BBTV对香蕉叶绿体形态及叶绿体基因组的影响
发布时间：2021-08-10 16:03
香蕉束顶病毒（Banana bunchy top virus,BBTV）引起的束顶病是香蕉上的一种重要病毒病,香蕉束顶病最早于1889年在斐济发现,后陆续在其他国家和地区被发现。20世纪,该病威胁着全世界25%香蕉产区的生产,主要包括亚洲、非洲和南太平洋地区,成为香蕉上重要的毁灭性病害之一。香蕉病毒病是导致香蕉病害的重要原因,为了正确认识并有效防控病毒病的发生,本文采用了电子透射显微镜技术和分子生物学技术对病毒对植物叶绿体的影响进行了研究。本研究通过超薄切片电镜观察技术对感染BBTV以及健康对照组香蕉叶柄的超微结构进行比较分析,希望对植物病毒侵染寄主的研究有一定的推动作用。另外,通过分子生物学检测方法对香蕉进行检测,分别获得感染BBTV香蕉叶片以及健康香蕉叶片的叶绿体基因组序列。之后通过软件对两组全基因组序列进行数据分析以及基因注释,了解感病后香蕉叶绿体基因的变化。此外,本实验还通过荧光定量PCR的相对定量对感染BBTV香蕉叶片以及健康香蕉叶片的叶绿体基因组拷贝数进行测定。这对今后BBTV对香蕉植株的影响研究奠定了基础。本研究结果表明,电镜下可明显看出:与完整的叶绿体形态形成鲜明的对比...
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１感染ＢＢＴＶ香蕉植株的外部病症．（庄军，２０１５）??Ａ，感病香蕉叶柄部“青筋”；Ｂ，健康香蕉叶柄部；Ｃ，生长滞缓感病株．??
?福建农林大学硕士专业学位论文???图１－２?ＬＳＶ感染百合的典型症状．（徐品三等，２０１４）??Ａ，健康百合叶绿体；Ｂ，感病百合叶绿体??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｔｙｐｉｃａｌ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?ＬＳＶ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｌｉｌｙ??Ａ，?Ｈｅａｌｔｈｙ?ｌｉｌｙ?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ．；Ｂ，Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ?ｌｉｌｙ?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ．??１．３实时荧光定量ＰＣＲ技术及其应用??１．３．１荧光定量ＰＣＲ原理??实时荧光定量ＰＣＲ技术简单的来讲就是在定量ＰＣＲ的基础上，将可见的??荧光基团加入扩增的反应体系之中，然后通过实时监测扩增过程，每收集到一个??焚光信号即表７Ｆ经过了一个循环过程。根据这个原理，在ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ结束之??后，可以获得对应的荧光扩增曲线，然后根据这条曲线可以对实验未知样本进行??定量分析。??在一般情况下，在ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ－ＰＣＲ中的扩增曲线主要包括三个重要时期：一??是荧光背景信号期，二是荧光信号指数增长期，三是荧光信号平台期（邵勤等，??２０１３）。在第一时期，扩增的荧光信号被掩盖，无法判断出目的基因产物量的实??时变化；在第二时期，可以很明显的看出扩増产物呈指数增长模式；在第三个时??期，产物停止增长。在扩增曲线中，ＰＣＲ的产物量只与第二时期的增长有线性??关系，即只有在荧光信号指数扩增的时期，产物量的对数值与起始模板量有线性??关系。因此，所谓的荧光定量ＰＣＲ分析主要是对指数增长阶段进行分析。??在实时荧光定量ＰＣＲ技术中，扩增产物的荧光信号超过所设定的阈值时所??经过的扩增循环次数被称为ＣＴ值。国内外研宄表明，在ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?Ｐ
?福建农林大学硕士专业学位论文???２．２结果与分析??ｍｍ?＞?＇．：??ｗ＾－?ｍ－??图２－１叶绿体电镜图．??Ａ，健康香蕉叶柄叶绿体；Ｂ，感染ＢＢＴＶ香蕉叶柄叶绿体．??Ｆｉｇ．２－１?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｇｒａｐｈ．??Ａ，?Ｐｅｔｉｏｌｅ?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ?ｏｆ?ｈｅａｌｔｈｙ?ｂａｎａｎａ?；??Ｂ，?Ｐｅｔｉｏｌｅ?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ?ｏｆ?ｂａｎａｎａ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＢＢＴＶ．??在超薄透射电镜下观察到：Ｂ图中感染ＢＢＴＶ的香蕉叶柄叶绿体外膜严重受??损（黑色箭头）、叶绿体内部呈现空泡化（白色箭头）、基粒片层膨胀，叶绿体??基质排列稀疏，与Ａ图中呈现梭形完整的叶绿体形态形成鲜明的对比，得出结??论，ＢＢＴＶ侵染香蕉后其叶柄叶绿体的形态发现明显变化。??１５??
