苹果两个WRKY转录因子的克隆和表达分析
发布时间：2021-07-09 17:45
作为植物中最大的转录因子家族之一,WRKY转录因子广泛参与植物生长发育、衰老、物质代谢和抗逆反应等多种生物进程,是调控植物多种生命进程不可或缺的一部分。其作为寄主-病原物互作中一个重要的转录调控子,是植物防卫反应信号传递网络的重要组成部分,通过正调控和负调控的协同作用,能够使植物的抗病能力广谱持久。本文通过生物信息学方法,共分析鉴定了苹果基因组上132个WRKY基因,对其基因结构和分类进行了详细的研究;选取了其中一些基因做组织表达分析;克隆了两个苹果WRKY基因,对其应对逆境胁迫响应进行了研究,并初步预测了其生物功能,具体结果如下:1.苹果WRKY转录因子分为I、II和III类型,分别有24、79和29个成员,其锌指结构类型分别为CX4CX22-23HXH、CX4-5CX23HXH和CX7CX23–24HXC,II组可进一步分为II-a、II-b、II-c、II-d和II-e亚组,分别有8、12、31、14和14个成员。苹果WRKY基因不均匀分布于17条染色体中,分布最多的有13个,最少的有4个。WRKY结构域相对高度保守,绝大多数都含有WRKYGQK七肽和锌指结构。MdWRKY基因结...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 WRKY基因的一般特性
1.1.1 WRKY基因的分布
1.1.2 WRKY基因的结构
1.1.3 WRKY基因的分类
1.1.4 WRKY基因的起源和进化
1.2 WRKY基因的研究进展及生物学功能
1.2.1 植物WRKY基因的研究进展
1.2.2 WRKY基因家族参与植物生物胁迫应答过程
1.2.3 WRKY基因家族参与植物非生物胁迫应答过程
1.2.4 WRKY基因家族参与植物生长发育过程
1.2.5 WRKY基因家族参与植物物质代谢过程
1.2.6 WRKY基因家族参与植物信号网络调控
1.3 本研究的目的意义
第二章 材料和方法
2.1 试验材料
2.1.1 植物组织材料
2.1.2 菌株与载体
2.1.3 酶、生化试剂与试剂盒
2.1.4 主要药品、培养基与试剂配制
2.1.5 主要仪器与设备
2.1.6 PCR引物合成与测序
2.2 试验方法
2.2.1 植物材料的来源
2.2.2 植物材料的处理
2.2.3 植物总RNA的提取
2.2.4 反转录cDNA第一链的合成
2.2.5 Real Time RT-PCR反转录
2.2.6 PCR扩增
2.2.7 实时荧光定量PCR
2.2.8 目的DNA片段的回收
2.2.9 PMDTM18-T连接反应
2.2.10 大肠杆菌感受态细胞的转化与筛选
2.2.11 农杆菌的转化及筛选
2.2.12 质粒DNA的提取
2.2.13 质粒DNA的酶切鉴定
2.2.14 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因表达载体构建
第三章 结果与分析
3.1 苹果WRKY基因家族的生物信息学分析
3.1.1 苹果WRKY基因序列鉴定
3.1.3 苹果WRKY基因进化树分析
3.1.4 苹果WRKY基因家族染色体定位分析
3.1.5 苹果WRKY基因家族保守元件分析
3.1.6 苹果WRKY基因家族内含子与外显子分析
3.2 苹果WRKY基因表达分析
3.3 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因克隆、序列分析、表达分析及转基因功能鉴定
3.3.1 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因克隆
3.3.2 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因序列同源性分析
3.3.3 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因序列进化树分析
3.3.4 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因结构分析
3.3.5 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因受诱导表达分析
3.3.6 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因受炭疽叶枯病菌诱导表达分析
3.3.7 苹果MdWRKY5和MdWRKY54转基因功能鉴定
第四章 讨论
1.苹果WRKY基因家族生物信息学分析
2.苹果WRKY基因家族广泛参与植物各种生长发育过程
3.苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因响应多种非生物胁迫
