径。本研究拟利用激光共聚焦扫描显微镜技术实时观察e GFP标记的柑橘溃疡病菌对抗病种质枸橼C-05和感病种质冰糖橙的叶片的侵染和定值过程,比较分析病原菌对不同种质的入侵途径、入侵量和入侵后植物组织内变化的差异,并分析侵染后不同寄主的症状差异,为柑橘溃疡病菌与柑橘不同种质的互作研究提供了直观的技术方法。FLS2是柑橘防御相关基因,在植物防御反应,位于质膜的FLS2特异性识别细菌鞭毛蛋白,从而引起一系列的防御反应。项目组前期研究结果表明,柑橘叶片感染柑橘溃疡病菌后,鞭毛蛋白受体基因FLS2的表达在抗病材料中显著上升,而在感病材料中呈下降趋势;本研究进一步分析比较了二者在溃疡病菌入侵后FLS2基因结构及其启动子结构的差异,并分析了在抗病和感病种质冰糖橙和枸橼C-05中FLS2基因对溃疡病菌入侵的可能作用。本研究主要研究结论如下:（1）溃疡病接种实验需采用完全展开且叶面积达到最大叶面积1/2的柑橘幼叶。...
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：115 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 柑橘溃疡病研究进展
1.2 GFP在寄主与细菌互作中的应用
1.2.1 GFP的理化性质和荧光原理
1.2.2 GFP在病原菌与寄主互作过程中的应用
1.3 激光共聚焦扫描显微镜在研究病菌互作中的应用
1.4 植物先天免疫系统研究进展
1.4.1 植物先天免疫系统的作用模式
1.4.2 PAMPs对植物应激反应的诱导
1.4.3 FLS2对PAMPs识别
1.4.3.1 PRRs的分类
1.4.3.2 FLS2 对PAMPs/MAMPs的识别
1.5 植物启动子及其研究进展
1.5.1 启动子的分类和结构特点
1.5.2 植物启动子对生物胁迫的应答
1.6 研究的目的与意义
第二章 柑橘溃疡病菌入侵柑橘叶片组织过程中的解剖观察
2.1 材料与方法
2.1.1 植物材料
2.1.2 供试菌种
2.1.3 溃疡病菌菌悬液的制备
2.1.4 病原菌接种
2.1.5 切片和压片的制备
2.1.6 激光共聚焦扫描显微镜观察
2.2 结果与分析
2.2.1 适宜接种柑橘溃疡病菌和制片材料的选择
2.2.2 改善制片技术观察活的荧光菌在叶片中的分布
2.2.3 叶片发病症状的切片观察
2.2.4 溃疡病菌对柑橘叶片的入侵点观察
2.2.5 不同时间点下溃疡病菌侵染柑橘叶片的过程
2.2.6 压片观察叶片表面溃疡病菌量的分布差异
2.2.7 柑橘溃疡病菌量在植物细胞内的定殖观察
2.2.8 切片观察叶片中溃疡病菌量的差异
2.2.9 Z-stack的应用和3D立体建模观察溃疡病菌在寄主植物中的立体分布
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 FLS2基因的克隆与序列分析
3.1 材料与方法
3.1.1 试验材料
3.1.2 Xcc的活化与菌悬液制备
3.1.3 活体接种及样本采集
3.1.4 RNA提取及cDNA合成
3.1.5 FLS2基因扩增引物的选择
3.1.6 FLS2基因的扩增、克隆与测序
3.1.7 FLS2基因序列拼接及生物信息学分析
3.2 结果与分析
3.2.1 冰糖橙和枸橼C-05总RNA提取与FLS2基因扩增结果
3.2.2 冰糖橙和枸橼C-05FLS2基因cDNA序列的生物信息学分析
3.2.3 冰糖橙和枸橼C-05FLS2基因氨基酸序列的分析和比较
3.2.4 冰糖橙与枸橼C-05FLS2蛋白结构域预测与分析
3.2.5 冰糖橙与枸橼C-05FLS2蛋白二级结构与三级结构预测与分析
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 柑橘FLS2基因启动子的克隆与顺式作用元件分析
4.1 材料与方法
4.1.1 试验材料
4.1.2 柑橘叶片总DNA的提取
4.1.3 FLS2-1启动子序列克隆