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于454 GS FLX高通量测序的四川山鹧鸪基因组微卫星特征分析[J]. 黄杰,周瑜,刘与之,朱丹,宋旭颢,陈本平,张修月,岳碧松. 四川动物. 2015(01)
[2]甘蓝枯萎病菌1号和2号生理小种的快速检测与鉴定[J]. 张吉祥,凌键,谢丙炎,杨宇红. 植物病理学报. 2014(06)
[3]百合无症病毒对百合光合生理、酶活性及叶绿体超微结构的影响[J]. 徐品三,贾娟,孙冰轮,姜旭. 植物病理学报. 2014(04)
[4]薄皮甜瓜叶色黄化突变体的农艺性状调查及红外光谱分析[J]. 邵勤,于泽源,李兴国,李为. 东北农业大学学报. 2013(07)
[5]苜蓿全基因组WRKY转录因子基因的分析[J]. 江腾,林勇祥,刘雪,江海洋,朱苏文. 草业学报. 2011(03)
[6]水稻氯离子通道蛋白基因的克隆及表达分析[J]. 康敏华,陈暖,杜喜玲,刘特,刘志学. 西北植物学报. 2011(04)
[7]荧光定量RT-PCR技术在评估肿瘤化疗敏感性中的应用进展[J]. 梁俊青,李碧丽,苏秀兰. 内蒙古医学院学报. 2010(03)
[8]基于高通量测序454 GS FLX的丹参转录组学研究[J]. 李滢,孙超,罗红梅,李西文,牛云云,陈士林. 药学学报. 2010(04)
[9]实时定量PCR技术研究DNA疫苗在小鼠体内的生物分布[J]. 付洁,李丁,夏绍友,宋海峰,董增祥,陈方,孙效,欧伦,汤仲明. 中国新药杂志. 2009(08)
[10]上海地区番茄黄化曲叶病毒病的鉴定及嫁接接种法研究[J]. 于力,朱龙英,万延慧,杨少军,张辉,朱为民. 基因组学与应用生物学. 2009(01)
博士论文
[1]BBTV抗菌蛋白与血蓝蛋白抗菌肽的抑菌活性研究[D]. 庄军.福建农林大学 2015
[2]HBV、HCV、HIV-1荧光定量PCR检测体系的建立和应用[D]. 李桂民.东北师范大学 2011
[3]基于第二代测序技术的生后小鼠大脑发育的转录组研究及藓羽藻叶绿体基因组的测序分析和进化研究[D]. 徐玮.中国科学院北京基因组研究所 2011
硕士论文
[1]基于第二代高通量测序的荷花玉兰叶绿体全基因组研究[D]. 高欢欢.湖北中医药大学 2013
[2]病毒侵染对芥菜光合特性和抗氧化酶代谢的影响及其转病毒CP基因植株的获得[D]. 傅天珍.浙江大学 2006
本文编号：3334365
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１感染ＢＢＴＶ香蕉植株的外部病症．（庄军，２０１５）??Ａ，感病香蕉叶柄部“青筋”；Ｂ，健康香蕉叶柄部；Ｃ，生长滞缓感病株．??
