番茄SlTFT1和SlTFT10与SlSPS互作在蔗糖代谢调控中的功能研究
发布时间：2021-06-16 18:02
番茄（Solanum lycopersicum）是世界上栽种范围最广的蔬菜作物之一,果实的糖分积累是决定其风味和品质的重要因素。蔗糖磷酸合成酶（SPS）是蔗糖合成的关键酶,受到多种因素调控。14-3-3蛋白是重要的内部调节因子,可能通过与SPS互作调控其活性。本实验室前期预测,番茄14-3-3蛋白家族成员SlTFT1和SlTFT10最可能与蔗糖代谢关键酶蔗糖磷酸合成酶SlSPS相互作用,进而调控番茄的糖代谢。基于此,本研究利用烟草叶片瞬时表达技术,探究了SlTFT1和SlTFT10蛋白的亚细胞定位,SlTFT1和SlTFT10基因组织特异性,利用酵母双杂交、萤火虫荧光素酶（LCI）互补试验验证其与SlSPS的相互作用,并通过对番茄植株瞬时过表达SlTFT1、SlTFT10和SlSPS基因,进一步探究14-3-3蛋白对蔗糖代谢的调控作用。本研究主要结果如下:（1）利用瞬时转化烟草叶片的方法,发现SlTFT1定位于烟草的细胞质中,SlTFT10定位于细胞核与细胞质中。RT-qPCR技术分析表明,SlTFT1基因在番茄各组织中都有表达,表达量相对较低,因此在植株生长发育过程中有调控作用,但不...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
番茄总RNA提取Fig.2-1TotalRNAfromtomato
沈阳农业大学硕士学位论文15表2-1实时荧光定量引物序列Table2-1Primersequencesofquantitativereal-timePCR引物名称Name序列PrimersequencesSlActinF5-GGTGTTATGGTAGGGATGGG-3R5-GCTTCTGTAAGTAGCACAGGGT-3SlTFT1F5-CGGAAATTACCGGCGATTG-3R5-AACCCGACCCGATTACGAG-3SlTFT10F5-TTGAACAGAAGGAGGAATCGC-3R5-CACTGGTAGTAGCAGAGGGAACA-32.3结果与分析2.3.1番茄SlTFT1和SlTFT10的亚细胞定位分析将空载体35S::GFP、35S::SlTFT1-GFP和35S::SlTFT10-GFP重组质粒转入农杆菌EHA105后，通过农杆菌介导瞬时转化方法，注射烟草叶片后，制备烟草叶片原生质体，观察二者的定位情况（图2-2）。结果表明，SlTFT1定位在烟草原生质体的细胞核和细胞质中，SlTFT10定位在烟草原生质体的细胞核中。图2-235S::SlTFT1-GFP和35S::SlTFT10-GFP融合蛋白在烟草原生质体中亚细胞定位Fig.2-2Subcellularlocalizationof35S::SlTFT1-GFPand35S::SlTFT10-GFPfusionproteinsinN.benthamianaprotoplasts
第三章SlTFT1和SlTFT10与SlSPS互作验证162.3.2SlTFT1和SlTFT10基因组织特异性表达为了研究SlTFT1和SlTFT10基因在番茄中的基因表达模式，对番茄成熟植株中不同器官中的组织特异性表达模式进行了RT-qPCR检测（图2-3、2-4），均以根中表达量为基准1.0。在番茄成熟植株中SlTFT1基因在膨大期果实中的表达量最高，其次是叶和花，在绿熟果和成熟果中的表达量较弱，在茎中的表达量最少（图2-3），但整体表达量都较低，说明其在番茄植株中是非特异性表达。在番茄成熟植株中SlTFT10基因在膨大期果实中的表达量最高，其次是绿熟果，在茎、叶、花中表达量较弱，在根和成熟果中的表达量是最少的。由于其在膨大期果实中表达量较其他组织高，因此其为果实特异性表达，并且具有时空表达的特性。图2-3番茄成熟植株SlTFT1组织特异性表达数值为平均值（Means）±SD，重复三次；*表示显著性差异Fig.2-3Tissue-specificexpressionofSlTFT1intomatomatureplantsDataweremeans(±SD)ofthreebiologicalreplicatespercultivar.The*indicatedasignificantdifference图2-4番茄成熟植株SlTFT10组织特异性表达数值为平均值（Means）±SD，重复三次；*表示显著性差异Fig.2-4Tissue-specificexpressionofSlTFT10intomatomatureplantsDataweremeans(±SD)ofthreebiologicalreplicatespercultivar;The*indicatedasignificantdifference
【参考文献】：
期刊论文
[1]烟草Nt14-3-3基因的克隆及生物信息学和表达模式分析[J]. 陈倩,卓维,李佳皓,鲁黎明,李立芹. 烟草科技. 2018(01)
[2]拟南芥开花抑制因子TFL1与GRFs蛋白的相互作用[J]. 袁敏,邢继红,王莉,葛伟娜,郭棣,张岚. 中国农业科学. 2017(10)
[3]大豆14-3-3蛋白与转录因子蛋白GmMYB173的互作[J]. 董萌,高友菲,韩天富,东方阳,蒋炳军. 作物学报. 2016(10)
[4]宁夏枸杞果实糖积累和蔗糖代谢相关酶活性的关系[J]. 郑国琦,罗霄,郑紫燕,王俊,胡正海. 西北植物学报. 2008(06)
