荧光假单胞菌R15诱导辣椒抗性基因分析和对疫病防治方法研究

发布时间：2021-05-14 00:50

　　内生细菌定殖在植物内部,能有效防治植物病害。目前内生细菌还未在农业上广泛应用,原因之一就是内生细菌防治植物病害的机理不明确,防治效果无法控制。本实验室筛选到一株荧光假单胞菌R15对辣椒疫病的防治效果较高,接种实验证明其对辣椒疫病的防效随着其在辣椒根内的定殖数量增加而增加,定殖数量达到6.3×105cfu/g以上,防效达到100%,在接种后维持高防效的时间为14 d,随后定殖量逐渐下降,防治效果也降低。本实验为了探索荧光假单胞菌R15防治辣椒疫病的机制,利用cDNA-AFLP技术分析辣椒接种R15和清水处理的植株在挑战接种辣椒疫霉菌叶片的差异表达基因,明确R15菌株定殖高峰期针对辣椒疫霉菌侵染诱导的抗性基因。同时通过不同的处理方式的设计实验找到荧光假单胞菌R15在辣椒根内维持高定殖数量的方法,以保证防治效果的稳定。cDNA-AFLP技术分析R15诱导辣椒对辣椒疫霉菌抗性基因的实验:利用30对选择性扩增引物获得了 137条TDFs,测序成功的为29条,其中24个基因上调表达,5个基因下调表达。在NCBI中经Blastx比对和功能分类分析发现内生细菌诱导的基因包括:功能未知基因以及未找到同源... 

【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
附录一 缩略词
附录二 试剂的配制
第一章 综述
    1 辣椒疫病的研究
        1.1 辣椒疫病的发生发展规律
        1.2 辣椒疫病的防控研究进展
            1.2.1 农业防控措施
            1.2.2 选育抗病品种
            1.2.3 化学防治
            1.2.4 生物防治
    2 植物内生细菌的研究
        2.1 内生细菌对植物的促生作用
        2.2 生物修复作用
        2.3 作为外源基因的载体
        2.4 植物保护作用
    3 荧光假单胞菌防治植物病害的作用机制
        3.1 拮抗作用
        3.2 竞争作用
        3.3 诱导抗性
    4 cDNA-AFLP技术
        4.1 cDNA-AFLP技术的特点
        4.2 合适的内切酶组合
        4.3 cDNA-AFLP技术在植物基因差异表达分析上的应用
    5 研究的目的与意义
第二章 荧光假单胞菌R15诱导辣椒抗性基因分析
    1 材料
        1.1 供试材料
        1.2 酶及试剂
        1.3 主要仪器设备
    2 方法
        2.1 接种剂的准备
        2.2 辣椒盆栽苗的培育
        2.3 样品采集及总RNA的提取
        2.4 mRNA的分离纯化
        2.5 双链cDNA的合成和纯化
        2.6 cDNA-AFLP差异分析
            2.6.1 双酶切、连接
            2.6.2 预扩增
            2.6.3 选择性扩增
            2.6.4 聚丙烯酰胺凝胶的制备
            2.6.5 预电泳
            2.6.6 电泳
            2.6.7 银染
        2.7 差异条带的回收、扩增、测序
            2.7.1 特异片段的回收
            2.7.2 二次PCR
            2.7.3 扩增产物回收
            2.7.4 部分差异片段克隆
            2.7.5 PCR产物直接测序与克隆测序
        2.8 差异基因同源性检索
        2.9 qRT-PCR验证cDNA-AFLP基因表达谱
            2.9.1 辣椒叶片RNA提取
            2.9.2 单链cDNA反转录
            2.9.3 候选基因qRT-PCR分析
    3 结果与分析
        3.1 辣椒叶片RNA的提取
        3.2 预扩增结果
        3.3 选择性扩增结果
        3.4 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳结果
        3.5 二次PCR检测
        3.6 测序结果分析
        3.7 qRT-PCR的验证结果
    4 讨论
        4.1 PCR测序与克隆测序
        4.2 接种R15菌株后挑战接种辣椒疫霉菌辣椒差异基因表达特征…
        4.3 差异条带的分析
第三章 荧光假单胞菌R15防治辣椒疫病方法的研究
    1 材料
        1.1 供试材料
        1.2 试剂
        1.3 主要仪器设备
    2 方法
        2.1 接种剂的准备
        2.2 辣椒盆栽苗的培育
        2.3 实验设计和R15定殖数量调查方法
        2.4 对辣椒疫病防效的实验方法
        2.5 辣椒疫病调查方法和数据统计
    3 结果与分析
        3.1 不同处理对R15定殖量的影响
        3.2 R15定殖量与防治疫病效果的关系
        3.3 伤根处理R15定殖量与防治疫病效果的关系
        3.4 伤根接种处理R15定殖量与防治疫病效果的关系
        3.5 浇灌尿素处理R15定殖量与防治疫病效果的关系
        3.6 灌根接种处理R15定殖量与防治疫病效果的关系
    4 讨论
全文总结与展望
    1 总结
    2 展望
参考文献
攻读硕士学位期间科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]植物内生细菌在辣椒体内的定殖动态及对辣椒疫病的防治效果[J]. 付思娅,陈双林,闫淑珍.  中国生物防治学报. 2013(04)
[2]植物体内活性氧的研究及其在植物抗逆方面的应用[J]. 薛鑫,张芊,吴金霞.  生物技术通报. 2013(10)
[3]绿针假单胞菌HG28-5对辣椒疫病的抑制活性及其根际定殖特性的研究[J]. 申顺善,赵玉华,张利敬,常淑娴,王晶晶,朴凤植.  园艺学报. 2013(08)
[4]利用cDNA-AFLP分析内生解淀粉芽胞杆菌Fy11诱导辣椒差异表达基因[J]. 杨瑞先,范晓静,邱思鑫,蔡学清,胡方平.  中国农业科学. 2013(12)
[5]水稻种子内生细菌多样性及其分泌植物生长素能力的测定[J]. 姜晓宇,高菊生,徐凤花,曹艳花,唐雪,张晓霞.  微生物学报. 2013(03)
[6]沼液施用对辣椒疫病的防治效果及对土壤生物学特性的影响[J]. 曹云,常志州,马艳,杨豪,付广青.  中国农业科学. 2013(03)
[7]四种化学药剂防治辣椒疫病盆栽药效试验[J]. 章彦俊,尉文彬,马全伟,张红杰,孙卫卫.  北方园艺. 2013(02)
[8]内生菌SZ-1的定殖力及其对姜瘟病的防效[J]. 孙正祥,王丰,张昊,邓乐,周燚.  北方园艺. 2013(01)
[9]利用cDNA-AFLP技术研究辣椒核雄性不育两用系的基因差异表达[J]. 韩清,冯淼,刘辰,马宁,沈火林.  农业生物技术学报. 2012(10)
[10]不同肥料对生防菌淡紫拟青霉E7定殖的影响[J]. 潘江禹,汪军,毛超,戴青冬,黄俊生.  广东农业科学. 2012(19)

博士论文
[1]辣椒应答逆境的转录谱分析及相关候选基因cDNA分离与鉴定[D]. 林明.福建农林大学 2008

硕士论文
[1]植物内生细菌定殖及防治辣椒疫病机理的研究[D]. 付思娅.南京师范大学 2013



本文编号：3184948