中国水仙NtSAMT基因的克隆及转化金鱼藤的研究
发布时间：2021-05-18 02:45
中国水仙（Narcissus tazetta var.Chinensis Roem）为石蒜科（Amaryllidaceae）水仙花属多年生球根花卉,是中国十大名花之一。花瓣清新淡雅,香气浓郁。金鱼藤（Asarina procumbens）是玄参科金鱼藤属多年生草本花卉,向左缠绕生长,是良好的垂直绿化的植物材料,原产于欧洲,花色丰富,花和叶都有一定的观赏价值,但是其缺少香味。花香是次生代谢产物的一种,由大量的挥发性物质混合而成,以挥发的形式散布到环境中。花香可以提升园林植物的观赏价值,另一方面可以吸引昆虫授粉,通过杂交培育新品种。萜烯类化合物和苯丙酸类化合物/苯环型化合物的代谢途径是目前主要研究的两个花香代谢途径。研究表明,通过引入外源花香物质合成相关基因,使转基因植株花香品质改变是可行的。SAMT基因是苯丙氨酸代谢途径中重要的催化酶,能够调节花香成分中水杨酸甲酯的释放。本研究利用分子遗传手段,克隆中国水仙中调控花香合成的Nt SAMT基因,分析该基因的结构和功能,用农杆菌介导法将Nt SAMT基因转化到金鱼藤中,从而改良金鱼藤花香品质;同时为观赏植物进行花香遗传改良提供科学依据。本研究...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 引言
1.1 研究的目的与意义
1.2 国内外研究动态和趋势
1.2.1 植物花香生物合成关键酶及基因的研究进展
1.2.2 植物花香SABATH甲基转移酶的研究进展
1.2.3 植物SAMT的研究进展
1.2.4 水仙花花香的研究进展
1.2.5 金鱼藤的研究进展
1.3 研究内容与技术路线
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌种及载体
2.1.3 试验试剂
2.1.4 培养基
2.2 试验方法
2.2.1 目的基因全长cDNA的克隆
2.2.2 植物表达载体的构建
2.2.3 农杆菌介导的金鱼藤遗传转化及转基因植株再生
3 结果与分析
3.1 提取植物总RNA
3.2 RT-PCR法克隆Nt SAMT基因cDNA全长
3.3 中国水仙Nt SAMT基因的序列及其推导的蛋白同源性分析
3.3.1 Nt SAMT基因cDNA全长序列
3.3.2 Nt SAMT基因同源性比对
3.3.3 Nt SAMT编码氨基酸序列进化树分析
3.4 植物表达载体的构建
3.5 金鱼藤遗传转化体系建立
3.5.1 卡那霉素（Km）筛选压力的确定
3.5.2 除菌剂浓度的确定
3.6 外源基因转化金鱼藤
3.7 抗性植株的PCR检测
3.8 拟转基因金鱼藤植株的RT-PCR检测
4 讨论
4.1 花香基因分离方法的研究
4.1.1 功能克隆
4.1.2 同源克隆
4.1.3 表型差异克隆
4.2 花香基因的改良研究
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国水仙NtSAMT基因的克隆及转化金鱼藤[J]. 郑清波,赵明明,郑鑫,刘绪明,樊金萍. 基因组学与应用生物学. 2016(02)
[2]金鱼藤中ApNAP基因的克隆和表达模式分析[J]. 樊金萍,赵然. 植物科学学报. 2014(03)
[3]不同光照强度对‘金盏银台’水仙花香释放的影响[J]. 窦雅君,翟娟,侯芳梅,冷平生,王文和,胡增辉. 西北农业学报. 2014(04)
[4]金鱼藤的组织培养和快速繁殖体系的建立[J]. 张美恒,胡翠萍,樊金萍. 作物杂志. 2012(02)
[5]蜡梅花香基因SAMT的cDNA克隆及在大肠杆菌中的表达[J]. 马蕾,李慧芬,彭忱晨,陈子柱,龙章富. 安徽农业科学. 2012(03)
[6]植物SABATH甲基转移酶研究进展[J]. 黄铭坤,何杰玲,范燕萍. 植物生理学报. 2011(09)
[7]茶树咖啡酸氧甲基转移酶基因的克隆及原核表达[J]. 李小霞,余有本. 西北农业学报. 2011(05)
[8]薇甘菊水杨酸羧甲基转移酶基因的分离鉴定及表达分析[J]. 王文天,彭少麟,李冬梅,王冬梅,王瑞龙,田彩娟,赵厚本,户桂敏. 热带亚热带植物学报. 2009(05)
[9]花香的基因工程研究进展[J]. 向林,陈龙清. 中国农业科学. 2009(06)
[10]月季功能基因研究与应用进展[J]. 谢吉容,程再全,唐开学,黄兴奇,梁国鲁. 北方园艺. 2007(08)
博士论文
[1]钴-60Gamma射线辐照中国水仙的诱变效应和机理研究[D]. 高健.中国林业科学研究院 2000
