茭白两种内生真菌分离纯化及培养条件优化
发布时间：2021-06-14 18:55
茭白（Zizania latifolia）为菰属多年生草本植物,是我国第二大水生蔬菜。不仅营养丰富,同时具有保健和药用价值。茭白膨大茎的形成与菰黑粉菌的侵染有密切关系,茭白有正常茭白、灰茭及雄茭三种表型,这三种表型与黑粉菌在茭白体内的生长密切相关。当黑粉菌成功侵染茭白植株后,茭白茎部组织膨大形成肥大的肉质茎,即“正常茭”;如果植株能抵抗菰黑粉菌的侵染,从而开花结实,不长茭白的称之为“雄茭”;若黑粉菌潜育期缩短,形成黑褐色的厚垣孢子堆,使得茭白的肉质茎中充满黑色斑点的则称之为“灰茭”。研究表明,茭白在生产上若连续两年不选种,雄茭、灰茭的发生率将达到30%左右,严重影响农民的经济效益。本课题以茭白为研究对象,研究茭白内生真菌的种类及其培养条件,主要如下:（1）采用三点纯化与单孢分离相结合的方法对茭白内生真菌进行分离纯化,再通过分子生物学手段对其内生真菌进行菌丝DNA提取、真菌引物设计、目的片段PCR扩增、目的片段胶回收、T载体连接及相应质粒提取等一系列手段,对所得内生真菌进行鉴定。通过测序得到两个内生真菌长度为:627 bp和618 bp,测序结果表明,分离的两种内生真菌为毛霉菌和烟管菌。...
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线Fig.1Thetechnicalroute
图 2 pMD19-T Simple Vector 结构示意图Figure 2 Structure diagram of pMD19-T Simple Vector DNA 快速抽提试剂盒、植物基因组 DNA 快速抽提试剂司、SanPreP 柱式 DNA 胶回收试剂盒（FavorPrepTi Kit）购自北京全式金，氯仿、异丙醇、无水乙醇等购自公司。酵母粉、蛋白胨等购自上海生工。（SW-CJ-2F，苏州净化）、凝胶成像系统（JY04S-3C，君仪（DYY-6C，北京六一）、PCR 扩增仪（S1000TM，BI箱（DHG-9123A，上海三发）、数显震荡培养箱（ZHP-式离心机（TGL-16G，上海安亭）、酸度计（UB-7，北京KQ-250E，天津泰斯特）、高温灭菌锅（LDZX-50FBS，735BR3138，BIO-RAD）、纯水机（RM220，美国艾科浦
吸取 4 ul PCR 产物和 1ul DNA Loading 混合均匀，进行检测，菌液送测序公司（上海生工）进行检测。测序结果s://www.ncbi.nlm.nih.gov/），MEGA 软件对扩增片段序列和部分进行进化树分析。分析霉菌的菌落和孢子形态鉴定料为安徽省桃溪县农科所试验田的‘鄂茭 1 号’，对材料进行消过的灰茭组织薄片平铺于 PDA 培养基上，培养 48 h 后即有菌的延长，菌落颜色呈米白色，且周边有白色菌丝生成。在菌落边的白色菌丝，采用三点纯化法进行分离纯化，在培养第 5d培养的单菌落做单孢分离试验，挑取单一孢子接种在 PDA 条件下进行单菌落培养，如图 3 所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]人工湿地不同植被净化污水效果及其氮磷累积研究[J]. 胡世琴. 水土保持研究. 2017(01)
[2]内生菌与植物的互作关系及对药用植物的影响[J]. 崔晋龙,郭顺星,肖培根. 药学学报. 2017(02)
[3]种植水生植物对库区城郊支流污水水体质量的影响[J]. 黄仁军,潘明安,沈远明. 现代农业科技. 2017(02)
[4]梅花内生真菌及其多样性[J]. 卢东升,侯志杰,王婷敏. 东北林业大学学报. 2017(01)
[5]菰黑粉菌转录调节因子Rbf1的克隆及表达分析[J]. 胡鹏,张雅芬,崔海峰,俞晓平,叶子弘. 长江蔬菜. 2015(22)
[6]茭白水溶性多糖提取工艺及单糖组成的研究[J]. 汪名春,赵士伟,朱培蕾,张月,朱小燕,周裔彬,曾晓雄. 食品工业科技. 2015(17)
[7]低盐茭白泡菜发酵工艺的研究[J]. 刘晓莉. 中国调味品. 2014(10)
[8]几种水培植物对生活污水的净化效果比较[J]. 刘颖,刘磊,袁平成,郭恢财,胡小飞,高勇生. 江西农业大学学报. 2014(04)
[9]开放条件下烟管菌XX-2对孔雀石绿染料的高效降解[J]. 何兴兵,林永慧,韩国民,王成,周小成,叶佳,何再华,田启建. 微生物学通报. 2013(07)
[10]茭白黑粉菌核相变化及ISSR分子标记筛选的研究[J]. 赵煦泓,尤文雨,崔海峰,俞晓平,叶子弘. 中国计量学院学报. 2011(02)
