蜡梅类黄酮3’-羟化酶基因（CpF3’H）及其启动子功能初探
发布时间：2021-06-24 10:09
蜡梅（Chimonanthus praecox（L.）Link）,以其香气沁人心脾,花覆蜡质而闻明,是我国特有的冬季开花的木本植物。但蜡梅花色主要为黄色,有些品种花内被片可呈现程度不同的红色,在蜡梅的生产和研究中,探究蜡梅花色的成因及差异成为亟待解决的问题。本研究以华中农业大学中红心蜡梅29号（H29）为研究材料,通过应用H29转录组文库数据,分析筛选出在蜡梅花色代谢通路中起关键作用的类黄酮3’-羟化酶（flavonoid 3’-hydroxylase,F3’H）,克隆得到红心蜡梅F3’H基因的全长,并命名为CpF3’H。同源重组法构建pCAMBIA1302CpF3’H表达载体,通过农杆菌花序浸蘸法导入拟南芥F3’H缺失突变体N799662中进行功能验证。同时,通过对不同器官及花色相关的不同时期做实时定量（qRT-PCR）表达分析来探究该基因在蜡梅中的表达模式。此外,通过FPNI-PCR和Takara Genome Walking Kit克隆得到该基因的启动子片段,命名为CpF3’HP,生物信息学分析表明该序列具有典型的启动子顺式组件,通过分析启动子部分的顺式作用组件来进一步分析该基因...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物花青素合成途径Fig.1Anthocyaninbiosynthesispathwayinplants.
蜡梅类黄酮类花色合成代谢途径Fig.2FlavonoidbiosynthesispathwayinChimonanthuspraecox(L.)Link
(1) 实验材料：华农校园内H29红心蜡梅，选取蜡梅的不同组织器官根，茎，叶，花朵，果实5个部分，花色变化的三个时期(未转色花芽，转色花芽，盛花花朵)和蜡梅的中被片，内被片(如图3)。(2) 实验试剂：TAKARA公司的SYBR Premix EX Taq(Perfect Real time染料法实时荧光定量试剂盒。(3) 实验仪器：美国ABI生物公司的7500 Fast Real-time RCR System其他所需试剂、仪器同前。2.2.2 实验方法(1) 分别提取蜡梅的根，茎，叶，花，果不同组织器官和与花色相关的不同时期及部位(未转色的花芽，转色的花芽，花朵以及花朵的中被片和内被片如图3)的RNA，每个时期样品设置三个生物学重复，分别反转录成cDNA，反转录试剂盒购于TAKARA公司。cDNA存放于-20℃冰箱备用。(2) Real time qPCR(qRTPCR)① 根据CpF3'H基因非保守结构区域设计qRTPCR引物(表2)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]启动子的类型及应用[J]. 贺飞燕,闫建俊,白云凤,冯瑞云,施俊凤. 山西农业科学. 2017(01)
[2]滁菊f3’h基因启动子的克隆及分析[J]. 赵维萍,陆李昌,刘洋,徐媛媛,翟璐,蔡华. 华北农学报. 2016(S1)
[3]低温对牡丹切花花色和花青素苷合成的影响[J]. 杜丹妮,张超,高树林,董丽. 植物遗传资源学报. 2016(02)
[4]蜡梅园林应用的优势与前景[J]. 徐少锋,赵欣. 农业科技与信息(现代园林). 2015(09)
[5]芜菁类黄酮3’-羟化酶基因的功能鉴定及启动子初步分析[J]. 许志茹,马静,崔国新,刘通,刘关君. 植物研究. 2015(04)
[6]真核启动子研究进展[J]. 汤方,涂慧珍. 林业科技开发. 2015(02)
[7]NAA、乙烯和6-BA对苹果坐果和13C、15N分配利用的影响[J]. 安欣,丰艳广,任饴华,姜翰,姜远茂. 园艺学报. 2015(03)
[8]乙烯对蜡梅切花开放衰老及乙烯受体基因表达的影响[J]. 罗江会,马婧,刘道凤,杨建峰,门维婷,万超,眭顺照,李名扬. 植物生理学报. 2015(02)
[9]植物启动子研究进展[J]. 李田,孙景宽,刘京涛. 生物技术通报. 2015(02)
[10]蜡梅SAMT基因在烟草中的遗传转化及其功能分析[J]. 庞宏东,向林,赵凯歌,李响,杨楠,陈龙清. 北京林业大学学报. 2014(05)
博士论文
[1]PttKN1基因在矮牵牛和拟南芥中的遗传转化及其功能分析[D]. 胡鑫.兰州大学 2007
硕士论文
[1]两个蜡梅花色相关bHLH类转录因子的克隆与功能初探[D]. 宋晓惜.华中农业大学 2015
[2]蜡梅花挥发物组分测定及芳樟醇合成酶启动子分析[D]. 李莹莹.华中农业大学 2015
[3]蜡梅查尔酮合成酶基因（CHS）启动子及相关转录因子的克隆与功能分析[D]. 方子义.华中农业大学 2014
[4]蜡梅MYB抗逆转录因子和其他相关基因的克隆及功能初探[D]. 任海龙.华中农业大学 2013
本文编号：3246892
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物花青素合成途径Fig.1Anthocyaninbiosynthesispathwayinplants.