[5]植物蛋白质的亚细胞定位研究进展[J]. 邢浩然,刘丽娟,刘国振. 华北农学报. 2006(S2)
[6]植物转化酶的种类﹑特性与功能[J]. 潘秋红,张大鹏. 植物生理学通讯. 2004(03)
[7]苦参碱对小麦旗叶中蔗糖磷酸合成酶活性的调节[J]. 王宁宁,朱建新,王淑芳,朱亮基. 南开大学学报(自然科学版). 2000(01)
博士论文
[1]拟南芥中性蔗糖酶基因AtNIN1（neutral invertase）的功能及其在侧根发育中的调控机制研究[D]. 齐晓朋.浙江大学 2006
硕士论文
[1]番茄SlTFT1和SlTFT10基因功能的研究[D]. 姚佳羽.沈阳农业大学 2018
[2]番茄TFT1和TFT10基因的表达分析及超表达载体构建[D]. 赵晓翠.沈阳农业大学 2013
[3]一种玉米14-3-3蛋白的表达纯化及其蛋白互作因子筛选[D]. 郝彩环.中国农业科学院 2009
[4]番茄果实SPS反义表达载体的构建及遗传转化的研究[D]. 刘秀根.福建农林大学 2008
本文编号：3233534
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
番茄总RNA提取Fig.2-1TotalRNAfromtomato
沈阳农业大学硕士学位论文15表2-1实时荧光定量引物序列Table2-1Primersequencesofquantitativereal-timePCR引物名称Name序列PrimersequencesSlActinF5-GGTGTTATGGTAGGGATGGG-3R5-GCTTCTGTAAGTAGCACAGGGT-3SlTFT1F5-CGGAAATTACCGGCGATTG-3R5-AACCCGACCCGATTACGAG-3SlTFT10F5-TTGAACAGAAGGAGGAATCGC-3R5-CACTGGTAGTAGCAGAGGGAACA-32.3结果与分析2.3.1番茄SlTFT1和SlTFT10的亚细胞定位分析将空载体35S::GFP、35S::SlTFT1-GFP和35S::SlTFT10-GFP重组质粒转入农杆菌EHA105后，通过农杆菌介导瞬时转化方法，注射烟草叶片后，制备烟草叶片原生质体，观察二者的定位情况（图2-2）。结果表明，SlTFT1定位在烟草原生质体的细胞核和细胞质中，SlTFT10定位在烟草原生质体的细胞核中。图2-235S::SlTFT1-GFP和35S::SlTFT10-GFP融合蛋白在烟草原生质体中亚细胞定位Fig.2-2Subcellularlocalizationof35S::SlTFT1-GFPand35S::SlTFT10-GFPfusionproteinsinN.benthamianaprotoplasts
第三章SlTFT1和SlTFT10与SlSPS互作验证162.3.2SlTFT1和SlTFT10基因组织特异性表达为了研究SlTFT1和SlTFT10基因在番茄中的基因表达模式，对番茄成熟植株中不同器官中的组织特异性表达模式进行了RT-qPCR检测（图2-3、2-4），均以根中表达量为基准1.0。在番茄成熟植株中SlTFT1基因在膨大期果实中的表达量最高，其次是叶和花，在绿熟果和成熟果中的表达量较弱，在茎中的表达量最少（图2-3），但整体表达量都较低，说明其在番茄植株中是非特异性表达。在番茄成熟植株中SlTFT10基因在膨大期果实中的表达量最高，其次是绿熟果，在茎、叶、花中表达量较弱，在根和成熟果中的表达量是最少的。由于其在膨大期果实中表达量较其他组织高，因此其为果实特异性表达，并且具有时空表达的特性。图2-3番茄成熟植株SlTFT1组织特异性表达数值为平均值（Means）±SD，重复三次；*表示显著性差异Fig.2-3Tissue-specificexpressionofSlTFT1intomatomatureplantsDataweremeans(±SD)ofthreebiologicalreplicatespercultivar.The*indicatedasignificantdifference图2-4番茄成熟植株SlTFT10组织特异性表达数值为平均值（Means）±SD，重复三次；*表示显著性差异Fig.2-4Tissue-specificexpressionofSlTFT10intomatomatureplantsDataweremeans(±SD)ofthreebiologicalreplicatespercultivar;The*indicatedasignificantdifference
【参考文献】：
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博士论文
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硕士论文
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[3]一种玉米14-3-3蛋白的表达纯化及其蛋白互作因子筛选[D]. 郝彩环.中国农业科学院 2009
[4]番茄果实SPS反义表达载体的构建及遗传转化的研究[D]. 刘秀根.福建农林大学 2008
本文编号：3233534
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