硕士论文
[1]茭白黑粉菌二型态转换的影响因素分析及乙醛酸循环关键基因功能初探[D]. 刘俊平.中国计量学院 2014
[2]茭白黑粉菌原生质体制备及核型初步分析[D]. 王晓清.浙江大学 2013
[3]几种药用植物内生真菌的分离鉴定及菌丝培养特性研究[D]. 谢凤颖.东北林业大学 2012
[4]茭白膳食纤维的初步研究[D]. 黄凯丰.扬州大学 2005
[5]茭白孕茭期间生理生化变化的研究[D]. 程龙军.浙江大学 2002
本文编号：3230142
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线Fig.1Thetechnicalroute
图 2 pMD19-T Simple Vector 结构示意图Figure 2 Structure diagram of pMD19-T Simple Vector DNA 快速抽提试剂盒、植物基因组 DNA 快速抽提试剂司、SanPreP 柱式 DNA 胶回收试剂盒（FavorPrepTi Kit）购自北京全式金，氯仿、异丙醇、无水乙醇等购自公司。酵母粉、蛋白胨等购自上海生工。（SW-CJ-2F，苏州净化）、凝胶成像系统（JY04S-3C，君仪（DYY-6C，北京六一）、PCR 扩增仪（S1000TM，BI箱（DHG-9123A，上海三发）、数显震荡培养箱（ZHP-式离心机（TGL-16G，上海安亭）、酸度计（UB-7，北京KQ-250E，天津泰斯特）、高温灭菌锅（LDZX-50FBS，735BR3138，BIO-RAD）、纯水机（RM220，美国艾科浦
吸取 4 ul PCR 产物和 1ul DNA Loading 混合均匀，进行检测，菌液送测序公司（上海生工）进行检测。测序结果s://www.ncbi.nlm.nih.gov/），MEGA 软件对扩增片段序列和部分进行进化树分析。分析霉菌的菌落和孢子形态鉴定料为安徽省桃溪县农科所试验田的‘鄂茭 1 号’，对材料进行消过的灰茭组织薄片平铺于 PDA 培养基上，培养 48 h 后即有菌的延长，菌落颜色呈米白色，且周边有白色菌丝生成。在菌落边的白色菌丝，采用三点纯化法进行分离纯化，在培养第 5d培养的单菌落做单孢分离试验，挑取单一孢子接种在 PDA 条件下进行单菌落培养，如图 3 所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]人工湿地不同植被净化污水效果及其氮磷累积研究[J]. 胡世琴. 水土保持研究. 2017(01)
[2]内生菌与植物的互作关系及对药用植物的影响[J]. 崔晋龙,郭顺星,肖培根. 药学学报. 2017(02)
[3]种植水生植物对库区城郊支流污水水体质量的影响[J]. 黄仁军,潘明安,沈远明. 现代农业科技. 2017(02)
[4]梅花内生真菌及其多样性[J]. 卢东升,侯志杰,王婷敏. 东北林业大学学报. 2017(01)
[5]菰黑粉菌转录调节因子Rbf1的克隆及表达分析[J]. 胡鹏,张雅芬,崔海峰,俞晓平,叶子弘. 长江蔬菜. 2015(22)
[6]茭白水溶性多糖提取工艺及单糖组成的研究[J]. 汪名春,赵士伟,朱培蕾,张月,朱小燕,周裔彬,曾晓雄. 食品工业科技. 2015(17)
[7]低盐茭白泡菜发酵工艺的研究[J]. 刘晓莉. 中国调味品. 2014(10)
[8]几种水培植物对生活污水的净化效果比较[J]. 刘颖,刘磊,袁平成,郭恢财,胡小飞,高勇生. 江西农业大学学报. 2014(04)
[9]开放条件下烟管菌XX-2对孔雀石绿染料的高效降解[J]. 何兴兵,林永慧,韩国民,王成,周小成,叶佳,何再华,田启建. 微生物学通报. 2013(07)
[10]茭白黑粉菌核相变化及ISSR分子标记筛选的研究[J]. 赵煦泓,尤文雨,崔海峰,俞晓平,叶子弘. 中国计量学院学报. 2011(02)
硕士论文
[1]茭白黑粉菌二型态转换的影响因素分析及乙醛酸循环关键基因功能初探[D]. 刘俊平.中国计量学院 2014
[2]茭白黑粉菌原生质体制备及核型初步分析[D]. 王晓清.浙江大学 2013
[3]几种药用植物内生真菌的分离鉴定及菌丝培养特性研究[D]. 谢凤颖.东北林业大学 2012
[4]茭白膳食纤维的初步研究[D]. 黄凯丰.扬州大学 2005
[5]茭白孕茭期间生理生化变化的研究[D]. 程龙军.浙江大学 2002
本文编号：3230142
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