蜡梅类黄酮类花色合成代谢途径Fig.2FlavonoidbiosynthesispathwayinChimonanthuspraecox(L.)Link
(1) 实验材料：华农校园内H29红心蜡梅，选取蜡梅的不同组织器官根，茎，叶，花朵，果实5个部分，花色变化的三个时期(未转色花芽，转色花芽，盛花花朵)和蜡梅的中被片，内被片(如图3)。(2) 实验试剂：TAKARA公司的SYBR Premix EX Taq(Perfect Real time染料法实时荧光定量试剂盒。(3) 实验仪器：美国ABI生物公司的7500 Fast Real-time RCR System其他所需试剂、仪器同前。2.2.2 实验方法(1) 分别提取蜡梅的根，茎，叶，花，果不同组织器官和与花色相关的不同时期及部位(未转色的花芽，转色的花芽，花朵以及花朵的中被片和内被片如图3)的RNA，每个时期样品设置三个生物学重复，分别反转录成cDNA，反转录试剂盒购于TAKARA公司。cDNA存放于-20℃冰箱备用。(2) Real time qPCR(qRTPCR)① 根据CpF3'H基因非保守结构区域设计qRTPCR引物(表2)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]启动子的类型及应用[J]. 贺飞燕,闫建俊,白云凤,冯瑞云,施俊凤. 山西农业科学. 2017(01)
[2]滁菊f3’h基因启动子的克隆及分析[J]. 赵维萍,陆李昌,刘洋,徐媛媛,翟璐,蔡华. 华北农学报. 2016(S1)
[3]低温对牡丹切花花色和花青素苷合成的影响[J]. 杜丹妮,张超,高树林,董丽. 植物遗传资源学报. 2016(02)
[4]蜡梅园林应用的优势与前景[J]. 徐少锋,赵欣. 农业科技与信息(现代园林). 2015(09)
[5]芜菁类黄酮3’-羟化酶基因的功能鉴定及启动子初步分析[J]. 许志茹,马静,崔国新,刘通,刘关君. 植物研究. 2015(04)
[6]真核启动子研究进展[J]. 汤方,涂慧珍. 林业科技开发. 2015(02)
[7]NAA、乙烯和6-BA对苹果坐果和13C、15N分配利用的影响[J]. 安欣,丰艳广,任饴华,姜翰,姜远茂. 园艺学报. 2015(03)
[8]乙烯对蜡梅切花开放衰老及乙烯受体基因表达的影响[J]. 罗江会,马婧,刘道凤,杨建峰,门维婷,万超,眭顺照,李名扬. 植物生理学报. 2015(02)
[9]植物启动子研究进展[J]. 李田,孙景宽,刘京涛. 生物技术通报. 2015(02)
[10]蜡梅SAMT基因在烟草中的遗传转化及其功能分析[J]. 庞宏东,向林,赵凯歌,李响,杨楠,陈龙清. 北京林业大学学报. 2014(05)
博士论文
[1]PttKN1基因在矮牵牛和拟南芥中的遗传转化及其功能分析[D]. 胡鑫.兰州大学 2007
硕士论文
[1]两个蜡梅花色相关bHLH类转录因子的克隆与功能初探[D]. 宋晓惜.华中农业大学 2015
[2]蜡梅花挥发物组分测定及芳樟醇合成酶启动子分析[D]. 李莹莹.华中农业大学 2015
[3]蜡梅查尔酮合成酶基因（CHS）启动子及相关转录因子的克隆与功能分析[D]. 方子义.华中农业大学 2014
[4]蜡梅MYB抗逆转录因子和其他相关基因的克隆及功能初探[D]. 任海龙.华中农业大学 2013
本文编号：3246892
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