4.苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因响应苹果炭疽叶枯病菌诱导
第五章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]桃WRKY基因家族全基因组鉴定和表达分析[J]. 谷彦冰,冀志蕊,迟福梅,乔壮,徐成楠,张俊祥,周宗山,董庆龙. 遗传. 2016(03)
[2]主要果树果实品质遗传改良与提升实践[J]. 陈学森,郭文武,徐娟,丛佩华,王力荣,刘崇怀,李秀根,吴树敬,姚玉新,陈晓流. 中国农业科学. 2015(17)
[3]苹果WRKY基因家族生物信息学及表达分析[J]. 谷彦冰,冀志蕊,迟福梅,乔壮,徐成楠,张俊祥,董庆龙,周宗山. 中国农业科学. 2015(16)
[4]8个WRKY转录因子在水稻叶片生长和抗病过程中的表达分析[J]. 史佳楠,李莉云,徐文静,关明俐,李雪姣,牛东东,兰金苹,窦世娟,刘丽娟,刘国振. 植物病理学报. 2014(01)
[5]蒺藜苜蓿全基因组中WRKY转录因子的鉴定与分析[J]. 宋辉,南志标. 遗传. 2014(02)
[6]富士苹果MdWRKY40b基因克隆及其对白粉病的抗性分析[J]. 罗昌国,袁启凤,裴晓红,吴亚维,郑伟,章镇. 西北植物学报. 2013(12)
[7]蓖麻WRKY转录因子的全基因组鉴定及其进化分析[J]. 邹智. 中国油料作物学报. 2013(01)
[8]二穗短柄草WRKY基因家族成员的鉴定和分析[J]. 蒋明,尹龙飞,张志仙,余沁欣,罗礼礼. 麦类作物学报. 2012(06)
[9]苹果WRKY转录因子家族基因生物信息学分析[J]. 许瑞瑞,张世忠,曹慧,束怀瑞. 园艺学报. 2012(10)
[10]Gene Network Analysis and Functional Studies of Senescence-associated Genes Reveal Novel Regulators of Arabidopsis Leaf Senescence[J]. Zhonghai Li, Jinying Peng, Xing Wen and Hongwei Guo State Key Laboratory of Protein and Plant Gene Research, College of Life Sciences, Peking University, Peking-Tsinghua Center for Life Sciences, Beijing 100871, China. Journal of Integrative Plant Biology. 2012(08)
硕士论文
[1]两个苹果液泡膜质子泵基因H+-PPase和H+-ATPase subunit A的抗逆功能鉴定[D]. 董庆龙.山东农业大学 2012
本文编号：3274194
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 WRKY基因的一般特性
1.1.1 WRKY基因的分布
1.1.2 WRKY基因的结构
1.1.3 WRKY基因的分类
1.1.4 WRKY基因的起源和进化
1.2 WRKY基因的研究进展及生物学功能
1.2.1 植物WRKY基因的研究进展
1.2.2 WRKY基因家族参与植物生物胁迫应答过程
1.2.3 WRKY基因家族参与植物非生物胁迫应答过程
1.2.4 WRKY基因家族参与植物生长发育过程
1.2.5 WRKY基因家族参与植物物质代谢过程
1.2.6 WRKY基因家族参与植物信号网络调控
1.3 本研究的目的意义
第二章 材料和方法
2.1 试验材料
2.1.1 植物组织材料
2.1.2 菌株与载体
2.1.3 酶、生化试剂与试剂盒
2.1.4 主要药品、培养基与试剂配制
2.1.5 主要仪器与设备
2.1.6 PCR引物合成与测序
2.2 试验方法
2.2.1 植物材料的来源
2.2.2 植物材料的处理
2.2.3 植物总RNA的提取
2.2.4 反转录cDNA第一链的合成
2.2.5 Real Time RT-PCR反转录
2.2.6 PCR扩增
2.2.7 实时荧光定量PCR
2.2.8 目的DNA片段的回收
2.2.9 PMDTM18-T连接反应
2.2.10 大肠杆菌感受态细胞的转化与筛选
2.2.11 农杆菌的转化及筛选
2.2.12 质粒DNA的提取
2.2.13 质粒DNA的酶切鉴定
2.2.14 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因表达载体构建
第三章 结果与分析
3.1 苹果WRKY基因家族的生物信息学分析
