响应乙烯的转录因子在月季花朵衰老过程中的功能分析

发布时间：2021-06-22 09:11

　　月季是世界第一大切花,乙烯是影响花朵衰老的重要因素。活性氧广泛参与衰老信号传递,同样在花朵衰老过程中起到关键作用。然而,乙烯到活性氧之间的信号传递途径尚不明确。筛选和鉴定响应乙烯并调控活性氧水平的转录因子,成为解析乙烯调控月季花朵衰老分子机理的一个重要课题。我们在前人的月季花瓣乙烯响应基因表达谱的基础上,通过芯片数据分析、半定量PCR和荧光定量PCR检测,筛选出了响应乙烯并在月季花朵衰老过程中表达变化明显的基因7个。在普通烟草中进行过表达实验,结果表明,和转基因空载相比,编号为RU03393和RU03429两个基因过表达后,导致SOD酶活性显著下降。利用病毒诱导的基因沉默（VIGS）技术在月季花瓣中进行了RU03393和RU03429的基因沉默实验,根据花瓣表型观察和SOD酶活性、离子渗透率、可溶性蛋白含量等生理指标测定,表明沉默RU03393和RU03429都延缓了月季花瓣的衰老。而在月季花瓣中过表达RU03393和RU03429则明显加快了月季花瓣的衰老。相关研究结果初步了解乙烯-转录因子-抗氧化酶之间的信号传递机制,为解析乙烯对月季花朵衰老的调控机理奠定一定基础。 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1月季花瓣内响应乙烯明显的基因表达谱

Ｆｉｇ．２?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｃｈａｎｇｅ?ｏｆ?ｃａｎｄｉｄａｔｅ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｆａｃｔｏｒ?ｉｎ?Ｃｈｉｎｅｓｅ?ｒｏｓｅ?ｐｅｔａｌｓ??３．３候选转录因子基因在月季花朵衰老过程中的表达分析??取正常开放的月季花朵０－６级，采用热硼酸法提取花瓣总ＲＮＡ，并逆转录??得到ｃＤＮＡ模板。前期筛选的１２个候选转录因子基因，除去未克隆出来的和课题组??其他成员在做的，只剩下ＲＵ０３３９３、ＲＵ０３４２９和ＲＵ４９７７８，后期再根据前人的月季??花瓣内响应乙烯的基因表达谱数据，筛选出了?４个未知类型但乙烯处理后表达明显??上调的转录因子ＲＵ０６８２９、ＲＵ００８９３、ＲＵ２３３１０和ＲＵ２５５０４。根据候选转录因子基??因全长设计引物，以ＲｈＡｃｔｉｎ５为内参基因，以开放级数０级的花瓣为对照，进行荧??光定量ＰＣＲ，检测候选基因在月季花朵衰老过程中的表达变化。??

游为Ｋｐｎｌ）为引物组合，用高保真酶扩增出候选转录因子基因的ｃＤＮＡ全长片段。??回收纯化后，使用限制性内切酶Ｓｗａｌ、Ｋｐｎｌ分别双酶切回收片段和植物双元表达??载体Ｓｕｐｅｒｌ３００?（载体图如图４）。酶切回收后用Ｔ４连接酶连接，并通过热激法转??入大肠杆菌Ｔｒａｎｓ５ａ感受态细胞中，进行ＰＣＲ检测以及测序鉴定得到过表达载体质??粒。??一??——参思??—Ｔ????Ｔ?？〇ｒｔｆ＞ｒ?｜ｎｇＮ）??ｐＣＡｉ？Ａ１３００＊?｜Ｔ?？??＝遇?一－ｆ??一?，，??ＪＴ?Ｔ??ｐｔ？Ｕ２ｂ〇ｍ??图４过表达载体ｓｕｐｅｒｌ３００载体图??Ｆｉｇ．４?Ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｓｕｐｅｒ?１３００??３４??

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本文编号：3242572