?福建农林大学硕士专业学位论文???图１－２?ＬＳＶ感染百合的典型症状．（徐品三等，２０１４）??Ａ，健康百合叶绿体；Ｂ，感病百合叶绿体??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｔｙｐｉｃａｌ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?ＬＳＶ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｌｉｌｙ??Ａ，?Ｈｅａｌｔｈｙ?ｌｉｌｙ?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ．；Ｂ，Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ?ｌｉｌｙ?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ．??１．３实时荧光定量ＰＣＲ技术及其应用??１．３．１荧光定量ＰＣＲ原理??实时荧光定量ＰＣＲ技术简单的来讲就是在定量ＰＣＲ的基础上，将可见的??荧光基团加入扩增的反应体系之中，然后通过实时监测扩增过程，每收集到一个??焚光信号即表７Ｆ经过了一个循环过程。根据这个原理，在ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ结束之??后，可以获得对应的荧光扩增曲线，然后根据这条曲线可以对实验未知样本进行??定量分析。??在一般情况下，在ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ－ＰＣＲ中的扩增曲线主要包括三个重要时期：一??是荧光背景信号期，二是荧光信号指数增长期，三是荧光信号平台期（邵勤等，??２０１３）。在第一时期，扩增的荧光信号被掩盖，无法判断出目的基因产物量的实??时变化；在第二时期，可以很明显的看出扩増产物呈指数增长模式；在第三个时??期，产物停止增长。在扩增曲线中，ＰＣＲ的产物量只与第二时期的增长有线性??关系，即只有在荧光信号指数扩增的时期，产物量的对数值与起始模板量有线性??关系。因此，所谓的荧光定量ＰＣＲ分析主要是对指数增长阶段进行分析。??在实时荧光定量ＰＣＲ技术中，扩增产物的荧光信号超过所设定的阈值时所??经过的扩增循环次数被称为ＣＴ值。国内外研宄表明，在ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?Ｐ
?福建农林大学硕士专业学位论文???２．２结果与分析??ｍｍ?＞?＇．：??ｗ＾－?ｍ－??图２－１叶绿体电镜图．??Ａ，健康香蕉叶柄叶绿体；Ｂ，感染ＢＢＴＶ香蕉叶柄叶绿体．??Ｆｉｇ．２－１?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｇｒａｐｈ．??Ａ，?Ｐｅｔｉｏｌｅ?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ?ｏｆ?ｈｅａｌｔｈｙ?ｂａｎａｎａ?；??Ｂ，?Ｐｅｔｉｏｌｅ?ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ?ｏｆ?ｂａｎａｎａ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＢＢＴＶ．??在超薄透射电镜下观察到：Ｂ图中感染ＢＢＴＶ的香蕉叶柄叶绿体外膜严重受??损（黑色箭头）、叶绿体内部呈现空泡化（白色箭头）、基粒片层膨胀，叶绿体??基质排列稀疏，与Ａ图中呈现梭形完整的叶绿体形态形成鲜明的对比，得出结??论，ＢＢＴＶ侵染香蕉后其叶柄叶绿体的形态发现明显变化。??１５??
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于454 GS FLX高通量测序的四川山鹧鸪基因组微卫星特征分析[J]. 黄杰,周瑜,刘与之,朱丹,宋旭颢,陈本平,张修月,岳碧松. 四川动物. 2015(01)
[2]甘蓝枯萎病菌1号和2号生理小种的快速检测与鉴定[J]. 张吉祥,凌键,谢丙炎,杨宇红. 植物病理学报. 2014(06)
[3]百合无症病毒对百合光合生理、酶活性及叶绿体超微结构的影响[J]. 徐品三,贾娟,孙冰轮,姜旭. 植物病理学报. 2014(04)
[4]薄皮甜瓜叶色黄化突变体的农艺性状调查及红外光谱分析[J]. 邵勤,于泽源,李兴国,李为. 东北农业大学学报. 2013(07)
[5]苜蓿全基因组WRKY转录因子基因的分析[J]. 江腾,林勇祥,刘雪,江海洋,朱苏文. 草业学报. 2011(03)
[6]水稻氯离子通道蛋白基因的克隆及表达分析[J]. 康敏华,陈暖,杜喜玲,刘特,刘志学. 西北植物学报. 2011(04)
[7]荧光定量RT-PCR技术在评估肿瘤化疗敏感性中的应用进展[J]. 梁俊青,李碧丽,苏秀兰. 内蒙古医学院学报. 2010(03)
[8]基于高通量测序454 GS FLX的丹参转录组学研究[J]. 李滢,孙超,罗红梅,李西文,牛云云,陈士林. 药学学报. 2010(04)
[9]实时定量PCR技术研究DNA疫苗在小鼠体内的生物分布[J]. 付洁,李丁,夏绍友,宋海峰,董增祥,陈方,孙效,欧伦,汤仲明. 中国新药杂志. 2009(08)
[10]上海地区番茄黄化曲叶病毒病的鉴定及嫁接接种法研究[J]. 于力,朱龙英,万延慧,杨少军,张辉,朱为民. 基因组学与应用生物学. 2009(01)
博士论文
[1]BBTV抗菌蛋白与血蓝蛋白抗菌肽的抑菌活性研究[D]. 庄军.福建农林大学 2015
[2]HBV、HCV、HIV-1荧光定量PCR检测体系的建立和应用[D]. 李桂民.东北师范大学 2011
[3]基于第二代测序技术的生后小鼠大脑发育的转录组研究及藓羽藻叶绿体基因组的测序分析和进化研究[D]. 徐玮.中国科学院北京基因组研究所 2011
硕士论文
[1]基于第二代高通量测序的荷花玉兰叶绿体全基因组研究[D]. 高欢欢.湖北中医药大学 2013
[2]病毒侵染对芥菜光合特性和抗氧化酶代谢的影响及其转病毒CP基因植株的获得[D]. 傅天珍.浙江大学 2006
本文编号：3334365
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