农田生态系统木霉菌多样性分析及其对葡萄灰霉病的防治研究
发布时间：2021-06-13 18:35
木霉菌（Trichoderma spp.）具有防治作物病害、促进植物生长、土壤修复等重要功能,在农业生产中占据着极其重要的地位。本文首次针对我国南方部分（三省一直辖市）农田生态系统的土壤样品进行木霉菌的采集、分离、筛选及鉴定,明确了木霉种类的区域分布、丰度及多样性特征,为木霉菌的资源挖掘及应用开发提供了理论依据；利用T-RFLP技术明确了木霉丰度与土壤微生物群落多样性的关系,为更快速有效的发掘和利用木霉资源奠定了基础；通过对所分离的木霉菌株进行多功能拮抗菌株的筛选,为生防木霉菌剂的开发、农业作物病害的防治提供了菌株来源；利用Real-time PCR技术定量检测田间葡萄灰霉病病原菌孢子含量与田间病情指数关系,为葡萄灰霉病的快速诊断及病害预警做出有效的判断；最后通过田间试验评估所筛选优良生防木霉菌株预防及治疗田间葡萄灰霉病的效果,明确了生防木霉菌剂可以作为优良的化学农药的替代药剂,对提高葡萄品质和产量,促进有机水果的推广应用,农业的可持续发展具有重大意义。研究结果如下：采集南方四省市农田生态系统土壤样品156份,经形态学及内转录间隔区（ITS）、翻译延长因子（Tef1-α）序列的分子生物...
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 前言
1.1 木霉菌的分布及国内现有种类记述
1.2 木霉菌分类与鉴定研究进展
1.2.1 木霉菌形态学分类研究进展
1.2.2 木霉菌分子生物学分类研究进展
1.3 木霉和土壤微生物多样性的相关性
1.4 木霉在农业生产中的应用研究
1.4.1 木霉菌在生物防治中的研究进展
1.4.2 木霉促生长功能研究进展
1.4.3 木霉几丁质酶活性研究进展
1.5 木霉菌对葡萄灰霉病的研究进展
1.6 研究目的和意义
1.7 研究内容与技术路线
1.7.1 研究内容
1.7.2 技术路线
第2章 木霉菌的采集、分离、筛选及鉴定
2.1 材料
2.1.1 样品采集地
2.1.2 主要仪器
2.1.3 培养基
2.2 方法
2.2.1 样品采集及保存
2.2.2 木霉菌株分离
2.2.3 木霉的纯化与保存
2.2.4 木霉菌的形态学鉴定
2.2.5 木霉菌的分子鉴定
2.2.6 目的基因的序列测定
2.2.7 系统发育进化树的构建
2.3 结果与分析
2.3.1 木霉菌株种类鉴定
2.3.2 木霉新纪录种
2.3.3 木霉菌株种类遗传多样性研究
2.3.4 木霉菌株分布多样性研究
2.4 结论与讨论
第3章 农田生态系统木霉与土壤微生物多样性相关性分析
3.1 材料
3.1.1 土壤样品
3.1.2 试剂与仪器
3.2 方法
3.2.1 土壤总基因组DNA提取
3.2.2 真菌ITS区及细菌16S rDNA PCR扩增
3.2.3 PCR扩增产物回收
3.2.4 PCR产物酶切
3.2.5 消化片段检测
3.2.6 数据处理
3.3 结果与分析
3.3.1 土壤总基因组DNA提取
3.3.2 土壤DNA的扩增及纯化回收
3.3.3 Msp Ⅰ、Hae Ⅲ酶切对土壤群落微生物T-RFLP的影响
3.3.4 不同地区土壤样品真细菌微生物群落T-RFLP酶切图谱分析
3.3.5 不同木霉分离样品土壤微生物群落多样性分析
3.3.6 不同土壤样品酶切图谱相似性分析
3.4 结论与讨论
第4章 多功能生防木霉菌株的筛选
4.1 材料
4.1.1 供试材料
4.1.2 培养基
4.2 方法
4.2.1 木霉菌对不同病院真菌平板对峙培养评价
4.2.2 木霉菌株对黄瓜幼苗促生长作用的评价
4.2.3 木霉菌几丁质酶活性测定
4.3 结果与分析
4.3.1 木霉菌对不同病原真菌平板对峙培养评价
4.3.2 木霉菌株对黄瓜幼苗的促生长效果
4.3.3 几丁质酶活性测定
4.4 结论与讨论
第5章 哈茨木霉对葡萄灰霉病菌的田间防治及灰霉病的快速诊断
5.1 材料
5.1.1 试剂及仪器
5.1.2 葡萄样品与供试菌株
5.1.3 供试品种与药剂
5.1.4 试验地概况
5.2 方法
5.2.1 试验设计
5.2.2 田间病害施药与调查方法
5.2.3 DNA的提取
5.2.4 Real-time PCR反应条件及反应体系
5.2.5 标准品的制备
5.2.6 标准曲线的绘制
5.2.7 田间葡萄样品灰葡萄孢菌DNA的定量检测
5.2.8 数据处理与分析
5.3 结果与分析
