小金海棠柠檬酸合成酶基因MxCS2的克隆与功能分析
发布时间：2021-07-15 16:07
本研究以铁高效基因型苹果砧木小金海棠（Malus xiaojinensis Cheng et Jiang）为试材,以从中克隆得到一个新的柠檬酸合成酶基因（CS）为研究对象,利用已公布的苹果金冠全基因组序列图谱的柠檬酸合成酶基因序列保守区设计兼并引物,用Trizol法提取小金海棠的RNA,在逆转录酶的作用下反转录合成单链c DNA,通过巢式PCR扩增的方法获得小金海棠CS基因片段,区别于之前从小金海棠中克隆得到的Mx CS1基因,将该基因命名为Mx CS2。测序结果发现Mx CS2基因的开放阅读框全长为891bp,利用DNAMAN5.2软件将测序获得的核苷酸序列翻译为氨基酸序列,推测Mx CS2基因负责编码一个由296个氨基酸组成的蛋白质,预测其分子量约为33.2k Da,理论等电点为7.79。对Mx CS2蛋白的三维结构进行分析,该蛋白的功能结构域包含有三个α螺旋和三个无规则卷曲,亚细胞定位显示Mx CS2蛋白定位于线粒体和细胞质膜上。利用NCBI网站中的blast功能进行Mx CS2基因和其他物种的CS基因的氨基酸和核苷酸相似性分析,得到同源进化树,Mx CS2与Mx CS1和Pp ...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 铁元素的研究概况
1.1.1 微量元素的简介
1.1.2 铁元素的简介
1.1.3 植物吸收铁的两种机理的研究
1.1.4 铁吸收和转运相关基因的研究
1.2 柠檬酸合成酶的研究
1.3 小金海棠铁高效机理的研究
1.4 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.2.1 总RNA的提取
2.2.2 c DNA第一条链的合成
2.2.3 基因全长的获得
2.2.4 目的基因的电泳及纯化
2.2.5 目的基因的连接和转化
2.2.6 MxCS2基因的序列分析
2.2.7 MxCS2蛋白的亚细胞定位
2.2.8 MxCS2基因的实时荧光定量PCR分析
2.2.9 拟南芥转化试验
2.2.10 萌发与生长试验
2.2.11 相关生理指标的测定
3 结果与分析
3.1 MxCS2基因片段的克隆与表达分析
3.1.1 总RNA的提取
3.1.2 c DNA的合成
3.1.3 MxCS2基因全长的获得与分析
3.1.4 MxCS2蛋白的三维结构分析与亚细胞定位
3.2 MxCS2的功能性研究和分析
3.2.1 MxCS2基因的实时荧光定量PCR分析
3.2.2 转基因拟南芥T3代植株的鉴定分析
3.2.3 转基因拟南芥相关生理指标的测定
4 讨论
4.1 MxCS2基因的克隆与表达分析
4.2 转基因拟南芥对铁胁迫的反应及相关生理指标的测定
4.3 苹果属柠檬酸合成酶家族基因的比较
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]苹果属山定子柠檬酸合成酶基因（MbCS1）的克隆及表达分析[J]. 张柳霞,王忆,朱斌,王少甲,张新忠,许雪峰,韩振海. 农业生物技术学报. 2012(09)
[2]中国果树产业可持续发展战略研究[J]. 束怀瑞. 落叶果树. 2012(01)
[3]植物吸收和转运铁的分子生理机制研究进展[J]. 申红芸,熊宏春,郭笑彤,左元梅. 植物营养与肥料学报. 2011(06)
[4]有机酸在植物对重金属耐性和解毒机制中的作用[J]. 傅晓萍,豆长明,胡少平,陈新才,施积炎,陈英旭. 植物生态学报. 2010(11)
[5]植物吸收铁机理及其相关基因研究进展[J]. 李利敏,吴良欢,马国瑞. 土壤通报. 2010(04)
[6]柠檬酸合酶的分子生物学研究进展[J]. 葛亚东,潘蔚,汪劼,朱国萍. 生物学杂志. 2010(03)
[7]现代农业产业技术体系专家解析今年果树产业发展趋势[J]. 邓秀新,韩明玉,张绍铃,段长青,姜全,张锡炎,陈厚彬. 果农之友. 2010(05)
[8]高效液相色谱法测定葡萄酒中柠檬酸含量[J]. 张素娟. 食品工程. 2009(03)
[9]烟草柠檬酸合成酶基因的克隆及其光诱导型植物表达载体的构建[J]. 胡清泉,王奇峰,李昆志,陈丽梅,玉永雄. 草业学报. 2009(04)
[10]小金海棠S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因（MxSAMS）的克隆和表达分析[J]. 朱妍婕,孔瑾,王忆,许雪峰,刘丽丽,韩振海. 农业生物技术学报. 2009(01)