3.1.1 苹果WRKY基因序列鉴定
3.1.3 苹果WRKY基因进化树分析
3.1.4 苹果WRKY基因家族染色体定位分析
3.1.5 苹果WRKY基因家族保守元件分析
3.1.6 苹果WRKY基因家族内含子与外显子分析
3.2 苹果WRKY基因表达分析
3.3 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因克隆、序列分析、表达分析及转基因功能鉴定
3.3.1 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因克隆
3.3.2 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因序列同源性分析
3.3.3 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因序列进化树分析
3.3.4 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因结构分析
3.3.5 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因受诱导表达分析
3.3.6 苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因受炭疽叶枯病菌诱导表达分析
3.3.7 苹果MdWRKY5和MdWRKY54转基因功能鉴定
第四章 讨论
1.苹果WRKY基因家族生物信息学分析
2.苹果WRKY基因家族广泛参与植物各种生长发育过程
3.苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因响应多种非生物胁迫
4.苹果MdWRKY5和MdWRKY54基因响应苹果炭疽叶枯病菌诱导
第五章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]桃WRKY基因家族全基因组鉴定和表达分析[J]. 谷彦冰,冀志蕊,迟福梅,乔壮,徐成楠,张俊祥,周宗山,董庆龙. 遗传. 2016(03)
[2]主要果树果实品质遗传改良与提升实践[J]. 陈学森,郭文武,徐娟,丛佩华,王力荣,刘崇怀,李秀根,吴树敬,姚玉新,陈晓流. 中国农业科学. 2015(17)
[3]苹果WRKY基因家族生物信息学及表达分析[J]. 谷彦冰,冀志蕊,迟福梅,乔壮,徐成楠,张俊祥,董庆龙,周宗山. 中国农业科学. 2015(16)
[4]8个WRKY转录因子在水稻叶片生长和抗病过程中的表达分析[J]. 史佳楠,李莉云,徐文静,关明俐,李雪姣,牛东东,兰金苹,窦世娟,刘丽娟,刘国振. 植物病理学报. 2014(01)
[5]蒺藜苜蓿全基因组中WRKY转录因子的鉴定与分析[J]. 宋辉,南志标. 遗传. 2014(02)
[6]富士苹果MdWRKY40b基因克隆及其对白粉病的抗性分析[J]. 罗昌国,袁启凤,裴晓红,吴亚维,郑伟,章镇. 西北植物学报. 2013(12)
[7]蓖麻WRKY转录因子的全基因组鉴定及其进化分析[J]. 邹智. 中国油料作物学报. 2013(01)
[8]二穗短柄草WRKY基因家族成员的鉴定和分析[J]. 蒋明,尹龙飞,张志仙,余沁欣,罗礼礼. 麦类作物学报. 2012(06)
[9]苹果WRKY转录因子家族基因生物信息学分析[J]. 许瑞瑞,张世忠,曹慧,束怀瑞. 园艺学报. 2012(10)
[10]Gene Network Analysis and Functional Studies of Senescence-associated Genes Reveal Novel Regulators of Arabidopsis Leaf Senescence[J]. Zhonghai Li, Jinying Peng, Xing Wen and Hongwei Guo State Key Laboratory of Protein and Plant Gene Research, College of Life Sciences, Peking University, Peking-Tsinghua Center for Life Sciences, Beijing 100871, China. Journal of Integrative Plant Biology. 2012(08)
硕士论文
[1]两个苹果液泡膜质子泵基因H+-PPase和H+-ATPase subunit A的抗逆功能鉴定[D]. 董庆龙.山东农业大学 2012
本文编号：3274194
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3274194.html