5.3.1 上海市设施葡萄灰霉病发病情况
5.3.2 不同葡萄设施栽培模式下葡萄灰霉病病害发生情况
5.3.3 不同栽培模式下施用复合哈茨木霉菌、几丁聚糖治疗葡萄灰霉病效果分析
5.3.4 葡萄组织样品基因组DNA提取
5.3.5 Real time PCR标准曲线的建立
5.3.6 田间葡萄灰霉病分子病情指数的检测
5.4 结论与讨论
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
参考文献
致谢
硕士期间已发表论文
本文编号：3228095
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 前言
1.1 木霉菌的分布及国内现有种类记述
1.2 木霉菌分类与鉴定研究进展
1.2.1 木霉菌形态学分类研究进展
1.2.2 木霉菌分子生物学分类研究进展
1.3 木霉和土壤微生物多样性的相关性
1.4 木霉在农业生产中的应用研究
1.4.1 木霉菌在生物防治中的研究进展
1.4.2 木霉促生长功能研究进展
1.4.3 木霉几丁质酶活性研究进展
1.5 木霉菌对葡萄灰霉病的研究进展
1.6 研究目的和意义
1.7 研究内容与技术路线
1.7.1 研究内容
1.7.2 技术路线
第2章 木霉菌的采集、分离、筛选及鉴定
2.1 材料
2.1.1 样品采集地
2.1.2 主要仪器
2.1.3 培养基
2.2 方法
2.2.1 样品采集及保存
2.2.2 木霉菌株分离
2.2.3 木霉的纯化与保存
2.2.4 木霉菌的形态学鉴定
2.2.5 木霉菌的分子鉴定
2.2.6 目的基因的序列测定
2.2.7 系统发育进化树的构建
2.3 结果与分析
2.3.1 木霉菌株种类鉴定
2.3.2 木霉新纪录种
2.3.3 木霉菌株种类遗传多样性研究
2.3.4 木霉菌株分布多样性研究
2.4 结论与讨论
第3章 农田生态系统木霉与土壤微生物多样性相关性分析
3.1 材料
3.1.1 土壤样品
3.1.2 试剂与仪器
3.2 方法
3.2.1 土壤总基因组DNA提取
3.2.2 真菌ITS区及细菌16S rDNA PCR扩增
3.2.3 PCR扩增产物回收
3.2.4 PCR产物酶切
3.2.5 消化片段检测
3.2.6 数据处理
3.3 结果与分析
3.3.1 土壤总基因组DNA提取
3.3.2 土壤DNA的扩增及纯化回收
3.3.3 Msp Ⅰ、Hae Ⅲ酶切对土壤群落微生物T-RFLP的影响
3.3.4 不同地区土壤样品真细菌微生物群落T-RFLP酶切图谱分析
3.3.5 不同木霉分离样品土壤微生物群落多样性分析
3.3.6 不同土壤样品酶切图谱相似性分析
3.4 结论与讨论
第4章 多功能生防木霉菌株的筛选
4.1 材料
4.1.1 供试材料
4.1.2 培养基
4.2 方法
4.2.1 木霉菌对不同病院真菌平板对峙培养评价
4.2.2 木霉菌株对黄瓜幼苗促生长作用的评价
4.2.3 木霉菌几丁质酶活性测定
4.3 结果与分析
4.3.1 木霉菌对不同病原真菌平板对峙培养评价
4.3.2 木霉菌株对黄瓜幼苗的促生长效果
4.3.3 几丁质酶活性测定
4.4 结论与讨论
第5章 哈茨木霉对葡萄灰霉病菌的田间防治及灰霉病的快速诊断
5.1 材料
5.1.1 试剂及仪器
5.1.2 葡萄样品与供试菌株
5.1.3 供试品种与药剂
5.1.4 试验地概况
5.2 方法
5.2.1 试验设计
5.2.2 田间病害施药与调查方法
5.2.3 DNA的提取
5.2.4 Real-time PCR反应条件及反应体系
5.2.5 标准品的制备
5.2.6 标准曲线的绘制
5.2.7 田间葡萄样品灰葡萄孢菌DNA的定量检测
5.2.8 数据处理与分析
5.3 结果与分析
5.3.1 上海市设施葡萄灰霉病发病情况
5.3.2 不同葡萄设施栽培模式下葡萄灰霉病病害发生情况
5.3.3 不同栽培模式下施用复合哈茨木霉菌、几丁聚糖治疗葡萄灰霉病效果分析
5.3.4 葡萄组织样品基因组DNA提取
5.3.5 Real time PCR标准曲线的建立
5.3.6 田间葡萄灰霉病分子病情指数的检测
5.4 结论与讨论
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
参考文献
致谢
硕士期间已发表论文
本文编号：3228095
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