4.1.4 FLS2启动子顺式作用元件预测
4.2 结果与分析
4.2.1 柑橘总DNA提取与FLS2-1基因启动子的克隆测序
4.2.2 FLS2基因启动子顺式作用元件预测
4.2.3 冰糖橙中FLS2-1基因启动子缺失序列分析
4.3 讨论
4.4 小结
总结与展望
主要结论
创新点
下一步工作设想
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]激光扫描共聚焦显微镜实验技术与应用[J]. 岳磊,张垚,马卓. 哈尔滨商业大学学报(自然科学版). 2015(03)
[2]激光共聚焦扫描显微镜在抗菌机理研究中的应用[J]. 游雪娇,李良秋,马连营,彭斐元. 微生物学通报. 2015(06)
[3]激光扫描共聚焦显微镜在生物科学研究中的应用[J]. 杨子贤,王洪星,易小平. 热带生物学报. 2013(01)
[4]植物抗病抗逆机理的研究概述[J]. 徐玲,陈自宏,晏爱芬,余丽. 江西农业学报. 2012(03)
[5]GFP标记的尖孢镰刀菌西瓜专化型侵染西瓜过程观察[J]. 李春强,梁慧施,夏亦荠,彭明. 热带作物学报. 2011(10)
[6]几种表面活性剂对两种作物安全性的初步研究[J]. 戴灵超,陶月红,张昭,张本刚,斯建勇,刘琰璐. 植物科学学报. 2011(03)
[7]几种杀菌剂对柑桔溃疡病的生物活性[J]. 孙惠敏,李保同,郭明程,陈慈相,谢金招,刘德力. 江西农业大学学报. 2011(01)
[8]生防菌枯草芽孢杆菌CQBS03的绿色荧光蛋白基因标记及其在柑橘叶片上的定殖[J]. 殷幼平,袁训娥,李强,王中康. 中国农业科学. 2010(17)
[9]利用根系分泌物与绿色荧光蛋白标记的病原菌互作关系鉴定香蕉对枯萎病的抗性[J]. 左存武,孙清明,黄秉智,李春雨,易干军. 园艺学报. 2010(05)
[10]冬枣锈病发生与叶龄及其解剖结构关系的研究[J]. 李琴,马庆华,王贵禧,张日清,梁丽松. 中国农学通报. 2010(06)
博士论文
[1]柑橘溃疡病防御相关基因的鉴定及功能分析[D]. 严佳文.湖南农业大学 2014
[2]柑橘溃疡病菌致病性影响因素的研究[D]. 刘利平.湖南农业大学 2013
硕士论文
[1]柑橘内参基因筛选及转pthA基因甜橙的表达分析[D]. 严佳文.湖南农业大学 2010
本文编号：3180725
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：115 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 柑橘溃疡病研究进展
1.2 GFP在寄主与细菌互作中的应用
1.2.1 GFP的理化性质和荧光原理
1.2.2 GFP在病原菌与寄主互作过程中的应用
1.3 激光共聚焦扫描显微镜在研究病菌互作中的应用
1.4 植物先天免疫系统研究进展
1.4.1 植物先天免疫系统的作用模式
1.4.2 PAMPs对植物应激反应的诱导
1.4.3 FLS2对PAMPs识别
1.4.3.1 PRRs的分类
1.4.3.2 FLS2 对PAMPs/MAMPs的识别
1.5 植物启动子及其研究进展
1.5.1 启动子的分类和结构特点
1.5.2 植物启动子对生物胁迫的应答
1.6 研究的目的与意义
第二章 柑橘溃疡病菌入侵柑橘叶片组织过程中的解剖观察
2.1 材料与方法
2.1.1 植物材料
2.1.2 供试菌种
2.1.3 溃疡病菌菌悬液的制备
2.1.4 病原菌接种
2.1.5 切片和压片的制备
2.1.6 激光共聚焦扫描显微镜观察
2.2 结果与分析
2.2.1 适宜接种柑橘溃疡病菌和制片材料的选择
2.2.2 改善制片技术观察活的荧光菌在叶片中的分布
2.2.3 叶片发病症状的切片观察
2.2.4 溃疡病菌对柑橘叶片的入侵点观察
2.2.5 不同时间点下溃疡病菌侵染柑橘叶片的过程
2.2.6 压片观察叶片表面溃疡病菌量的分布差异