博士论文
[1]苹果再生体系建立与MxIrt1基因功能的初步研究[D]. 王忆.中国农业大学 2005
[2]缺铁胁迫下小金海棠根特异蛋白的表达鉴定及MxSAMS基因克隆[D]. 郭函子.中国农业大学 2005
[3]苹果铁高效基因型生物技术的研究——MxNrampl和MxIrtl基因的克隆[D]. 戚金亮.中国农业大学 2003
硕士论文
[1]小金海棠三价铁还原酶基因克隆与表达分析[D]. 张芸.中国农业大学 2005
本文编号：3286029
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 铁元素的研究概况
1.1.1 微量元素的简介
1.1.2 铁元素的简介
1.1.3 植物吸收铁的两种机理的研究
1.1.4 铁吸收和转运相关基因的研究
1.2 柠檬酸合成酶的研究
1.3 小金海棠铁高效机理的研究
1.4 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.2.1 总RNA的提取
2.2.2 c DNA第一条链的合成
2.2.3 基因全长的获得
2.2.4 目的基因的电泳及纯化
2.2.5 目的基因的连接和转化
2.2.6 MxCS2基因的序列分析
2.2.7 MxCS2蛋白的亚细胞定位
2.2.8 MxCS2基因的实时荧光定量PCR分析
2.2.9 拟南芥转化试验
2.2.10 萌发与生长试验
2.2.11 相关生理指标的测定
3 结果与分析
3.1 MxCS2基因片段的克隆与表达分析
3.1.1 总RNA的提取
3.1.2 c DNA的合成
3.1.3 MxCS2基因全长的获得与分析
3.1.4 MxCS2蛋白的三维结构分析与亚细胞定位
3.2 MxCS2的功能性研究和分析
3.2.1 MxCS2基因的实时荧光定量PCR分析
3.2.2 转基因拟南芥T3代植株的鉴定分析
3.2.3 转基因拟南芥相关生理指标的测定
4 讨论
4.1 MxCS2基因的克隆与表达分析
4.2 转基因拟南芥对铁胁迫的反应及相关生理指标的测定
4.3 苹果属柠檬酸合成酶家族基因的比较
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]苹果属山定子柠檬酸合成酶基因（MbCS1）的克隆及表达分析[J]. 张柳霞,王忆,朱斌,王少甲,张新忠,许雪峰,韩振海. 农业生物技术学报. 2012(09)
[2]中国果树产业可持续发展战略研究[J]. 束怀瑞. 落叶果树. 2012(01)
[3]植物吸收和转运铁的分子生理机制研究进展[J]. 申红芸,熊宏春,郭笑彤,左元梅. 植物营养与肥料学报. 2011(06)
[4]有机酸在植物对重金属耐性和解毒机制中的作用[J]. 傅晓萍,豆长明,胡少平,陈新才,施积炎,陈英旭. 植物生态学报. 2010(11)
[5]植物吸收铁机理及其相关基因研究进展[J]. 李利敏,吴良欢,马国瑞. 土壤通报. 2010(04)
[6]柠檬酸合酶的分子生物学研究进展[J]. 葛亚东,潘蔚,汪劼,朱国萍. 生物学杂志. 2010(03)
[7]现代农业产业技术体系专家解析今年果树产业发展趋势[J]. 邓秀新,韩明玉,张绍铃,段长青,姜全,张锡炎,陈厚彬. 果农之友. 2010(05)
[8]高效液相色谱法测定葡萄酒中柠檬酸含量[J]. 张素娟. 食品工程. 2009(03)
[9]烟草柠檬酸合成酶基因的克隆及其光诱导型植物表达载体的构建[J]. 胡清泉,王奇峰,李昆志,陈丽梅,玉永雄. 草业学报. 2009(04)
[10]小金海棠S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因（MxSAMS）的克隆和表达分析[J]. 朱妍婕,孔瑾,王忆,许雪峰,刘丽丽,韩振海. 农业生物技术学报. 2009(01)
博士论文
[1]苹果再生体系建立与MxIrt1基因功能的初步研究[D]. 王忆.中国农业大学 2005
[2]缺铁胁迫下小金海棠根特异蛋白的表达鉴定及MxSAMS基因克隆[D]. 郭函子.中国农业大学 2005
[3]苹果铁高效基因型生物技术的研究——MxNrampl和MxIrtl基因的克隆[D]. 戚金亮.中国农业大学 2003
硕士论文
[1]小金海棠三价铁还原酶基因克隆与表达分析[D]. 张芸.中国农业大学 2005
本文编号：3286029
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3286029.html
