糙皮侧耳产孢相关基因stpo1的克隆及表达分析

发布时间：2021-07-30 16:17

　　糙皮侧耳（P.ostreatus）是我国栽培量最广、消费量最大的食用菌。糙皮侧耳子实体成熟过程中会弹射大量孢子,数量巨大的孢子不仅会降低子实体的品质,还会引起菇农的“蘑菇肺”。选育无孢糙皮侧耳菌株对解决孢子引起的过敏反应具有重要作用。本文将肺形侧耳（Pleurotus pulmonarius）产孢相关基因stpp1的基因序列,与糙皮侧耳转录组数据库进行比对,得到糙皮侧耳中与其同源的基因,并将获得的基因命名为stpo1。通过反转录PCR（RT-PCR）的方法,克隆得到了stpo1的CDS全长序列;对目的基因进行了生物信息学分析;在转录水平对stpo1进行表达模式分析;利用pEASY-E2原核表达系统对stpo1进行原核表达;构建了糙皮侧耳stpo1过表达以及RNA干扰表达载体,以期通过对stpo1基因过表达或者沉默来研究stpo1基因与糙皮侧耳孢子形成的关系。本文主要研究结果如下:1、以糙皮侧耳子实体为材料,采用反转录PCR技术克隆出糙皮侧耳产孢相关基因stpo1的CDS区（长度为2,556 bp）;并以基因组为模板克隆出该基因的gDNA（长度为3,853 bp）。Genbank登录号为... 

【文章来源】：河南农业大学河南省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

stpp1与PC9v1.0、PC15v2.0同源基因Clustal比对结果

15图3.2stpp1cDNA、PC9v1.0同源基因、PC15v2.0同源基因NCBIBlast结果Fig.3.2NCBIBlastofstpp1cDNA、PC9v1.0cDNA、PC15v2.0cDNA图3.3肺形侧耳stpp1与糙皮侧耳转录组比对结果，蓝框为选取部分Fig.3.3Blastofstpp1andP.ostreatustranscripts，bluepartasselected3.2.1.3cDNA第一条链的合成利用反转录试剂盒反转录合成cDNA第一链，用作后续PCR扩增的模板。去除基因组DNA（冰上配制）：在处理过的无RNase的微管中加入以下试剂：gDNAEraser1.0μL5xgDNAEraserBuffer2.0μLTotalRNA不超过1μgRNaseFreeH2O补足至10μL短暂离心，在42℃下孵育2min；cDNA第一条链的合成（冰上操作）：去基因组反应液10μLPrimeScriptRTEnzymeMixI1.0μLRTPrimerMix1.0μL5xPrimeScriptBuffer24μLRNaseFreeH2O4μL37℃孵育15min，85℃5s终止反应，迅速放回冰上，-20℃储存少于一周，长期保存应置于-80℃。3.2.4糙皮侧耳stpo1基因部分片段的扩增基因片段PCR扩增反应体系为：

肺形侧耳stpp1与糙皮侧耳转录组比对结果，蓝框为选取部分

【参考文献】：
期刊论文
[1]担子菌孢子缺失菌株相关研究进展[J]. 何莹莹,陈卫民,周德群,赵永昌.  食用菌学报. 2013(01)
[2]野生粗柄侧耳的生物学特性及其人工栽培[J]. 于富强,肖月芹,刘培贵.  食用菌学报. 2005(03)
[3]平菇新品种——秀珍菇的特征特性[J]. 张金霞,黄晨阳,郑素月.  中国食用菌. 2005(04)
[4]根癌农杆菌介导真菌遗传转化的研究进展[J]. 方卫国,张永军,杨星勇,裴炎.  中国生物工程杂志. 2002(05)
[5]平菇山大1号紫外诱变育种研究[J]. 李德舜,刘正学,张英,张长铠.  食用菌. 2002(03)
[6]原生质体诱变选育无孢平菇[J]. 朱宝成,王俊刚,燕克勤,李庆余,王谦.  遗传. 1994(02)



本文编号：3311725