硕士论文
[1]基于cDNA-AFLP筛选茶树被茶尺蠖取食诱导的相关差异基因及SAMT的克隆与表达分析[D]. 曹士先.安徽农业大学 2012
[2]cDNA-AFLP技术分离桂花香气相关基因[D]. 张园.福建农林大学 2009
[3]薰衣草芳樟醇合成酶的基因克隆、功能鉴定及转基因技术的研究[D]. 张雪荣.内蒙古农业大学 2007
[4]矮牵牛花香基因BSMT3cDNA克隆与原核表达[D]. 张海英.四川大学 2007
本文编号：3192959
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 引言
1.1 研究的目的与意义
1.2 国内外研究动态和趋势
1.2.1 植物花香生物合成关键酶及基因的研究进展
1.2.2 植物花香SABATH甲基转移酶的研究进展
1.2.3 植物SAMT的研究进展
1.2.4 水仙花花香的研究进展
1.2.5 金鱼藤的研究进展
1.3 研究内容与技术路线
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌种及载体
2.1.3 试验试剂
2.1.4 培养基
2.2 试验方法
2.2.1 目的基因全长cDNA的克隆
2.2.2 植物表达载体的构建
2.2.3 农杆菌介导的金鱼藤遗传转化及转基因植株再生
3 结果与分析
3.1 提取植物总RNA
3.2 RT-PCR法克隆Nt SAMT基因cDNA全长
3.3 中国水仙Nt SAMT基因的序列及其推导的蛋白同源性分析
3.3.1 Nt SAMT基因cDNA全长序列
3.3.2 Nt SAMT基因同源性比对
3.3.3 Nt SAMT编码氨基酸序列进化树分析
3.4 植物表达载体的构建
3.5 金鱼藤遗传转化体系建立
3.5.1 卡那霉素（Km）筛选压力的确定
3.5.2 除菌剂浓度的确定
3.6 外源基因转化金鱼藤
3.7 抗性植株的PCR检测
3.8 拟转基因金鱼藤植株的RT-PCR检测
4 讨论
4.1 花香基因分离方法的研究
4.1.1 功能克隆
4.1.2 同源克隆
4.1.3 表型差异克隆
4.2 花香基因的改良研究
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国水仙NtSAMT基因的克隆及转化金鱼藤[J]. 郑清波,赵明明,郑鑫,刘绪明,樊金萍. 基因组学与应用生物学. 2016(02)
[2]金鱼藤中ApNAP基因的克隆和表达模式分析[J]. 樊金萍,赵然. 植物科学学报. 2014(03)
[3]不同光照强度对‘金盏银台’水仙花香释放的影响[J]. 窦雅君,翟娟,侯芳梅,冷平生,王文和,胡增辉. 西北农业学报. 2014(04)
[4]金鱼藤的组织培养和快速繁殖体系的建立[J]. 张美恒,胡翠萍,樊金萍. 作物杂志. 2012(02)
[5]蜡梅花香基因SAMT的cDNA克隆及在大肠杆菌中的表达[J]. 马蕾,李慧芬,彭忱晨,陈子柱,龙章富. 安徽农业科学. 2012(03)
[6]植物SABATH甲基转移酶研究进展[J]. 黄铭坤,何杰玲,范燕萍. 植物生理学报. 2011(09)
[7]茶树咖啡酸氧甲基转移酶基因的克隆及原核表达[J]. 李小霞,余有本. 西北农业学报. 2011(05)
[8]薇甘菊水杨酸羧甲基转移酶基因的分离鉴定及表达分析[J]. 王文天,彭少麟,李冬梅,王冬梅,王瑞龙,田彩娟,赵厚本,户桂敏. 热带亚热带植物学报. 2009(05)
[9]花香的基因工程研究进展[J]. 向林,陈龙清. 中国农业科学. 2009(06)
[10]月季功能基因研究与应用进展[J]. 谢吉容,程再全,唐开学,黄兴奇,梁国鲁. 北方园艺. 2007(08)
博士论文
[1]钴-60Gamma射线辐照中国水仙的诱变效应和机理研究[D]. 高健.中国林业科学研究院 2000
硕士论文
[1]基于cDNA-AFLP筛选茶树被茶尺蠖取食诱导的相关差异基因及SAMT的克隆与表达分析[D]. 曹士先.安徽农业大学 2012
[2]cDNA-AFLP技术分离桂花香气相关基因[D]. 张园.福建农林大学 2009
[3]薰衣草芳樟醇合成酶的基因克隆、功能鉴定及转基因技术的研究[D]. 张雪荣.内蒙古农业大学 2007
[4]矮牵牛花香基因BSMT3cDNA克隆与原核表达[D]. 张海英.四川大学 2007
本文编号：3192959
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