柚果实类胡萝卜素合成途径的研究

发布时间：2021-05-25 07:43

　　’琯溪蜜柚 ’（Citrus maxima Burm.Merr.cv.Guanximiyou）原产于福建省漳州市平和县,是我国栽培柚类的名品。’红绵蜜柚’（Citrus maxima（Burm.）Merr.cv.Hongmianmiyou）、’三红蜜柚’（Citrus maxima（Burm.）Merr.cv.Sanhongmmiyou）和’红肉蜜柚’（Citrus maxima（Burm.）Merr.cv.Hongroumiyou）均为’琯溪蜜柚’的芽变选育品种。为了解蜜柚果实不同组织的呈色机理,本研究以’琯溪蜜柚’、’红绵蜜柚’、’三红蜜柚’和’红肉蜜柚’为试验材料,以期探讨蜜柚不同组织中主要类胡萝卜素的积累以及与类胡萝卜素合成途径中相关酶基因之间的关系,为揭示蜜柚果实的呈色机理奠定理论基础。主要研究结果如下:1、蜜柚果实类胡萝卜素UPLC检测体系的建立。采用ACQUITY UPLC（?）（美国WATERS公司）超高效液相色谱-质谱联用仪,配备ACQUITYUPLC（?）BEHC18 色谱柱,2.1×100mm,1.7 μm,以乙腈:甲醇:四氢呋喃=90:5:5为流动相进行等度洗脱... 

【文章来源】：福建农林大学福建省

【文章页数】：99 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩略词
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1 类胡萝卜素的研究现状
        1.1 类胡萝卜素的生物学功能
            1.1.1 类胡萝卜素参与光合作用
            1.1.2 类胡萝卜素具有抗氧化作用
            1.1.3 类胡萝卜素在细胞膜上的作用
            1.1.4 类胡萝卜素是维生素A原
            1.1.5 类胡萝卜素与蛋白质之间的相互作用
            1.1.6 类胡萝卜素在细胞膜上的作用
        1.2 类胡萝卜素的生物合成途径
        1.3 类胡萝卜素生物合成途径中主要酶及基因
    2 类胡萝卜素的提取技术
        2.1 有机溶剂提取法
        2.2 酶反应法
        2.3 微波辅助萃取法
        2.4 超声波辅助萃取法
        2.5 超临界流体萃取法
    3 本研究的意义及内容
        3.1 研究意义与主要内容
        3.2 技术路线
第二章 柚果实类胡萝卜素UPLC方法的建立
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验仪器和试剂
            1.2.1 主要试验仪器
            1.2.2 主要试验药品
        1.3 试验方法
            1.3.1 样品溶液的制备
            1.3.2 标准溶液的配制
            1.3.3 数据处理
    2 结果与分析
        2.1 UPLC类胡萝卜素组分分离条件的优化
        2.2 标准曲线的绘制
        2.3 UPLC定量分析的方法考察
            2.3.1 精密度试验
            2.3.2 重复性试验
            2.3.3 稳定性试验
            2.3.4 加标回收试验
    3 讨论
第三章 柚果实类胡萝卜素的分离与主要色素的含量分析
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验仪器和试剂
        1.3 试验方法
        1.4 数据处理
    2 结果与分析
        2.1 柚果实的发育及成色过程
        2.2 不同品种柚果实内番茄红素含量的变化
        2.3 不同品种柚果实内β-胡萝卜素含量的变化
        2.4 不同品种柚果实内玉米黄素含量的变化
    3 讨论
第四章 柚类胡萝卜素合成途径相关基因的克隆及表达分析
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验方法
            1.2.1 总RNA的提取和cDNA逆转录
            1.2.2 目的基因克隆
            1.2.3 生物信息学分析
            1.2.4 荧光定量PCR分析
    2 结果与分析
        2.1 目的基因克隆
        2.2 生物信息学分析
        2.3 氨基酸序列多重比对及进化树分析
            2.3.1 CmPSY编码氨基酸序列多重比对分析及进化树分析
            2.3.2 CmPDS编码氨基酸序列多重比对分析及进化树分析
            2.3.3 CmZDS编码氨基酸序列多重比对分析及进化树分析
            2.3.4 CmCRTISO编码氨基酸序列多重比对分析及进化树分析
            2.3.5 CmLCYE编码氨基酸序列多重比对分析及进化树分析
            2.3.6 CmLCYB编码氨基酸序列多重比对分析及进化树分析
            2.3.7 CmBCH编码氨基酸序列多重比对分析及进化树分析
            2.3.8 CmZEP编码氨基酸序列多重比对分析及进化树分析
        2.4 荧光定量PCR分析
            2.4.1 CmPSY在柚果实不同时期表达分析
            2.4.2 CmPDS在柚果实不同时期表达分析
            2.4.3 CmZDS在柚果实不同时期表达分析
            2.4.4 CmCRTISO在柚果实不同时期表达分析
            2.4.5 CmLCYE在柚果实不同时期表达分析
            2.4.6 CmLCYB在柚果实不同时期表达分析
            2.4.7 CmBCH在柚果实不同时期表达分析
            2.4.8 CmZEP在柚果实不同时期表达分析
    3 讨论
第五章 总结与展望
    1 总结
        1.1 蜜柚果实类胡萝卜素UPLC检测体系的建立
        1.2 蜜柚果实中主要类胡萝卜素的分离与鉴定
        1.3 相关基因的克隆与生物信息学分析
        1.4 利用荧光定量PCR技术对相关基因进行表达分析
    2 展望
参考文献
附录A 柚类胡萝卜素UPLC条件优化
附录B 编码区序列和推导的氨基酸序列
附录C 生物信息学分析
攻读学位期间的学术论文与研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3204961