苹果小吉丁虫微卫星标记的开发及其遗传多样性

发布时间：2021-06-26 06:27

　　新疆苹果野果林是我国宝贵的种质基因库,已被列为中国具有生物多样性国际意义的优先保护物种及国家II级濒危保护植物。苹果小吉丁虫Agrilus mali Matsumura入侵到新疆以后,造成新疆野果林大量的野苹果树枯死,使野苹果林面临着毁灭的威胁。该虫在新疆也严重危害栽培苹果,影响当地人民的经济收入。因此,开展苹果小吉丁虫相关研究工作迫在眉睫。本研究利用磁珠富集法开发了7对能够稳定扩增且多态性较好的微卫星引物,并结合线粒体COI标记和微卫星标记,分析了采自新疆野果林的7个苹果小吉丁虫种群和采自辽宁的1个苹果小吉丁虫种群的遗传多样性,研究结果对于进一步阐明苹果小吉丁虫入侵到新疆后的种群扩张与暴发机制,以及制定符合新疆野果林种群遗传结构特点的综合治理策略具有重要的指导意义。主要研究结果如下:1.本研究采用磁珠富集法开发苹果小吉丁虫的微卫星引物,构建了苹果小吉丁虫微卫星文库。经测序后共获得含有微卫星重复单元的克隆248个,阳性克隆率为82.6%。除探针使用的AC、AG重复外,还得到了CT、ATCA和TCGT的重复序列,重复次数主要集中在16²0左右。本研究得到的248个苹... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 研究背景
        1.1.1 新疆伊犁河谷概述
        1.1.2 新疆野苹果林概述
    1.2 苹果小吉丁虫概述
        1.2.1 苹果小吉丁虫的分类地位及形态特征
        1.2.2 苹果小吉丁虫的生物学特性
        1.2.3 苹果小吉丁虫的分布和危害
        1.2.4 苹果小吉丁虫防治技术进展
    1.3 种群遗传学相关概念
        1.3.1 种群和种群遗传学的概念
        1.3.2 遗传多样性的概念
        1.3.3 种群遗传结构的概念
        1.3.4 哈迪温伯格平衡定律
        1.3.5 中性突变理论的内容
    1.4 影响种群遗传变异的因素
        1.4.1 遗传漂变和瓶颈效应
        1.4.2 基因流
        1.4.3 繁殖方式
        1.4.4 种群分化
    1.5 生物入侵和入侵生物学的概念
    1.6 入侵生物的种群遗传学研究
    1.7 分子标记技术种类及特点
        1.7.1 限制性片段长度多态性（RFLP）
        1.7.2 扩增长度片段多态性（AFLP）
        1.7.3 随机片段长度多态性（RAPD）
        1.7.4 线粒体基因标记
        1.7.5 微卫星标记（SSR）标记
    1.8 本研究的目的和意义
第二章 磁珠富集法构建苹果小吉丁虫微卫星文库
    2.1 实验材料
        2.1.1 试虫采集
        2.1.2 实验仪器和试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 试虫样本的预处理
        2.2.2 基因组DNA的提取
        2.2.3 苹果小吉丁虫基因组DNA质量及纯度检测
        2.2.4 基因组DNA酶切和回收
        2.2.5 接头的制备及探针的合成
        2.2.6 接头的连接和连接产物的扩增
        2.2.7 微卫星片段的富集及扩增
        2.2.8 微卫星文库的构建及阳性克隆筛选
        2.2.9 微卫星引物的设计及筛选
    2.3 结果与分析
        2.3.1 基因组DNA的提取及酶切结果
        2.3.2 磁珠杂交洗脱后富集片段的扩增结果
        2.3.3 微卫星文库的构建及阳性克隆筛选结果
        2.3.4 微卫星引物的设计及筛选结果
    2.4 结论与讨论
第三章 基于微卫星标记的苹果小吉丁虫种群遗传多样性
    3.1 实验材料
        3.1.1 试虫的采集和保存
        3.1.2 实验仪器与试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 样本预处理
        3.2.2 苹果小吉丁虫基因组DNA的提取
        3.2.3 基因组DNA质量及纯度检测
        3.2.4 微卫星位点的选取
        3.2.5 数据分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 基因组DNA的提取与检测
        3.3.2 PCR扩增结果
        3.3.3 微卫星数据分析结果
        3.3.4 苹果小吉丁虫种群遗传分化数据结果分析
    3.4 讨论
第四章 基于线粒体COI基因的苹果小吉丁虫种群结构研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 试虫采集
        4.1.2 主要试剂与仪器
        4.1.3 常用试剂的配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 试虫样本的预处理
        4.2.2 苹果小吉丁虫基因组DNA的提取
        4.2.3 苹果小吉丁虫基因组DNA质量及纯度检测
        4.2.4 线粒体引物的合成及目的片段扩增
        4.2.5 数据处理与分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 苹果小吉丁虫线粒体基因的PCR扩增
        4.3.2 苹果小吉丁虫COI基因序列变异分析
        4.3.3 苹果小吉丁虫COI基因遗传多样性分析
        4.3.4 苹果小吉丁虫种群遗传分化分析
        4.3.5 苹果小吉丁虫COI基因分子方差分析
        4.3.6 讨论
第五章 全文总结
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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[10]内蒙古亚洲小车蝗种群遗传多样性的微卫星分析[J]. 韩海斌,周晓榕,庞保平,张敏哲,李海平.  昆虫学报. 2013(01)

博士论文
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[2]新疆野苹果林苹小吉丁生物防治技术研究[D]. 王智勇.中国林业科学研究院 2013
[3]基于微卫星分子标记的中国疫区内苹果蠹蛾Cydia pomonella（L.）种群遗传多样性和遗传结构研究[D]. 门秋雷.西北农林科技大学 2012



本文编号：3250816