2.2.7 柑橘溃疡病菌量在植物细胞内的定殖观察
2.2.8 切片观察叶片中溃疡病菌量的差异
2.2.9 Z-stack的应用和3D立体建模观察溃疡病菌在寄主植物中的立体分布
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 FLS2基因的克隆与序列分析
3.1 材料与方法
3.1.1 试验材料
3.1.2 Xcc的活化与菌悬液制备
3.1.3 活体接种及样本采集
3.1.4 RNA提取及cDNA合成
3.1.5 FLS2基因扩增引物的选择
3.1.6 FLS2基因的扩增、克隆与测序
3.1.7 FLS2基因序列拼接及生物信息学分析
3.2 结果与分析
3.2.1 冰糖橙和枸橼C-05总RNA提取与FLS2基因扩增结果
3.2.2 冰糖橙和枸橼C-05FLS2基因cDNA序列的生物信息学分析
3.2.3 冰糖橙和枸橼C-05FLS2基因氨基酸序列的分析和比较
3.2.4 冰糖橙与枸橼C-05FLS2蛋白结构域预测与分析
3.2.5 冰糖橙与枸橼C-05FLS2蛋白二级结构与三级结构预测与分析
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 柑橘FLS2基因启动子的克隆与顺式作用元件分析
4.1 材料与方法
4.1.1 试验材料
4.1.2 柑橘叶片总DNA的提取
4.1.3 FLS2-1启动子序列克隆
4.1.4 FLS2启动子顺式作用元件预测
4.2 结果与分析
4.2.1 柑橘总DNA提取与FLS2-1基因启动子的克隆测序
4.2.2 FLS2基因启动子顺式作用元件预测
4.2.3 冰糖橙中FLS2-1基因启动子缺失序列分析
4.3 讨论
4.4 小结
总结与展望
主要结论
创新点
下一步工作设想
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]激光扫描共聚焦显微镜实验技术与应用[J]. 岳磊,张垚,马卓. 哈尔滨商业大学学报(自然科学版). 2015(03)
[2]激光共聚焦扫描显微镜在抗菌机理研究中的应用[J]. 游雪娇,李良秋,马连营,彭斐元. 微生物学通报. 2015(06)
[3]激光扫描共聚焦显微镜在生物科学研究中的应用[J]. 杨子贤,王洪星,易小平. 热带生物学报. 2013(01)
[4]植物抗病抗逆机理的研究概述[J]. 徐玲,陈自宏,晏爱芬,余丽. 江西农业学报. 2012(03)
[5]GFP标记的尖孢镰刀菌西瓜专化型侵染西瓜过程观察[J]. 李春强,梁慧施,夏亦荠,彭明. 热带作物学报. 2011(10)
[6]几种表面活性剂对两种作物安全性的初步研究[J]. 戴灵超,陶月红,张昭,张本刚,斯建勇,刘琰璐. 植物科学学报. 2011(03)
[7]几种杀菌剂对柑桔溃疡病的生物活性[J]. 孙惠敏,李保同,郭明程,陈慈相,谢金招,刘德力. 江西农业大学学报. 2011(01)
[8]生防菌枯草芽孢杆菌CQBS03的绿色荧光蛋白基因标记及其在柑橘叶片上的定殖[J]. 殷幼平,袁训娥,李强,王中康. 中国农业科学. 2010(17)
[9]利用根系分泌物与绿色荧光蛋白标记的病原菌互作关系鉴定香蕉对枯萎病的抗性[J]. 左存武,孙清明,黄秉智,李春雨,易干军. 园艺学报. 2010(05)
[10]冬枣锈病发生与叶龄及其解剖结构关系的研究[J]. 李琴,马庆华,王贵禧,张日清,梁丽松. 中国农学通报. 2010(06)
博士论文
[1]柑橘溃疡病防御相关基因的鉴定及功能分析[D]. 严佳文.湖南农业大学 2014
[2]柑橘溃疡病菌致病性影响因素的研究[D]. 刘利平.湖南农业大学 2013
硕士论文
[1]柑橘内参基因筛选及转pthA基因甜橙的表达分析[D]. 严佳文.湖南农业大学 2010
本文编号：3180725
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