芥菜开花调控蛋白AGL24与SOC1基因相互作用的分子机制

发布时间：2021-05-23 01:07

　　芥菜是我国南方广泛栽植的十字花科蔬菜作物,开花时间的早晚将会影响产品器官的产量与品质。虽然在模式植物拟南芥中已分离出大量与开花相关的基因,但是,在蔬菜作物芥菜上这些同源基因是否具有相似的功能,它们调控芥菜开花时间的分子机制究竟如何,目前并不清楚。迄今为止,有关芥菜AGL24蛋白与SOC1基因之间的作用机制仍未见报道。为了研究芥菜AGL24蛋白与SOC1基因的互作机理,本试验通过酵母单杂交体系和双萤光素酶活性检测系统检测了芥菜SOC1启动子的全长、截短体（含CArG-box基序的3个SOC1小片段）、突变体（CArG-box基序突变后的小片段）分别与AGL24蛋白之间的相互作用,从而筛选SOC1启动子与AGL24蛋白的结合区域。此外还利用农杆菌介导AGL24转化芥菜,从体内验证转基因植株对SOC1基因表达及开花的影响。为深入研究SOC1基因的表达调控提供一定的理论基础。主要试验结果如下:1.芥菜AGL24基因的克隆及生物信息学分析以芥菜茎尖总RNA反转录cDNA第一链作为模板,扩增得到的AGL24基因的cDNA序列为666 bp,预测编码221个氨基酸残基。通过Prot Param软件分... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 MADS-box转录因子
        1.1.1 I型MADS-box转录因子
        1.1.2 II型MADS-box转录因子
    1.2 开花促进因子AGL24
        1.2.1 AGL24基因结构及表达模式
        1.2.2 AGL24与SVP的功能差异
        1.2.3 AGL24的一部分功能是在CO下游起作用
        1.2.4 AGL24参与调控花器官发育
    1.3 SOC1花期调控的分子机制
        1.3.1 SOC1与CO和FT
        1.3.2 SOC1与FLC和SVP
        1.3.3 SOC1与AGL24
    1.4 植物启动子的结构特征
        1.4.1 转录起始位点
        1.4.2 TATA框
        1.4.3 CAAT框
        1.4.4 GC框
    1.5 DNA与蛋白质相互作用的研究方法
        1.5.1 酵母单杂交系统
        1.5.2 双萤光素酶报告基因系统
第二章 引言
第三章 芥菜SOC1启动子全长与AGL24相互作用分析
    3.1 材料
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 菌种及载体
        3.1.3 试验试剂
        3.1.4 主要仪器
    3.2 方法
        3.2.1 试验试剂的配制
        3.2.2 引物设计
        3.2.3 AGL24基因的克隆
        3.2.4 酵母单杂交系统检测SOC1启动子与AGL24蛋白相互作用
        3.2.5 双萤光素酶系统检测SOC1启动子与AGL24蛋白相互作用
    3.3 结果与分析
        3.3.1 AGL24基因的克隆
        3.3.2 酵母表达载体的构建
        3.3.3 重组酵母菌Y1H（pAbAi-SOC1）的AbA背景浓度
        3.3.4 双萤光素酶载体构建
        3.3.5 SOC1启动子与AGL24蛋白相互作用鉴定
第四章 芥菜SOC1启动子截短体与AGL24相互作用分析
    4.1 材料
    4.2 方法
        4.2.1 试验试剂的配制
        4.2.2 引物设计
        4.2.3 酵母单杂交系统检测SOC1启动子截短体与AGL24相互作用
        4.2.4 双萤光素酶系统检测SOC1启动子截短体与AGL24相互作用
    4.3 结果与分析
        4.3.1 重组酵母菌Y1H[pAbAi-SOC1-（1-3）]的AbA背景浓度
        4.3.2 SOC1启动子截短体双萤光素酶载体的构建
        4.3.3 重组质粒的测序
第五章 芥菜SOC1的启动子CArG-box突变体与AGL24相互作用分析
    5.1 材料
    5.2 方法
        5.2.1 试验试剂的配制
        5.2.2 引物设计
        5.2.3 酵母单杂交系统检测SOC1启动子突变体片段与AGL24相互作用
        5.2.4 双萤光素酶系统检测SOC1启动子突变体片段与AGL24相互作用
    5.3 结果与分析
        5.3.1 SOC1启动子CArG-box突变体重组酵母菌的AbA背景浓度
        5.3.2 SOC1启动子突变体双萤光素酶载体的构建
        5.3.3 重组质粒的测序
        5.3.4 SOC1突变体片段与AGL24蛋白相互作用鉴定
第六章 农杆菌介导AGL24转化芥菜
    6.1 材料
        6.1.1 植物材料
        6.1.2 菌种及载体
        6.1.3 试验试剂
        6.1.4 主要仪器
    6.2 方法
        6.2.1 试验试剂的配制
        6.2.2 引物设计
        6.2.3 植物表达载体的构建
        6.2.4 植物表达载体转化农杆菌
        6.2.5 农杆菌介导转化芥菜
        6.2.6 抗性芥菜植株的PCR鉴定
        6.2.7 GUS组织化学染色检测
    6.3 结果与分析
        6.3.1 植物表达载体的构建
        6.3.2 农杆菌介导转化法获得抗性植株
        6.3.3 抗性芥菜的PCR鉴定
        6.3.4 抗性芥菜的GUS组织化学染色检测
第七章 结论
    7.1 克隆了芥菜AGL24基因
    7.2 芥菜SOC1启动子全长能与AGL24蛋白相互作用
    7.3 芥菜SOC1启动子截短体与AGL24蛋白相互作用鉴定
    7.4 芥菜SOC1启动子CArG-box突变体与AGL24相互作用鉴定
    7.5 AGL24正义载体成功转化芥菜
第八章 讨论
参考文献
附录
致谢
项目资助
在校期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]抽薹开花调控基因SVP的作用机制[J]. 杨修勤,王志敏,汤青林,宋明.  中国蔬菜. 2013(02)
[2]芥菜开花调控蛋白SVP与FLC酵母表达载体的构建及其相互作用研究[J]. 汤青林,李念祖,丁宁,陈竹睿,宋明,王志敏.  园艺学报. 2012(06)
[3]高等植物启动子的研究进展[J]. 李杰,张福城,王文泉,黄丽云.  生物技术通讯. 2006(04)
[4]植物基因启动子研究进展[J]. 张春晓,王文棋,蒋湘宁,陈雪梅.  遗传学报. 2004(12)
[5]玉米中与DRE元件结合的转录因子的克隆和结构分析（英文）[J]. 秦峰,李洁,张贵友,赵军,陈受宜,刘强.  Acta Botanica Sinica. 2003(03)
[6]高等植物启动子研究进展[J]. 李一琨,王金发.  植物学通报. 1998(S1)



本文编号：3201990